1 Bolshakova L.S. birMilentiev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Federal Devlet Bütçe Yüksek Mesleki Eğitim Eğitim Kurumu “Orlovsky devlet enstitüsü ekonomi ve ticaret"

2 Federal Devlet Bütçe Kurumu "Kimyasallaştırma ve Tarımsal Radyoloji Merkezi "Orlovsky"

3 Federal Devlet Bütçeli Yüksek Mesleki Eğitim Eğitim Kurumu "Devlet Üniversitesi - Eğitim, Bilim ve Sanayi Kompleksi"

Gıda maddelerinin antioksidan aktivitesini değerlendirmek için kemilüminesans kullanma olasılığı araştırıldı. Önerilen yöntem, yoğunluğu kemilüminesan numunedeki peroksit miktarına bağlı olan bir alkali ortamdaki luminolün kemilüminesansına dayanmaktadır. Kemilüminesans, bir dozlama pompası, ışık geçirmez bir oda, bir cam vakumlu fotoçoğaltıcı tüp ve bir bilgisayar sistemi içeren gelişmiş bir kurulum kullanılarak kaydedildi. Kemilüminesansı arttırmak için, luminole bir potasyum ferrisiyanür çözeltisi ilave edildi. Kemilüminesans yoğunluğundaki değişiklikler, analiz edilen numunenin luminol çözeltisine eklenmesi anında kaydedildi. Analiz edilen örnek olarak kuru düşük sıcaklıkta damıtma ile elde edilen karahindiba özü kullanıldı. Yüksek antioksidan aktiviteleri ile bilinen fenolik bileşikler içerir. Çeşitli gıda bileşiklerinin antioksidan özelliklerini belirlemek için kemilüminesans yönteminin kullanılabileceği tespit edilmiştir.

Gıda maddelerinin antioksidan aktivitesini değerlendirmek için kemilüminesans kullanma olasılığı araştırıldı. Önerilen yöntem, yoğunluğu kemilüminesan numunedeki peroksit miktarına bağlı olan bir alkali ortamdaki luminolün kemilüminesansına dayanmaktadır. Kemilüminesans, bir dozlama pompası, ışık geçirmez bir oda, bir cam vakumlu fotoçoğaltıcı tüp ve bir bilgisayar sistemi içeren gelişmiş bir kurulum kullanılarak kaydedildi. Kemilüminesansı arttırmak için, luminole bir potasyum ferrisiyanür çözeltisi ilave edildi. Kemilüminesans yoğunluğundaki değişiklikler, analiz edilen numunenin luminol çözeltisine eklenmesi anında kaydedildi. Analiz edilen örnek olarak kuru düşük sıcaklıkta damıtma ile elde edilen karahindiba özü kullanıldı. Yüksek antioksidan aktiviteleri ile bilinen fenolik bileşikler içerir. Çeşitli gıda bileşiklerinin antioksidan özelliklerini belirlemek için kemilüminesans yönteminin kullanılabileceği tespit edilmiştir.

bibliyografik bağlantı

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentiev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. BESİN MADDELERİNİN ANTİOKSİDAN ÖZELLİKLERİNİN DEĞERLENDİRİLMESİ İÇİN KİMYASAL KULLANIMI // Akılcı beslenme, gıda katkı maddeleri ve biyostimülanlar. - 2014. - No. 6. - S. 36-37;
URL: http://journal-nutrition.ru/ru/article/view?id=283 (erişim tarihi: 17/12/2019). "Doğa Tarihi Akademisi" yayınevinin yayınladığı dergileri dikkatinize sunuyoruz.

Antioksidanlar (AO)- oksidasyonu önleyen maddeler. Canlı bir organizmada oksidasyonun önde gelen faktörü serbest radikallerin oluşumudur; bu nedenle, antioksidanların biyolojik sistemlerdeki etkisi, esas olarak organik maddelerin serbest radikaller tarafından oksidasyonunu önleme açısından düşünülür.

Şu anda, antioksidanları belirlemek için çok sayıda farklı yöntem vardır: fotometrik, kimyasal, elektrokimyasal, vb. Ancak bunların birçoğu, bu yöntemlerle elde edilen sonuçların anlaşılmasını ve daha fazla kullanılmasını zorlaştıran önemli dezavantajlara sahiptir. En yaygın dezavantajlar aşağıdakileri içerir:

• Antioksidan etkiyi ölçmek için biyolojik sistemler için yapay veya karakteristik olmayan koşullar kullanılır. Örneğin biyolojik serbest radikal reaksiyonları yerine tamamen kimyasal redoks reaksiyonları kullanılır veya bir maddenin elektrik akımına maruz kaldığında elektron verme/kabul etme yeteneği ölçülür. Bu koşullar altında elde edilen ölçümlerin sonuçları, test maddesinin vücutta aynı "antioksidan" etkiyi göstereceğini söylememize izin vermez.
• Antioksidan etkinin belirlenmesi, birikmiş oksidasyon ürünlerinin (oksidasyon belirteçleri) miktarı ölçülerek gerçekleştirilir. Bu nedenle, test örneğindeki antioksidan miktarını belirlemek gerçekten mümkündür, ancak antioksidanın aktivitesi hakkında çok önemli bilgiler gözden kaçmaktadır. Bir antioksidanın aktivitesinin göz ardı edilmesi, örneğin, yavaş ama uzun süre etki eden "zayıf" antioksidanlar için, miktarının belirlenmesinde önemli hatalara yol açabilir.

Genel olarak, antioksidan tayini alanında, farklı yöntemlerle elde edilen sonuçların karşılaştırılmasını mümkün kılan bir standardizasyon yoktur.

kemilüminesans yöntemi antioksidanları incelemek için en bilgilendirici yöntemdir ve bir dizi önemli avantajı vardır:

1. Antioksidan aktivitenin doğrudan belirlenmesi- antioksidanların serbest radikaller üzerindeki doğrudan etkisi kaydedilir. Kemilüminesan yöntem, bir kontrol kemilüminesan ışıma üreten bir kimyasal serbest radikal üretim sistemi kullanır. Daha sonra böyle bir sisteme, serbest radikalleri nötralize eden ve kontrol kemilüminesansının baskılanmasına yol açan bir antioksidan eklenir.
   Bu yaklaşımın önemli bir avantajı, antioksidanların özgüllüğünü ve etkilerinin lokalizasyonunu ek olarak belirlemeyi mümkün kılan, serbest radikallerin üretimi için çeşitli kimyasal sistemlerin kullanılması olasılığıdır.
2. Antioksidanların nicel ve nitel özelliklerinin ölçümü- kemilüminesan yöntem, antioksidan etkisi olan herhangi bir bileşiğin iki bağımsız gösterge ile karakterize edilmesini sağlar:
   • Anti-Oksidan Kapasitesi (AOE)- belirli bir hacimdeki numunede bulunan bileşiği nötralize edebilen toplam serbest radikal miktarı.
   • Antioksidan Aktivite (AOA)- serbest radikallerin nötralizasyon hızı, yani. birim zamanda nötralize edilen radikal sayısı.

kemilüminesans yöntemi antioksidanların etkisinin iki gösterge ile değerlendirilmesi gerektiği konusunda önemli bir anlayış sağlar - nicel (AOE) ve nitel (AOA).
Aşağıdaki şekil bu konumu göstermektedir:

Farklı antioksidanların kemilüminesans üzerindeki etkisi
(grafiklerin yanındaki sayılar antioksidan konsantrasyonunu gösterir):
solda - "güçlü" bir antioksidan, sağda - "zayıf" bir antioksidan.

Antioksidanlar aktivitelerinde önemli ölçüde farklılık gösterir. "Güçlü" antioksidanlar vardır, yani. serbest radikalleri yüksek oranda engelleyen ve kemilüminesansı tamamen engelleyen yüksek aktiviteye sahip antioksidanlar. Bu tür antioksidanlar, zaten düşük konsantrasyonlarda maksimum etkiye sahiptir ve hızla tüketilir. Öte yandan, "zayıf" antioksidanlar vardır, yani. serbest radikalleri düşük oranda engelleyen ve kemilüminesansı sadece kısmen baskılayan düşük aktiviteye sahip antioksidanlar. Bu tür antioksidanlar sadece yüksek konsantrasyonlarda önemli bir etkiye sahiptir, ancak yavaş tüketilirler ve uzun süre etki ederler.

Kemilüminesan yöntem, antioksidan parametreleri belirlemek için kullanılabilir:

• biyolojik sıvılar (plazma, tükürük, idrar);
• farmakolojik müstahzarlar ve biyolojik olarak aktif katkı maddeleri;
• içecekler ve gıda katkı maddeleri;
• kozmetik ve bakım ürünleri;
• ve benzeri.

Antioksidanların belirlenmesi için kemilüminesan yöntemi uygulamak için aşağıdaki ekipmanın kullanılması önerilir:

• Chemiluminometer Lum-100 - 1 numunenin kemilüminesansının sıcaklık kontrolünü ve kaydını sağlar.
• Chemiluminometer Lum-1200 - sıcaklık kontrolü ve 12 örneğe kadar kemilüminesansın eşzamanlı kaydını sağlar.

], bununla birlikte, antioksidanların tanımı şu şekildedir: kimyasal bileşikler incelenen nesnenin koruyucu özelliklerinin tam bir resmini vermez: bunlar sadece bir veya daha fazla antioksidan miktarı ile değil, aynı zamanda her birinin aktivitesi ile belirlenir. Antioksidan aktivite veya antioksidan aktivite, AOA, bir antioksidanın bir serbest radikal (kInH) ile reaksiyonu için hız sabitidir. Kemilüminesans (CL) yöntemi, bir numunede antioksidanların bağladığı toplam radikal miktarını (toplam antioksidan kapasitesi, TAU) ve yöntemi kullanırken belirlemeyi mümkün kılar. matematiksel modelleme CL kinetiği - ayrıca radikallerin antioksidanlarla, yani AOA ile oluşum ve reaksiyon hızı [ , , ].

Toplam antioksidan kapasiteyi belirlemek için kemilüminesan yöntemin en yaygın modifikasyonu, bir kemilüminesans aktivatörü olarak luminolün kullanımına dayanmaktadır [ , , , ]. Kemilüminometrenin hücresine luminol, hidrojen peroksit ve bunun sonucunda radikal oluşturabilen bir bileşik eklenerek bir numune yerleştirilir. kendiliğinden bozulma(termoliz), örneğin 2,2'-azobis-(2-amidinopropan) dihidroklorür (ABAP): ABAP → 2R. Moleküler oksijen varlığında, alkil radikali R, bir peroksil radikali oluşturur ROO : R + O 2 → ROO . Ayrıca, peroksil radikali kemilüminesan prob luminolünü (LH 2) oksitler ve luminol radikali (LH ) oluşur: ROO + LH2 → ROOH + LH. LH'den, ara ürünlerin (luminol hidroperoksit ve luminol endoperoksit) oluşumu yoluyla, luminol oksidasyonunun son ürünü olan aminoftalik asidin bir molekülü, bir foton yayan elektronik olarak uyarılmış bir durumda oluşur ve sonuç olarak kemilüminesans gözlenir. . CL yoğunluğu foton üretim hızıyla orantılıdır ve bu da sistemdeki sabit LH konsantrasyonuyla orantılıdır. Radikallerle etkileşime giren antioksidanlar, açıklanan dönüşüm zincirini keser ve bir foton oluşumunu engeller.

Bir numunenin antioksidan kapasitesinin kemilüminesans yöntemiyle analizinde, termolize tabi bileşikler tek olası radikal kaynağı değildir. Alternatifler, yaban turpu peroksidaz-hidrojen peroksit [ , ], hemin-hidrojen peroksit, sitokrom sistemleridir. İle birlikte–kardiyolipin–hidrojen peroksit, vb. Peroksidazlar tarafından luminol oksidasyonunun reaksiyonlarının şeması Cormier ve ark. .

Bu sistemler için CL kinetik eğrileri, reaksiyonun iki aşamasını yansıtır: CL yoğunluğundaki bir artış aşaması ve bir plato aşaması ya da CL yoğunluğu sabit olduğunda ya da yavaşça azaldığında lüminesansta kademeli bir azalma aşaması. Makale, eğrilerin bu özelliğini hesaba katan toplam antioksidan kapasitesini ölçmek için iki yaklaşımı açıklamaktadır. TRAP (Toplam Reaktif Antioksidan Potansiyeli) yöntemi, CL'nin latent periyodunun ölçülmesine dayanır. τ ve trolox veya askorbik asit gibi antioksidanları belirlemek için kullanılabilirler: radikallerle reaksiyon hızı sabitinin yüksek değeri ile karakterize edilirler ve bu nedenle güçlü antioksidanlar olarak adlandırılabilirler. Gizli dönemde, tam oksidasyonları meydana gelir. TAR yöntemi (Toplam Antioksidan Reaktivitesi), kemilüminesansın söndürülme derecesini ölçer. q platoda veya kemilüminesan eğrinin maksimumunda: formül, burada I bir antioksidan olmadan kemilüminesans yoğunluğudur ve I 1, bir antioksidan varlığında CL'nin yoğunluğudur. Bu yöntem, sistem, luminol sabitine kıyasla çok daha düşük, radikallerle etkileşimin düşük oran sabitlerine sahip ağırlıklı olarak zayıf antioksidanlar içeriyorsa kullanılır.

Antioksidanların etkisi sadece göstergelerle değil τ ve q. [ , ]'den de görülebileceği gibi, sitokromdaki hemin-H2O2-luminol veya tokoferol, rutin ve kersetin sistemlerinde ürik asit gibi antioksidanların etkisi İle birlikte–kardiolipin–H 2 O 2 –luminol, maksimum CL yükselme hızındaki bir değişiklikle karakterize edilir ( vmax). Kinetiğin matematiksel modelleme sonuçlarının gösterdiği gibi, bu antioksidanların radikallerle etkileşiminin hız sabitlerinin değerleri luminol sabitinin değerine yakındır, bu nedenle bu tür antioksidanlara orta kuvvette antioksidanlar denilebilir.

İncelenen materyal, özellikle bitkisel hammaddeler, yalnızca bir tür antioksidan içeriyorsa, içerikleri yukarıda listelenen üç göstergeden biri ile karakterize edilebilir ( τ , q veya vmax). Ancak bitki hammaddeleri, farklı güçlerde antioksidanların bir karışımını içerir. Bu sorunu çözmek için bazı yazarlar [ , , , ] için kemilüminesans ışık toplamındaki değişikliği kullandılar. kesin zaman∆S formülüyle hesaplanır, burada ∆ S0 ve ∆ S S- Belirli bir süre için CL ışık toplamları t sırasıyla kontrol ve test numunelerinde. Sistemdeki tüm antioksidanların oksidasyonu için, yani test örneğinin CL eğrisinin kontrol örneğinin CL eğrisinin seviyesine ulaşması için süre yeterli olmalıdır. Sonuncusu, araştırmacıların yalnızca lüminesans ışık toplamını değil, aynı zamanda her zaman yapılmayan, yeterince uzun bir süre için CL kinetik eğrisini de kaydetmeleri gerektiğini öne sürüyor.

Ölçülen tüm göstergeler cihaza ve ölçüm koşullarına bağlı olduğundan, çalışılan sistemdeki bir maddenin antioksidan etkisi genellikle standart olarak alınan bir antioksidanın, örneğin Trolox [ , ] ile karşılaştırılır.

Yaban turpu peroksidaz-hidrojen peroksit sistemi, birçok yazar tarafından bitki materyallerinin toplam antioksidan kapasitesini analiz etmek için kullanılmıştır. [ , ] çalışmalarında numunelerdeki antioksidan miktarını tahmin etmek için CL'nin latent periyodu (TRAP yöntemi) kullanılmış ve çalışmalarda [ , , ] CL gelişim eğrisinin altındaki alan kullanılmıştır. Bununla birlikte, listelenen çalışmalar, TAU'yu tahmin etmek için bir veya başka bir parametrenin seçilmesi için net bir gerekçe sağlamamaktadır.

Çalışmanın amacı, çeşitli tiplerdeki antioksidanların oranının TAU'yu nasıl etkilediğini belirlemek ve bitkisel materyallerde TAU'yu daha doğru bir şekilde belirleyebilecek şekilde kemilüminesans yöntemini modifiye etmektir. Bunu yapmak için kendimize birkaç görev belirledik. İlk olarak, çalışılan nesnelerin TAE'sine ana katkıyı hangi tip antioksidanların yaptığını anlamak için, çalışılan nesnelerin CL kinetiğini üç tipteki (güçlü, orta ve zayıf) standart antioksidanların kinetikleri ile karşılaştırmak. İkinci olarak, TAC'ye en büyük katkıyı sağlayan antioksidanın etkisine kıyasla bu nesnelerin etkisi altındaki CL ışık toplamındaki azalmayı ölçerek çalışılan nesnelerin RAE'sini hesaplamak.

MALZEMELER VE YÖNTEMLER

Çalışmanın nesneleri, Krasnogorskleksredstva JSC (Rusya) tarafından üretilen alıç, üvez ve yabani gül meyvelerinin yanı sıra yazarlar tarafından Moskova bölgesinde doğal büyüme koşulları altında toplanan ve bir sıcaklıkta kurutulan ahududu meyvelerinin endüstriyel örnekleriydi. 60–80 °C'ye kadar meyve suyu ve basınç deformasyonu çıkarmayı durdurun.

Kemilüminesan yöntemle antioksidan kapasite analizi için reaktifler şunlardı: KH 2P04 , 20 mM tampon çözelti(pH 7.4); yaban turpu köklerinden peroksidaz (aktivite 112 U/mg, M = 44 173.9), 1 mM sulu çözelti; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindion, 3-aminoftalik asit hidrazid, M=177.11), 1 mM sulu çözelti; hidrojen peroksit (H202, M = 34.01), 1 mM sulu çözelti; antioksidan çözeltileri (askorbik asit, kuersetin, tokoferol). Tüm reaktifler Sigma Aldrich (ABD) tarafından üretilmiştir.

Alıç, üvez ve yabani gül meyvelerinin kaynatmaları ve ahududu meyvelerinin infüzyonu, genel farmakope makalesi "İnfüzyonlar ve kaynatmalar" bölümünde belirtilen SSCB Devlet Farmakopesi metodolojisine göre hazırlandı.

Toplam antioksidan kapasitesi, PowerGraph 3.3 yazılımı kullanılarak bir Lum-100 kemilüminometre (DISoft, Rusya) üzerinde kemilüminesans kaydederek belirlendi. Bitki hammaddelerinde TAU'yu belirlemek için, 1 mM konsantrasyonda 40 µl luminol, 0.1 µM konsantrasyonda 40 µl yaban turpu peroksidaz, 10 ila 50 µl kaynatma veya infüzyon (konsantrasyona bağlı olarak) ve fosfat tamponu toplam numune hacmini 1 ml'ye getirmek için gereken miktarda. Küvet cihaza yerleştirildi ve arka plan sinyali gözlenerek CL kaydedildi. Arka plan sinyalinin 48 saniye kaydedilmesinin ardından, küvete 1 mM konsantrasyonda 100 ul H2O2 ilave edildi ve CL kaydına 10 dakika devam edildi. Bitki nesnelerinin her birinin farklı konsantrasyonları ile dört numune hazırlandı. CL ayrıca her bir antioksidan için beş farklı konsantrasyonda askorbik asit, kersetin ve tokoferol çözeltileri için kaydedildi. Daha sonra, kaynatma ve infüzyon örneklerinin TAU'su kersetin için yeniden hesaplandı.

Şifalı bitki materyallerinden sulu ekstraktların antioksidan kapasitesini makul bir sürede (10 dakikadan fazla olmayan) belirlemek için luminol, yaban turpu peroksidaz ve hidrojen peroksit konsantrasyonları seçildi. Bu süre boyunca, antioksidanlar askorbat ve flavonoid kersetin (bitki materyallerinin ana antioksidanları) için kemilüminesans eğrileri, sistemdeki antioksidanların tamamen yok edildiğini gösteren bir platoya ulaştı. Çalışılan numunelerin dilüsyonları ve standart antioksidanların (şekillerin alt yazılarında belirtilmiştir) çözeltilerinin konsantrasyonları, tüm CL kinetik eğrilerinin aynı cihaz duyarlılığında ölçüleceği şekilde seçilmiştir.

Antioksidan kapasitesi alan değişikliğinden hesaplandı (∆ S) bir antioksidan içeren bir maddenin eklenmesiyle kemilüminesansın (ışık toplamı) kinetik eğrisi altında. Bunun için saydık S0 antioksidan içermeyen sistem için ve ondan alan çıkarılır S S antioksidanın eklendiği sistemi karakterize eder. ∆ değer S kemiluminometrenin hassasiyetine ve ölçüm koşullarına bağlıdır. oran ∆ S/C V(nerede C- küvette çalışılan biyolojik materyalin konsantrasyonu, g/l ve V- küvet hacmi, l) 1 g çalışılan materyalin, yani bitki materyallerinin antioksidan kapasitesini ifade eder.

Antioksidan kapasite ∆ SA reaksiyon karışımının aynı hacmine yerleştirilmiş kersetin gibi standart bir antioksidan çözeltisi. oran ∆ S A / C A V(nerede CA- küvetteki antioksidanın ağırlık konsantrasyonu, g/l) 1 g antioksidanın antioksidan kapasitesini ifade eder.

Standart antioksidanların her biri için, hesaplamaların doğrusal bir ilişki sınırları içinde yapıldığından ve elde edilen sonuçların tekrarlanabilir olduğundan emin olmak için çeşitli konsantrasyonlardaki çözeltilerden bir sinyal kaydedildi. Gerçekten de, doğrusal bir bağımlılık elde edildi (∆ SA = k A C A) hesaplanan konsantrasyondan gelen sinyal stokiyometrik katsayı k bir. Fisher kriterine göre standart antioksidanlar için elde edilen değerler k bir 0.975 olasılıkla istatistiksel olarak anlamlı. Daha sonra, dört bitki örneğinin her biri için dört konsantrasyondan gelen sinyal kaydedildi ve elde ettiğimiz tüm örnekler için doğrusal bağımlılık konsantrasyon sinyali (∆ S = kC), stokiyometrik katsayısını hesaplamak için kullanıldı k. 0.975 (Fischer testi) olasılığı ile bitki örnekleri için elde edilen k değerleri istatistiksel olarak anlamlıdır. Standart antioksidanın ağırlığına göre bitki materyalinin toplam antioksidan kapasitesi (%mg) formülü kullanılarak bulunmuştur.

Değerler p'de aritmetik ortalama ± standart sapma (M ± δ) olarak sunuldu

ÇALIŞMANIN SONUÇLARI

Sodyum askorbat varlığında kemilüminesans kinetiğinin incelenmesi (Şekil 1. Sodyum askorbatın kemilüminesans kinetiği üzerindeki etkisi" data-note="Sistem bileşenlerinin konsantrasyonları: luminol - 40 µM, yaban turpu peroksidaz - 4 nM, hidrojen peroksit - 100 µM. Eğriler: 1 - kontrol numunesi; 2 - 0,05 µM; 3 - 0,10 µM; 4 - 0,15 µM; 5 - 0,2 µM; 6 - 0,25 µM sodyum askorbat Antioksidan, CL'nin neredeyse tamamen baskılandığı gizli bir dönem ile karakterize edilir.Süresi sistemdeki antioksidan miktarı ile orantılıdır.Aynı zamanda ne CL eğrilerinin eğimi ne de platodaki CL yoğunluğu değişir.Bunun nedeni askorbik asidin tüm radikalleri kesen güçlü bir antioksidan olmasıdır. luminol radikalleri de dahil olmak üzere sistemde oluşur ve tüm askorbat oksitlenene kadar CL gelişmez.

Diğer araştırmacılar da sonuçların kimyasal analiz ve kemilüminesan yöntemle belirlenen TAU değeri genellikle eşleşmez. Çalışmada, peroksidaz-luminol-hidrojen peroksit sisteminde belirlenen toplam antioksidan kapasitesi, triterpen bileşiklerinin içeriği ile koreledir. Bununla birlikte, aynı yazarların, başka bir bitkinin çalışma konusu olduğu çalışmasında, TAU ile flavonoidler dahil herhangi bir madde grubunun içeriği arasında bir ilişki gözlenmedi.

Bu tutarsızlıklar en az üç faktörle ilgilidir. Birincisi, antioksidanların aktivitesi, yani bitki örneğini oluşturan farklı antioksidanlar için farklı olan radikallerle etkileşim hızı önemlidir. Izmailov'a göre, mexidol, tokoferol ve kersetin için karşılık gelen reaksiyonların hız sabitleri 0.04: 2: 60 olarak koreledir. İkincisi, her antioksidan molekülü, Kimyasal reaksiyon, farklı sayıda radikali yakalayabilir. Çalışmaya göre, kersetin, ürik ve askorbik asitler, reaksiyona giren antioksidan molekül başına sırasıyla 3.6 ± 0.1, 1.4 ± 0.1 ve 0.5 ± 0.2 radikali engelledi (hemin–H 2 O 2 sistemi kullanıldı). - luminol). Üçüncüsü, çalışmanın sonuçları, işte olduğu gibi bitki örneklerinde peroksidaz aktivitesinin varlığından ve ayrıca çalışmada gösterildiği gibi, örneklerde kalsiyumun varlığından etkilenebilir. belirli koşullar altında yaban turpu peroksidazının aktivitesi. Bu genellikle platoda kontrol eğrilerinden daha yüksek bir CL yoğunluğuna neden olur, ancak bunu gözlemlemedik.

İlk faktör, ışık toplamındaki bir değişiklik gibi bir parametrenin kullanımını keskin bir şekilde sınırlar, çünkü kemilüminesans ölçüm süresi, test numunesindeki tüm antioksidanların tüketim zamanından daha uzun olmalıdır. Bu anın yaklaşımı ancak kemilüminesans kinetiği ölçülerek değerlendirilebilir. Ek olarak, tam oksidasyon süreleri kabul edilebilir ölçüm süresinden (10-20 dakika) çok daha uzun olduğundan, zayıf antioksidanların OAE'ye katkısı keskin bir şekilde hafife alınmaktadır.

Daha da önemli olan, antioksidanın stokiyometrik katsayısıdır. radikal sayısı n, onun tarafından durduruldu, eşittir , nerede ρ - stokiyometrik katsayı ve ∆ m- bizim durumumuzda, ölçüm sırasında antioksidan konsantrasyonundaki değişiklik - test numunesindeki test maddesinin ilk konsantrasyonu.

Bir antioksidanın yokluğunda ve varlığında ışımanın ışık toplamındaki fark, aşağıdakilerle orantılıdır: n. Yakalanan radikallerin toplam sayısı, burada ρ ben belirli bir antioksidanın stokiyometrik katsayısıdır ve ben- ölçüm sırasında konsantrasyonu. Katsayılar nedeniyle, yakalanan radikallerin toplam sayısı, toplam antioksidan miktarına eşit değildir. ρ ben sadece birliğe eşit olmakla kalmaz, aynı zamanda farklı antioksidanlar için de önemli ölçüde farklılık gösterir.

Değer n antioksidan içeren bir numune ile antioksidan içermeyen bir kontrol numunesi arasında belirli bir süre boyunca ölçülen hafif toplamlardaki farkla orantılıdır: S = kn, nerede k- katsayı, aynı ölçüm koşulları altında sabit.

Makalede ele alınan yöntem, toplam antioksidan kapasitesinin belirlenmesine izin verirken, kimyasal analiz, üründeki toplam antioksidan içeriğinin belirlenmesine izin verir. Bu nedenle, kemilüminesans yöntemi, kimyasal analizlerden daha bilgilendirici görünmektedir.

Yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ve luminolden oluşan bir sistemde kemilüminesans kinetiğini kaydederek bitki hammaddelerinin toplam antioksidan kapasitesini değerlendirmek için seçtiğimiz koşullar (bileşen konsantrasyonları sırasıyla 4 nM, 100 μM ve 40 μM'dir; 20 mM fosfat tamponu, pH 7.4), güçlü antioksidanların (askorbik asit) ve orta düzeyde antioksidanların (kersetin) 10 dakikada oksidasyonunu sağladı. Bu ölçüm süresi uygundur ve gerekli ölçüm kalitesini sağlar.

Kemilüminesans kinetiğinin bir analizi, incelenen nesnelerde (üvez, yabani gül, alıç meyveleri ve ahududu meyvesi infüzyonu), ana antioksidanların flavonoidler dahil orta güçlü antioksidanlar ve zayıf güçlü antioksidanlar (tokoferol vb.) olduğunu göstermiştir. ). Kemilüminesans ışık toplamındaki azalmaya dayanarak, incelenen nesneler için toplam antioksidan kapasitesi hesaplandı. Elde edilen TAU değerlerinin kimyasal analiz sonuçlarıyla karşılaştırılması, farklı oranlarda aynı miktarda antioksidan içeren ürünlerin vücudu etkili bir şekilde koruma yeteneklerinde farklılık gösterebileceğini göstermiştir. zararlı etkiler serbest radikaller. Tarif edilen teknik, çeşitli antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerini incelemek için umut vericidir. Aynı zamanda, basitlik ve düşük araştırma maliyeti ile karakterizedir. Kemilüminesans kinetiğinin ölçümünün reaksiyonların matematiksel modellemesi ile birleştirilmesi yalnızca TAU belirleme sürecini otomatikleştirmekle kalmayacak, aynı zamanda bireysel antioksidan gruplarının göstergeye katkısını da belirleyecektir.

mezuniyet çalışması

1.4 Antioksidanlar için araştırma yöntemleri

antioksidan aktivite sınıflandırılır: tezahür eden AOA'nın kayıt yöntemlerine göre (hacimsel, fotometrik, kemilüminesan, floresan, elektrokimyasal); oksidasyon kaynağının türüne göre; oksitlenmiş bileşik tipine göre; oksitlenmiş bileşiği ölçme yöntemine göre.

Bununla birlikte, antioksidan aktiviteyi belirlemek için en iyi bilinen yöntemler şunlardır:

1 TEAC (trolox eşdeğer antioksidan kapasitesi): yöntem aşağıdaki reaksiyona dayanmaktadır:

Metmiyoglobin + H 2 O 2 > Ferrilglobin + ABTS > ABTS * + AO.

Trolox Eşdeğerlik Metodu (TEAC), antioksidanların 2,2-azinobis radikal katyonlarını (ABTS) azaltma ve böylece spektrumun uzun dalga boyu kısmında (600 nm) absorpsiyonu engelleme yeteneğine dayanır. Yöntemin önemli bir dezavantajı, bir radikal elde etmenin iki aşamalı reaksiyonudur. Bu, analiz için standart bir reaktif seti kullanılmasına rağmen analiz süresini uzatır ve sonuçların dağılımını artırabilir.

2 FRAP (antioksidan gücü azaltan demir): yöntem aşağıdaki reaksiyona dayanmaktadır:

Fe(III)-Tripiridiltriazin+AO>Fe(II)-Tripiridiltriazin.

Demir azaltıcı/antioksidan kapasitesi (FRAP). Burada Fe(III)-tripiridiltriazinin Fe(II)-tripiridiltriazine indirgeme reaksiyonu kullanılır. Ancak bu yöntem glutatyon gibi bazı antioksidanları belirleyemez. Bu yöntem, düşük moleküler ağırlıklı antioksidanların doğrudan belirlenmesine izin verir. Düşük pH'da, Fe(III) tripiridiltriazin kompleksinin Fe(II) kompleksine indirgenmesine, yoğun bir mavi rengin görünümü eşlik eder. Ölçümler, antioksidanların reaksiyon karışımında üretilen reaksiyon partiküllerinin oksidatif etkisini baskılama yeteneğine dayanmaktadır. Bu yöntem, uygulamada basit, hızlı ve düşük maliyetlidir.

3 ORAC (oksijen radikali absorbans kapasitesi): yöntem aşağıdaki reaksiyona dayanmaktadır:

Fe (II) + H 2 O 2 > Fe (III) + OH * + AO> OH * + Luminol.

Oksijen radikallerini (ORAC) emme yeteneğinin belirlenmesi. Bu yöntemde, ROS ile etkileşiminin bir sonucu olarak ortaya çıkan substratın (fikoeritrin veya floresein) floresansı kaydedilir. Test örneğinde antioksidanlar varsa, kontrol örneğine kıyasla floresanda bir azalma gözlenir. Bu yöntem ilk olarak 1992 yılında Ulusal Yaşlanma Enstitüsü'nde Dr. Guohua Cao tarafından geliştirilmiştir. 1996 yılında Dr. Cao, yarı otomatik bir yöntemin kullanıldığı USDA Yaşlanma Araştırma Merkezi'nde Dr. Ronald Pryer ile ortak bir gruba katıldı. gelişmiş.

4 TRAP (toplam radikal tutucu antioksidan parametresi): yöntem aşağıdaki reaksiyona dayanmaktadır:

AAPH+AO>AAPH* + PL (PE).

Bu yöntem, antioksidanların peroksil radikali 2,2-azobis(2-amidinopropan) dihidroklorür (AAPH) ile etkileşime girme yeteneğini kullanır. TRAP modifikasyonları, analitik bir sinyalin kaydedilmesi için yöntemlerden oluşur. Çoğu zaman, analizin son aşamasında, AAPH peroksi radikali bir lüminesan (luminol), floresan (diklorofloresein diasetat, DCFH-DA) veya diğer optik olarak aktif substrat ile etkileşime girer.

Suda çözünür E vitamini türevi Trolox (6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametilkroman-2-karboksi asit) TEAC, ORAC ve TRAP yöntemleri için standart olarak kullanılmaktadır.

Son zamanlarda, antioksidan aktivitenin değerlendirilmesi için kullanımına ilgi artmıştır. elektrokimyasal yöntemler. Bu yöntemler analizde oldukça hassas ve hızlıdır.

Bazılarının antioksidan aktivitesinin değerlendirilmesi Gıda Ürünleri enol (-OH) ve sülfhidril (-SH) grupları nedeniyle redoks reaksiyonlarına katılmak için antioksidan maddelerin özelliklerinin kullanımına dayanan potansiyometri yöntemi ile gerçekleştirilir.

Çözeltilerin antioksidan özelliklerinin belirlenmesi, kimyasal etkileşim redoks potansiyelinde bir değişikliğe yol açan bir aracı sistemli antioksidanlar. Elektrokimyasal hücre, bir K-Na-fosfat tampon çözeltisi, bir Fe(III)/Fe(II) aracı sistemi ve redoks potansiyelini ölçmeden önce karmaşık bir elektrot içeren bir kaptır. Antioksidan aktivite g-eq/l olarak tahmin edilmektedir.

Antioksidan aktiviteyi belirlemek için amperometrik yöntem, ölçüme dayanmaktadır. elektrik akımı belirli bir potansiyelin altındaki çalışma elektrotunun yüzeyinde test maddesinin oksidasyonundan kaynaklanır. Amperometrik yöntemin duyarlılığı, hem çalışma elektrotunun doğası hem de ona uygulanan potansiyel tarafından belirlenir. Polifenollerin, flavonoidlerin amperometrik dedektörünün tespit limiti, nano-pikogramlar seviyesindedir, bu kadar düşük konsantrasyonlarda, farklı antioksidanların ortak mevcudiyetlerinde, özellikle sinerjizm olgusunun tezahüründe karşılıklı etkisinin daha düşük bir olasılığı vardır. . Yöntemin dezavantajları, özgüllüğünü içerir: bu koşullar altında, oksijen elektro-indirgeme potansiyelleri bölgesinde kendileri oksitlenen veya indirgenen antioksidanlar analiz edilemez. Yöntemin avantajları arasında hızlılığı, prostatı ve duyarlılığı sayılabilir.

Elektrojene oksidanlar kullanan galvanostatik kulometri yöntemi - yöntem, yağda çözünen antioksidanların analizine uygulanabilir.

Askorbik asit tayini için çeşitli yöntemler geliştirilmiştir:

basit bir çözeltiye daldırma yöntemiyle bir nikel(II) hekzasiyanoferrat filmi ile modifiye edilmiş bir alüminyum elektrot kullanan bir amperometrik yöntem;

Wawel reaktifi ile modifiye edilmiş silisik asit kserojel ve bir gösterge tozu olarak bakır (II) kullanılarak askorbik asidin katı faz spektrofotometrik ve görsel test tayini için bir yöntem;

askorbik asidin kemilüminesan tayini, rodamin B'nin bir sülfürik asit ortamında seryum (IV) ile kemilüminesan reaksiyonuna göre akış-enjeksiyon yöntemiyle gerçekleştirilebilir.

sulu ve sulu-organik ortamlarda anodik voltametri ile 10 -8 -10 -3 g/cm3 aralığında askorbik asit tayini.

En yaygın olanı, ekspres olduğu için oldukça hassas olan FRAP yöntemidir. Son birkaç on yılda, FRAP yöntemiyle antioksidan aktiviteyi belirlemek için çok sayıda yöntem geliştirilmiştir (tablo 1).

Tablo 1 FRAP yönteminin geliştirilmesi ve çeşitli nesnelerin antioksidan aktivitesini belirlemek için uygulanması

				Analiz nesneleri	Notlar
				kan plazması	t=4dk. Reaksiyon stokiyometrisi ve toplanabilirlik çalışıldı.
				Çay, şarap	Polifenollere bağlı AOA tayini
					Farklı çay türlerinin AOA değerleri karşılaştırılır
Pulido, Bravo, Saura-Calixto				Model çözümleri	t=30dk. Susuz çözücünün etkisi ortaya çıktı
				Bitkiler
				kan, doku	PIA yöntemi. Yabancı maddelerin etkisi kontrol edildi.
Firuzi, Lacanna, Petrucci e.a.				Model çözümleri	Yapılarının ve redoks potansiyellerinin bir fonksiyonu olarak farklı AO'ların belirlenmesinin duyarlılığı incelenmiştir.
Katalinik, Milos,				Çeşitli şaraplar
Temerdaşev, Tsyupko ve diğerleri.				Model karışımları
Loginova, Konovalova				İlaçlar. Hazırlıklar	test metodu
Temerdaşev, Tsyupko ve diğerleri.				Kırmızı kuru şaraplar	AOA'nın diğer şarap kalitesi göstergeleri ile korelasyonu
Tablo 1 devamı
				Model karışımları	Farklı AO belirleme hassasiyeti
Vershinin, Vlasova, Tsyupko				Model karışımları	Oksitleyici bir ajan eksikliği ile sinyalin katkısızlığı ortaya çıktı
Anisimovich, Deineka ve diğerleri.				Model çözümleri	AOA tahmini için kinetik parametreler önerilmiştir.

Notlar: geleneksel olarak etiketlenmiş: FIA-akış-enjeksiyon analizi, TPTZ-tripiridiltriazin, DIP-2,2, -dipiridil, PHEN-o-fenantrolin, DPA-piridindikarboksilik asit, FZ-ferrozin, AA-askorbik asit, CT-katekol, t - maruz kalma süresi, min.

Sulu çözeltilerde proteinler ve polielektrolitler arasındaki etkileşim

Protein-polielektrolit komplekslerini karakterize etmek için çeşitli analiz yöntemleri kullanılır. Enstrümantal yöntemler, yapısal ve optik özellikler hakkında bilgi sağlamanın yanı sıra PEC bağlanmasının dinamiklerini ve doğasını belirler...

d-Metal Bileşiklerinin Bipolar Zarda Bir Su Molekülünün Ayrışma Hızı Üzerindeki Etkisi

Yeni BPM'leri sentezleme sürecinde, sentezlenen membranların elektrokimyasal özelliklerinin iyileştirilmesini sağlayan sonraki sentez koşulları seçimi için elde edilen numunelerin özelliklerinin incelenmesine çok dikkat edilmelidir...

Tasarımcı ilaçlar ve sentetik kannabinoidler

Bitkisel karışımlarda sentetik kannabinoidlerin tespiti kromatografi-kütle spektrometrisi, gaz, ince tabaka ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi gibi çeşitli fizikokimyasal yöntemlerle yapılabilmektedir.

Tıbbi bitki materyallerinde flavonoidlerin belirlenmesi için bir yöntemin geliştirilmesi

Kinolinonlar-2'nin sentezi ve farmakolojik özellikleri

Çalışmanın amacı: Quinolinone-2. Araştırma Yöntemi: Kullanma bilgisayar programı"Marvin JS", maddenin yapısı oluşturuldu. Daha sonra, daha fazla araştırma için "http://www.way2drug.com/PASSOnline/predict.php" sitesine gönderildi...

Bir Epoksi Polimerin Buharlaşma Ürünlerini İncelemek için Termospektral Yöntem

Kabuklu kabuklarından yüksek oranda saflaştırılmış kitosan elde etme teknolojisi

Kitosanın moleküler ağırlığının belirlenmesi Kitosanın moleküler ağırlığı, standart yönteme göre viskometrik olarak belirlendi. 0,05 ve 0,5 g/dl konsantrasyonlu çözeltiler, polimer tozunun tartılmış bir kısmının bir asetat tamponu (0...

Tabiat parkı topraklarının fiziksel ve coğrafi özellikleri

anahtar kelimeler

serbest radikal/antioksidan/ antioksidan aktivite / toplam antioksidan kapasite / kemilüminesans/ luminol / serbest radikal / antioksidan / antioksidan aktivite / toplam antioksidan kapasite / kemilüminesans / luminol

dipnot kimya bilimlerinde bilimsel makale, bilimsel makalenin yazarı - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Tıbbi bitki materyalleri, insan vücudu için antioksidan kaynaklarından biridir. Bitki nesnelerindeki antioksidanların içeriğini belirleme yöntemleri arasında kemilüminesans analiz yöntemi yaygındır. Mevcut çalışmada, tahmin etmek için kullanılmıştır. toplam antioksidan kapasite(OAU) üvez, yabani gül ve alıç meyvelerinin kaynaşmaları ve ahududu meyvelerinin infüzyonu. Kinetik deneyde kaydedildi kemilüminesans yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ve luminolden oluşan bir sistemde. Örnekteki sistem bileşenlerinin konsantrasyonları ve hacimleri, ölçüm süresi (10 dakika) sırasında güçlü antioksidanlar (askorbik asit) ve orta derecede güçlü antioksidanlar (kersetin) tamamen oksitlenecek şekilde seçilmiştir. Işık toplamındaki bir değişikliğe dayalı olarak TAU'nun hesaplanması için bir yöntem önerilmiş ve gerekçelendirilmiştir. kemilüminesans bitki örneklerinin varlığında. kinetik analiz kemilüminesans incelenen nesnelerde flavonoidler dahil orta kuvvette antioksidanların ve zayıf antioksidanların (tokoferol vb.) baskın olduğunu gösterdi. İncelenen nesneler için hesaplanan TAU değerlerinin ve kimyasal analizlerinin verilerinin karşılaştırılması, türlere göre farklı oranlarda aynı miktarda antioksidan içeren ürünlerin, vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerinden koruma yeteneklerinde farklılık gösterebileceğini göstermiştir. Tarif edilen teknik, çeşitli tiplerde antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerinin incelenmesi için umut vericidir.

İlgili konular kimya bilimlerinde bilimsel makaleler, bilimsel makalenin yazarı - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

• 2016 / Georgiy Vladimirov, Sergunova E.V., Izmaylov D.Yu., Vladimirov Yu.A.

• 2,2"-azo-bis(2-amidinopropan) kullanılarak aktive edilmiş kemilüminesans ile antioksidanların belirlenmesi

  2012 / Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.

• Sitokrom c tarafından katalize edilen peroksidaz reaksiyonlarında dihidrokersetin ve rutinin antioksidan etkisi

  2008 / Demin E.M., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.

• Fenton reaksiyonunun neden olduğu kemilüminesans ile biyolojik substratların oksidatif ve antioksidan kapasitesinin değerlendirilmesi

  2016 / Piskarev İgor Mihayloviç, I.P. İvanova

• Mikroperoksidaz-luminol sistemi kullanılarak kan serumu lipoproteinlerindeki lipohidroperoksit içeriğinin belirlenmesi

  2011 / Teselkin Yuri Olegovich, Babenkova Irina Vladimirovna

• Antioksidanların incelenmesi için yöntemler

  2004 / Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Maltseva E.V.

• Tuva etnotıbbında kullanılan bitkilerin antioksidan aktivitesi

  2012 / Chekhani N.R., Teselkin Yu.O., Pavlova L.A., Kozin S.V., Lyubitsky O.B.

• Fosprenil'in antioksidan özelliklerinin çeşitli biyolojik test sistemlerinde incelenmesi

  2017 / A.V. Sanin, A.N. Narovlyansky, A.V. Pronin, T.N. Kozhevnikova, V. Yu. Sanina, A.D. Agafonova

• Farklı dozlarda poliklorlu bifenillerin, tam kanın spontan ve immünoglobulin kaynaklı luminole bağımlı kemilüminesans durumu üzerindeki etkisi

  2016 / Gabdulkhakova I.R., Kayumova A.F., Samohodova O.V.

• Spektrofotometri ve kemilüminesans kullanılarak esansiyel arteriyel hipertansiyonu olan çocuklarda antioksidan korumanın lipid peroksidasyon sisteminin değerlendirilmesi

  2014 / Natyaganova Larisa Viktorovna, Gavrilova Oksana Aleksandrovna, Kolesnikova Larisa Romanovna

Tıbbi bitki materyalinde toplam antioksidan kapasitesinin kemilüminesan tayini

Tıbbi bitki materyali, insan vücudu için antioksidan kaynaklarından biridir. Kemilüminesans analizi, bitki materyallerindeki antioksidanların içeriğini belirlemede yaygın olarak kullanılan yöntemlerden biridir. Çalışmamızda, ahududu meyve infüzyonunun yanı sıra üvez, gül ve alıç meyve kaynatmalarının toplam antioksidan kapasitesini (TAC) belirlemek için kemilüminesans analizi kullanılmıştır. Deneyler, yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ve luminolden oluşan bir sistemin kemilüminesansının kinetiğini oluşturdu. Sistemin bileşenlerinin konsantrasyonları ve hacimleri, ölçüm sırasında (10 dakika) güçlü antioksidanlar (askorbik asit) ve ortalama kuvvetteki antioksidanlar (kersetin) tamamen oksitlenecek şekilde seçilmiştir. Bitki örneklerinin mevcudiyetinde kemilüminesans ışık toplamındaki değişikliklere dayanan TAC hesaplaması için bir yöntem önerilmiş ve doğrulanmıştır. Kemilüminesans kinetiğinin analizi, flavonoidler ve zayıf antioksidanlar (tokoferol ve diğerleri) dahil olmak üzere incelenen nesnelerde ortalama kuvvetteki antioksidanların baskın olduğunu gösterdi. İncelenen nesneler için hesaplanan TAC değerlerinin ve kimyasal analiz verilerinin karşılaştırılması, aynı miktarda antioksidan içeren ve farklı oranlarda antioksidan içeren ürünlerin, vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerine karşı koruma yeteneklerinin değişebileceğini göstermiştir. . Tarif edilen teknik, farklı tipte antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerinin incelenmesi için umut verici bir tekniktir.

Bilimsel çalışmanın metni "Tıbbi bitki materyallerinde toplam antioksidan kapasitenin belirlenmesi için kemilüminesan yöntem" konulu

Tıbbi Bitki Materyallerinde Toplam Antioksidan Kapasitesinin Belirlenmesi için Kemilüminesan Yöntem

G. K. Vladimirov1^, E. V. Sergunova2, D. Yu. Izmailov1, Yu. A. Vladimirov1

1 Tıbbi Biyofizik Anabilim Dalı, Temel Tıp Fakültesi, Moskova Devlet Üniversitesi adını M.V. Lomonosov, Moskova'dan almıştır.

2 Eczacılık Fakültesi Farmakognozi Anabilim Dalı,

I. M. Sechenov Birinci Moskova Devlet Tıp Üniversitesi, Moskova

Tıbbi bitki materyalleri, insan vücudu için antioksidan kaynaklarından biridir. Bitki nesnelerindeki antioksidanların içeriğini belirleme yöntemleri arasında kemilüminesans analiz yöntemi yaygındır. Bu çalışmada, üvez, yabani gül ve alıç meyveleri ve ahududu meyvesi infüzyonunun toplam antioksidan kapasitesini (TOA) değerlendirmek için kullanılmıştır. Deneyde, yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ve luminolden oluşan bir sistemde kemilüminesansın kinetiği kaydedildi. Örnekteki sistem bileşenlerinin konsantrasyonları ve hacimleri, ölçüm süresi (10 dakika) sırasında güçlü antioksidanlar (askorbik asit) ve orta derecede güçlü antioksidanlar (kersetin) tamamen oksitlenecek şekilde seçilmiştir. Bitki örneklerinin varlığında kemilüminesans ışık toplamındaki değişime dayalı olarak RAE'yi hesaplamak için bir yöntem önerilmiş ve doğrulanmıştır. Kemilüminesans kinetiğinin bir analizi, incelenen nesnelerde flavonoidler dahil orta derecede güçlü antioksidanların ve zayıf antioksidanların (tokoferol, vb.) baskın olduğunu gösterdi. İncelenen nesneler için hesaplanan TAU değerlerinin ve kimyasal analizlerinin verilerinin karşılaştırılması, türlere göre farklı oranlarda aynı miktarda antioksidan içeren ürünlerin, vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerinden koruma yeteneklerinde farklılık gösterebileceğini göstermiştir. Tarif edilen teknik, çeşitli tiplerde antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerinin incelenmesi için umut vericidir.

Anahtar Kelimeler: serbest radikal, antioksidan, antioksidan aktivite, toplam antioksidan kapasite, kemilüminesans, luminol

Finansman: çalışma Ruslar tarafından desteklendi bilimsel fon, 14-15-00375 numaralı hibe.

Ex3 Yazışmalar ele alınmalıdır: Georgy Konstantinovich Vladimirov

119192, Moskova, Lomonosovsky pr-t, 31, bina 5; [e-posta korumalı]

Alınan makale: 03/10/2016 Yayına kabul edilen makale: 03/18/2016

tıbbi bitki materyalinde toplam antioksidan kapasitenin kemilüminesan tayini

1 Tıbbi Biyofizik Anabilim Dalı, Temel Tıp Fakültesi, Lomonosov Moskova Devlet Üniversitesi, Moskova, Rusya

2 Eczacılık Fakültesi Farmakognozi Anabilim Dalı,

Birinci Sechenov Moskova Devlet Tıp Üniversitesi, Moskova, Rusya

Tıbbi bitki materyali, insan vücudu için antioksidan kaynaklarından biridir. Kemilüminesans analizi, bitki materyallerindeki antioksidanların içeriğini belirlemede yaygın olarak kullanılan yöntemlerden biridir. Çalışmamızda, ahududu meyve infüzyonunun yanı sıra üvez, gül ve alıç meyve kaynatmalarının toplam antioksidan kapasitesini (TAC) belirlemek için kemilüminesans analizi kullanılmıştır. Deneyler, yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ve luminolden oluşan bir sistemin kemilüminesansının kinetiğini belirledi. Sistemin bileşenlerinin konsantrasyonları ve hacimleri, ölçüm sırasında (10 dakika) güçlü antioksidanlar (askorbik asit) ve ortalama kuvvetteki antioksidanlar (kersetin) tamamen oksitlenecek şekilde seçilmiştir. Bitki örneklerinin mevcudiyetinde kemilüminesans ışık toplamındaki değişikliklere dayanan TAC hesaplaması için bir yöntem önerilmiş ve doğrulanmıştır. Kemilüminesans kinetiğinin analizi, flavonoidler ve zayıf antioksidanlar (tokoferol ve diğerleri) dahil olmak üzere incelenen nesnelerde ortalama kuvvetteki antioksidanların baskın olduğunu gösterdi. İncelenen nesneler için hesaplanan TAC değerlerinin ve kimyasal analiz verilerinin karşılaştırılması, aynı miktarda antioksidan içeren ve farklı oranlarda antioksidan içeren ürünlerin, vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerine karşı koruma yeteneklerinin değişebileceğini göstermiştir. . Tarif edilen teknik, farklı tipte antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerinin incelenmesi için umut verici bir tekniktir.

Anahtar Kelimeler: serbest radikal, antioksidan, antioksidan aktivite, toplam antioksidan kapasite, kemilüminesans, luminol

Finansman: Bu çalışma Rus Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir, hibe no. 14-15-00375.

Teşekkür: yazarlar, deneyi gerçekleştirmedeki yardımları için Lomonosov Moskova Devlet Üniversitesi'nden Andrey Alekseev'e teşekkür ediyor. Yazışmalar ele alınmalıdır: George Vladimirov

Lomonosovskiy prospekt, d. 31, k. 5, Moskova, Rusya, 119192; [e-posta korumalı] Geliş: 03/10/2016 Kabul: 03/18/2016

Vücutta üretilen serbest radikaller, hücre zarlarının yapısını bozar ve bu da çeşitli patolojik durumların gelişmesine yol açar. Radikallerin yıkıcı oksidatif etkisi, düşük moleküler ağırlıklı bileşiklerin - radikal süpürücülerin (tuzaklar) önemli bir rol oynadığı vücudun antioksidan savunma sistemi tarafından önlenir. Antioksidan kaynaklarından biri, tıbbi bitki hammaddelerinin yanı sıra, antioksidan potansiyelinin araştırılması önleyici ve terapötik etkilerini artırmaya yardımcı olan buna dayalı müstahzarlardır.

Çalışmalarda antioksidanları belirlemek için ana yöntemler ele alınmaktadır, ancak antioksidanların kimyasal bileşikler olarak tanımlanması, incelenen nesnenin koruyucu özelliklerinin tam bir resmini vermemektedir: sadece bir veya başka bir antioksidan miktarı ile belirlenmezler. , aynı zamanda her birinin etkinliği ile. Antioksidan aktivite veya antioksidan aktivite, AOA, bir antioksidanın bir serbest radikal (kInH) ile reaksiyonu için hız sabitidir. Kemilüminesans (CL) yöntemi, örnekte antioksidanların bağladığı toplam radikal miktarını (toplam antioksidan kapasitesi, TAU) ve CL kinetiğinin matematiksel modelleme yöntemini kullanırken, ayrıca oluşum ve reaksiyon hızını belirlemeyi mümkün kılar. antioksidanlı radikaller, yani AOA.

Toplam antioksidan kapasitesini belirlemek için kemilüminesan yönteminin en yaygın modifikasyonu, bir kemilüminesans aktivatörü olarak luminolün kullanımına dayanmaktadır. Luminol, hidrojen peroksit ve kendiliğinden parçalanma (termoliz) sonucunda radikal oluşturabilen bir bileşik, örneğin 2,2"-azobis-(2-amidinopropan) dihidroklorür (ABAP) ilaveli bir numune, içine yerleştirilir. kemiluminometre hücresi:

Moleküler oksijen varlığında, alkil radikali R^ bir peroksil radikali ROO^ oluşturur:

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv LH'den, ara maddelerin (luminol hidroperoksit ve luminol endoperoksit) oluşumu yoluyla, luminol oksidasyonunun son ürünü olan aminoftalik asidin bir molekülü, bir foton yayan elektronik olarak uyarılmış bir durumda oluşur. ve bunun sonucunda kemilüminesans gözlenir. CL yoğunluğu foton üretim hızıyla orantılıdır ve bu da sistemdeki sabit LH konsantrasyonuyla orantılıdır. Radikallerle etkileşime giren antioksidanlar, açıklanan dönüşüm zincirini keser ve bir foton oluşumunu engeller.

Bir numunenin antioksidan kapasitesinin kemilüminesans yöntemiyle analizinde, termolize tabi bileşikler tek olası radikal kaynağı değildir. Alternatifler yaban turpu peroksidaz-hidrojen peroksit, hemin-hidrojen peroksit, sitokrom c-kardiyolipin-hidrojen peroksit, vb.'dir. Peroksidazlarla luminol oksidasyonunun reaksiyonlarının şeması Cormier ve ark. .

Bu sistemler için CL kinetik eğrileri, reaksiyonun iki aşamasını yansıtır: CL yoğunluğundaki bir artış aşaması ve bir plato aşaması veya parlaklıkta kademeli bir azalma,

CL yoğunluğu ya sabittir ya da yavaş yavaş azalır. Makale, eğrilerin bu özelliğini hesaba katan toplam antioksidan kapasitesini ölçmek için iki yaklaşımı açıklamaktadır. TRAP (Toplam Reaktif Antioksidan Potansiyeli) yöntemi, CL gecikme periyodunun t ölçülmesine dayanır ve trolox veya askorbik asit gibi antioksidanları belirlemek için kullanılabilir: radikallerle sabit yüksek reaksiyon hızı ile karakterize edilirler ve bu nedenle güçlü antioksidanlar olarak adlandırılabilir. . Gizli dönemde, tam oksidasyonları meydana gelir. TAR yöntemi (Toplam Antioksidan Reaktivitesi), platoda veya kemilüminesans eğrisinin maksimumunda q kemilüminesans söndürme derecesini ölçer:

burada I, bir antioksidan olmadan kemilüminesansın yoğunluğudur ve 11, bir antioksidan varlığında CL'nin yoğunluğudur. Bu yöntem, sistem, luminol sabitine kıyasla çok daha düşük, radikallerle etkileşimin düşük oran sabitlerine sahip ağırlıklı olarak zayıf antioksidanlar içeriyorsa kullanılır.

Antioksidanların etkisi sadece t ve c göstergeleri ile karakterize edilmez. Çalışmalardan görülebileceği gibi, hemin-H202-luminol sisteminde ürik asit veya sitokrom c-cardiolipin-H202-luminol sisteminde tokoferol, rutin ve kersetin gibi antioksidanların etkisi, maksimum oranda bir değişiklik ile karakterize edilir. CL yükselişi (utx). Kinetiğin matematiksel modelleme sonuçlarının gösterdiği gibi, bu antioksidanların radikallerle etkileşiminin hız sabitlerinin değerleri luminol sabitinin değerine yakındır, bu nedenle bu tür antioksidanlara orta kuvvette antioksidanlar denilebilir.

İncelenen materyal, özellikle bitkisel hammaddeler, yalnızca bir tür antioksidan içeriyorsa, içerikleri yukarıda listelenen üç göstergeden biri (t, q veya V) ile karakterize edilebilir. Ancak bitki hammaddeleri, farklı güçlerde antioksidanların bir karışımını içerir. Bu sorunu çözmek için, bazı yazarlar, formülle hesaplanan belirli bir DE süresi boyunca kemilüminesans ışık toplamındaki değişimi kullandılar.

DE = DE0 - DE,

DE0 ve DE5, belirli bir süre için CL hafif toplamları nerede? sırasıyla kontrol ve test numunelerinde. Sistemdeki tüm antioksidanların oksidasyonu için, yani test örneğinin CL eğrisinin kontrol örneğinin CL eğrisinin seviyesine ulaşması için süre yeterli olmalıdır. Sonuncusu, araştırmacıların yalnızca lüminesans ışık toplamını değil, aynı zamanda her zaman yapılmayan, yeterince uzun bir süre için CL kinetik eğrisini de kaydetmeleri gerektiğini öne sürüyor.

Ölçülen tüm göstergeler cihaza ve ölçüm koşullarına bağlı olduğundan, çalışılan sistemdeki bir maddenin antioksidan etkisi genellikle Trolox gibi standart olarak alınan bir antioksidanın etkisi ile karşılaştırılır.

Birçok yazar tarafından bitki materyallerinin toplam antioksidan kapasitesini analiz etmek için yaban turpu peroksidaz-hidrojen peroksit sistemi kullanılmıştır. Çalışmalarda örneklerdeki antioksidan miktarını tahmin etmek için CL latent periyodu (TRAP yöntemi) kullanılmış ve çalışmalarda CL gelişim eğrisinin altında kalan alan kullanılmıştır. Ancak bu çalışmalar net bir gerekçe sunmamaktadır.

OAU'yu tahmin etmek için bir veya başka bir parametrenin seçimi.

Çalışmanın amacı, çeşitli tiplerdeki antioksidanların oranının TAU'yu nasıl etkilediğini belirlemek ve bitkisel materyallerde TAU'yu daha doğru bir şekilde belirleyebilecek şekilde kemilüminesans yöntemini modifiye etmektir. Bunu yapmak için kendimize birkaç görev belirledik. İlk olarak, çalışılan nesnelerin TAE'sine ana katkıyı hangi tip antioksidanların yaptığını anlamak için, çalışılan nesnelerin CL kinetiğini üç tipteki (güçlü, orta ve zayıf) standart antioksidanların kinetikleri ile karşılaştırmak. İkinci olarak, TAE'ye en büyük katkıyı sağlayan antioksidanın etkisine kıyasla bu nesnelerin etkisi altındaki CL ışık toplamındaki azalmayı ölçerek çalışılan nesnelerin TAE'sini hesaplamak.

MALZEMELER VE YÖNTEMLER

Çalışmanın nesneleri, Krasnogorskleksredstva JSC (Rusya) tarafından üretilen alıç, üvez ve kuşburnu meyvelerinin yanı sıra yazarlar tarafından Moskova bölgesinde doğal büyüme koşulları altında toplanan ve bir sıcaklıkta kurutulan ahududu meyvelerinin endüstriyel örnekleriydi. 60-80 °C'ye kadar meyve suyu ve basınç deformasyonları çıkarmayı durdurur.

Kemilüminesan yöntemle antioksidan kapasite analizi için reaktifler şunlardı: KH2P04, 20 mM tampon solüsyonu (pH 7.4); yaban turpu köklerinden peroksidaz (aktivite 112 U/mg, M = 44 173.9), 1 mM sulu çözelti; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindion, 3-aminoftalik asit hidrazid, M=177.11), 1 mM sulu çözelti; hidrojen peroksit (H2O2, M = 34.01), 1 mM sulu çözelti; antioksidan çözeltileri (askorbik asit, kuersetin, tokoferol). Tüm reaktifler Sigma Aldrich (ABD) tarafından üretilmiştir.

Alıç, üvez ve yabani gül meyvelerinin kaynatmaları ve ahududu meyvelerinin infüzyonu, genel farmakope makalesi "İnfüzyonlar ve kaynatmalar" bölümünde belirtilen SSCB Devlet Farmakopesi metodolojisine göre hazırlandı.

Toplam antioksidan kapasitesi, PowerGraph 3.3 yazılımı kullanılarak bir Lum-100 kimyasal lüminometre (DISoft, Rusya) üzerinde kemilüminesans kaydederek belirlendi. Bitki hammaddelerinde TAU'yu belirlemek için, 1 mM konsantrasyonda 40 µl luminol, 0.1 µM konsantrasyonda 40 µl yaban turpu peroksidaz, 10 ila 50 µl kaynatma veya infüzyon (konsantrasyona bağlı olarak) ve fosfat tamponu toplam numune hacmini 1 ml'ye getirmek için gereken miktarda. Küvet cihaza yerleştirildi ve arka plan sinyali gözlenerek CL kaydedildi. Arka plan sinyalinin 48 saniyelik kaydından sonra, küvete 1 mM konsantrasyonda 100 ul H2O2 ilave edildi ve CL kaydına 10 dakika boyunca devam edildi. Bitki nesnelerinin her birinin farklı konsantrasyonları ile dört numune hazırlandı. CL ayrıca her bir antioksidan için beş farklı konsantrasyonda askorbik asit, kersetin ve tokoferol çözeltileri için kaydedildi. Daha sonra, kaynatma ve infüzyon örneklerinin TAU'su kersetin için yeniden hesaplandı.

Şifalı bitki materyallerinden sulu ekstraktların antioksidan kapasitesini makul bir sürede (10 dakikadan fazla olmayan) belirlemek için luminol, yaban turpu peroksidaz ve hidrojen peroksit konsantrasyonları seçildi. Bu süre boyunca, antioksidanlar askorbat ve flavonoid kuersetin (bitki materyallerinin ana antioksidanları) için kemilüminesans eğrileri.

sistemdeki antioksidanların tamamen yok edildiğini gösteren bir platoya ulaştı. Çalışılan numunelerin dilüsyonları ve standart antioksidanların (şekillerin alt yazılarında belirtilmiştir) çözeltilerinin konsantrasyonları, tüm CL kinetik eğrilerinin aynı cihaz duyarlılığında ölçüleceği şekilde seçilmiştir.

Antioksidan kapasitesi, bir antioksidan içeren bir maddenin eklenmesi üzerine kemilüminesans kinetik eğrisi (ışık toplamı) altındaki alandaki (AS) değişiklikten hesaplandı. Bunu yapmak için, antioksidan içermeyen sistem için S0'ı hesapladık ve antioksidanın eklendiği sistemi karakterize eden SS alanını çıkardık. AS değeri, kemilüminometrenin hassasiyetine ve ölçüm koşullarına bağlıdır. AS/C ■ V oranı (burada C küvette çalışılan biyolojik materyalin konsantrasyonudur, g/l ve V küvetin hacmidir, l) çalışılan materyalin 1 g'ının antioksidan kapasitesini ifade eder, yani. , bitki materyali.

Reaksiyon karışımının aynı hacmine yerleştirilen standart bir antioksidan, örneğin kersetin solüsyonunun antioksidan kapasitesi ASa benzer şekilde hesaplandı. AS/CÄ ■ V oranı (burada CA, küvetteki antioksidanın ağırlık konsantrasyonudur, g/l), 1 g antioksidanın antioksidan kapasitesini ifade eder.

Standart antioksidanların her biri için, hesaplamaların doğrusal bir ilişki sınırları içinde yapıldığından ve elde edilen sonuçların tekrarlanabilir olduğundan emin olmak için çeşitli konsantrasyonlardaki çözeltilerden bir sinyal kaydedildi. Gerçekten de, stokiyometrik katsayı kA'nın hesaplandığı, konsantrasyon üzerindeki sinyalin doğrusal bir bağımlılığı (ASa = kA ■ CA) elde edildi. Fisher kriterine göre standart antioksidanlar için elde edilen kA değerleri 0.975 olasılıkla istatistiksel olarak anlamlıdır. Daha sonra, dört bitki numunesinin her biri için dört konsantrasyondan gelen sinyal kaydedildi ve tüm numuneler için, sinyalin konsantrasyona doğrusal bir bağımlılığı (AS = k ■ C) elde edildi, buradan stokiyometrik katsayı k hesaplandı. 0.975 (Fischer testi) olasılığı ile bitki örnekleri için elde edilen k değerleri istatistiksel olarak anlamlıdır. Standart antioksidanın ağırlığına göre bitki materyalinin toplam antioksidan kapasitesi (%mg) formül ile bulunmuştur.

OAU = k ■ 105. k

Değerler p'de aritmetik ortalama ± standart sapma (M ± 5) olarak sunuldu<0,05.

ÇALIŞMANIN SONUÇLARI

Sodyum askorbat varlığında kemilüminesans kinetiğinin incelenmesi (Şekil 1) bu antioksidanın CL'nin neredeyse tamamen baskılandığı bir latent dönem ile karakterize olduğunu göstermiştir. Süresi sistemdeki antioksidan miktarı ile orantılıdır. Bu durumda ne CL eğrilerinin eğimi ne de plato üzerindeki CL yoğunluğu değişmez. Bu, askorbik asidin, luminol radikalleri de dahil olmak üzere sistemde oluşan tüm radikalleri engelleyen güçlü bir antioksidan olması ve tüm askorbat oksitlenene kadar CL'nin gelişmemesi ile açıklanmaktadır.

Tokoferolün etkisi (Şekil 2), zayıf antioksidanlar için tipik olan bir plato üzerinde CL yoğunluğunda bir azalma ile kendini gösterir, ancak tokoferol en çok kullanılanlardan biri olarak kabul edilir.

güçlü antioksidanlar. Belki de bu farklılık, deneyimizde serbest radikallerin sulu bir solüsyonda bulunmasından, tokoferolün etkisinin ise genellikle polar olmayan ortamlarda incelenmesinden kaynaklanmaktadır. Kardiyolipin ile sitokrom c kompleksinin radikallerin kaynağı olarak görev yaptığı ve luminol ile reaksiyonun bu kompleks içerisinde ilerlediği çalışmada, tokoferol orta kuvvette bir antioksidan özelliklerine sahipti.

Çeşitli kersetin konsantrasyonlarının sistemimiz üzerindeki etkisini inceledikten ve bunun kinetik eğrilerini sodyum askorbat ve tokoferol ile karşılaştırdıktan sonra, kuersetin'in ana etkisinin, kersetin eğimindeki bir değişiklikte kendini gösterdiği not edilebilir. eğriler, yani orta düzeyde antioksidanlar için tipik olan CL gelişme hızı.

Çalışılan tüm kaynatmalar için CL eğrileri (Şekil 4), sonunda CL yoğunluğunda hafif bir azalma ile kuersetin eğrilerine benzer;

Zaman, dk

Pirinç. 1. Sodyum askorbatın kemilüminesans kinetiği üzerindeki etkisi

Sistem bileşenlerinin konsantrasyonları: luminol - 40 μM, yaban turpu peroksidaz - 4 nM, hidrojen peroksit - 100 μM. Eğriler: 1 - kontrol örneği; 2 - 0.05 uM; 3 - 0.10 uM; 4 - 0.15 uM; 5 - 0.2 uM; 6 - 0.25 μM sodyum askorbat.

plato. Çalışmada gösterildiği gibi, bu davranış, bizim durumumuzda polifenoller - flavonoidler ve tanenler içeren orta kuvvetteki antioksidanlar için tipiktir. Ahududu meyvelerinin bir infüzyonu için (Şekil 4, D), bu durumda tokoferol olan zayıf antioksidanlar için tipik olan plato seviyesinde kemilüminesansta bir azalma fark edilir. Kuersetin ve tokoferol açısından, ahududu meyvelerinin infüzyonu 4.7 ± 0.9 µmol/g kersetin ve 11.9 ± 0.8 µmol/g tokoferol içerir.

Bitki materyallerinden incelenen dört sulu ekstraktın farklı konsantrasyonları için elde edilen kemilüminesans eğrileri karşılaştırıldığında, orta ve zayıf antioksidanların örneklerin toplam antioksidan kapasitesine katkısının aşağıdaki serilerde azaldığı gösterilmiştir: ahududu meyve infüzyonu (Şekil 4). , D), kuşburnu meyvesi kaynatma (Şek. 4, C), üvez meyvelerinin kaynatılması (Şek. 4, A), alıç meyvelerinin kaynatılması (Şek. 4, B). Küvetteki çalışılan maddenin C konsantrasyonu cinsinden AS değerleri ve kersetin cinsinden toplam antioksidan kapasite değerleri tabloda gösterilmiştir.

SONUÇLARIN TARTIŞILMASI

Deneyler sırasında elde edilen veriler ve bunlara dayanarak hesaplanan çalışılan nesnelerin TAU değerleri, kimyasal analiz yöntemleri kullanılarak belirlenen ana antioksidanların içeriği ile karşılaştırıldı. Farklı nesnelerdeki toplam antioksidan miktarı ile TAU arasında pozitif bir korelasyon yadsınamaz olmasına rağmen, bu göstergeler arasında gözle görülür farklılıklar vardır. Örneğin, flavonoidler, tanenler ve askorbik asit içeriğinin toplamını alırsak, alıç meyvelerinin kaynatılması (tablo) hariç, incelenen tüm nesneler için hesaplanan TAU'dan daha fazla olduğu ortaya çıkar.

Diğer araştırmacılar da kimyasal analiz sonuçlarının ve kemilüminesan yöntemle belirlenen TAU değerinin çoğu zaman uyuşmadığını göstermiştir. Çalışmada, belirlenen toplam antioksidan kapasitesi,

46 Zaman, dk

Ben" "hi ----.

Pirinç. 2. Tokoferolün kemilüminesans kinetiği üzerindeki etkisi

Sistem bileşenlerinin konsantrasyonları: luminol - 40 μM, yaban turpu peroksidaz - 4 nM, hidrojen peroksit - 100 μM. Eğriler: 1 - kontrol örneği; 2 - 0.01 uM; 3 - 0.025 uM; 4 - 0,06 uM; 5 - 0.1 uM; 6 - 0.2 uM tokoferol.

46 Zaman, dk

Pirinç. Şekil 3. Kuersetin'in kemilüminesans kinetiği üzerindeki etkisi Sistem bileşenlerinin konsantrasyonları: luminol - 40 μM, yaban turpu peroksidaz - 4 nM, hidrojen peroksit - 100 μM. Eğriler: 1 - kontrol örneği; 2 - 0,02 uM; 3 - 0.03 uM; 4 - 0.04 uM; 5 - 0.05 uM; 6 - 0.06 μM kersetin.

Zaman, dk

46 Zaman, dk

46 Zaman, dk

120 I 100 80 \ 60 40 20

46 Zaman, dk

Pirinç. Şekil 4. Üvez meyvesi (A), alıç (B), yabani gül (C) ve ahududu meyvesi infüzyonunun (D) kemilüminesans kinetiği üzerindeki etkisi. (A) Eğriler: 1 - kontrol numunesi; 2 - 0,002 g/l; 3 - 0.004 g/l; 4 - 0.006 g/l; 5 - 0.008 g/l üvez meyvelerinin kaynatılması. (B) Eğriler: 1 - kontrol numunesi; 2 - 0.005 g/l; 3 - 0,0075 g/l; 4 - 0.01 g/l; 5 - 0.0125 g/l alıç meyvelerinin kaynatılması. (C) Eğriler: 1 - kontrol numunesi; 2 - 0.001 g/l; 3 - 0,0015 g/l; 4 - 0,002 g/l; 5 - 0,0025 g/l kuşburnu kaynatma. (D) Eğriler: 1 - kontrol numunesi; 2 - 0.001 g/l; 3 - 0.003 g/l; 4 - 0.004 g/l; 5 - 0.005 g/l ahududu infüzyonu.

sistemde peroksidaz-luminol-hidrojen peroksit, triterpen bileşiklerinin içeriği ile ilişkilidir. Bununla birlikte, aynı yazarların, başka bir bitkinin çalışma konusu olduğu çalışmasında, TAU ile flavonoidler dahil herhangi bir madde grubunun içeriği arasında bir ilişki gözlenmedi.

Bu tutarsızlıklar en az üç faktörle ilgilidir. Birincisi, antioksidanların aktivitesi, yani bitki örneğini oluşturan farklı antioksidanlar için farklı olan radikallerle etkileşim hızı önemlidir. Izmailov'a göre, meksidol, tokoferol ve kuersetin için karşılık gelen reaksiyonların hız sabitleri 0.04: 2: 60 olarak ilişkilidir. İkinci olarak, kimyasal bir reaksiyona giren her antioksidan molekülü farklı sayıda radikali yakalayabilir. Çalışmaya göre, quercetin, ürik ve askorbik asitler reaksiyona giren antioksidan molekül başına sırasıyla 3.6 ± 0.1, 1.4 ± 0.1 ve 0.5 ± 0.2 radikali engelledi (gemin-H202-luminol sistemi kullanıldı). Üçüncüsü, çalışmanın sonuçları, işte olduğu gibi bitki örneklerinde peroksidaz aktivitesinin varlığından ve ayrıca çalışmada gösterildiği gibi, örneklerde kalsiyumun varlığından etkilenebilir. belirli koşullar altında yaban turpu peroksidazının aktivitesi. Bu genellikle daha fazla

platoda kontrol eğrilerinden daha yüksek CL yoğunluğu, ancak bunu gözlemlemedik.

İlk faktör, ışık toplamındaki bir değişiklik gibi bir parametrenin kullanımını keskin bir şekilde sınırlar, çünkü kemilüminesans ölçüm süresi, test numunesindeki tüm antioksidanların tüketim zamanından daha uzun olmalıdır. Bu anın yaklaşımı ancak kemilüminesans kinetiği ölçülerek değerlendirilebilir. Ek olarak, tam oksidasyon süreleri kabul edilebilir ölçüm süresinden (10-20 dakika) çok daha uzun olduğundan, zayıf antioksidanların OAE'ye katkısı keskin bir şekilde hafife alınmaktadır.

Daha da önemli olan, antioksidanın stokiyometrik katsayısıdır. Onlar tarafından yakalanan n radikallerinin sayısı eşittir

burada p, stokiyometrik katsayıdır ve Am, ölçüm sırasında antioksidan konsantrasyonundaki değişikliktir, bizim durumumuzda, test numunesindeki test maddesinin ilk konsantrasyonu.

Bir antioksidanın yokluğunda ve varlığında lüminesansın ışık toplamındaki fark n ile orantılıdır. Yakalanan toplam radikal sayısı n = Y.p'dir. m,

belirli bir antioksidanın stokiyometrik katsayısı nerede ve m, değişim sırasındaki konsantrasyonudur

Çalışmanın amacı Flavonoidler, mg%* Tanenler, mg%* Askorbik asit, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. birimler OAU, mg% kersetin

Üvez meyvelerinin kaynatılması 8.87 ± 0.01 210.00 ± 10.00 0.67 ± 0.02 7.13 ± 0.96 56.53 ± 7.61

Kuşburnu kaynatma 4,66 ± 0,04 850,00 ± 20,00 3,70 ± 0,12 16,60 ± 3,40 131,63 ± 27,26

Alıç meyvelerinin kaynatılması 3,01 ± 0,06 12,00 ± 3,00 0,23 ± 0,002 3,18 ± 0,29 25,20 ± 2,32

Kurutulmuş ahududu 90,00 ± 4,00 40,00 ± 20,00 3,91 ± 0,08 6,65 ± 1,21 52,69 ± 9,56

Not: * - literatür verileri, . AS - örnek için ışık toplamındaki değişiklik, rel. birimler, C - küvetteki numune konsantrasyonu, g/l. Hesaplanan değerler p'de güvenilirdir<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

renyum. Yakalanan radikallerin toplam sayısı, açıkça antioksidanların toplam miktarına eşit değildir, çünkü pt katsayıları sadece bire eşit değil, aynı zamanda farklı antioksidanlar için önemli ölçüde farklılık gösterir.

n değeri, antioksidan içeren bir numune ile antioksidan içermeyen bir kontrol numunesi arasında belirli bir süre boyunca ölçülen hafif toplamlardaki farkla orantılıdır:

burada k, aynı ölçüm koşulları altında sabit olan bir katsayıdır.

Makalede ele alınan yöntem, toplam antioksidan kapasitesinin belirlenmesine izin verirken, kimyasal analiz, üründeki toplam antioksidan içeriğinin belirlenmesine izin verir. Bu nedenle, kemilüminesans yöntemi, kimyasal analizlerden daha bilgilendirici görünmektedir.

Yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ve luminolden oluşan bir sistemde kemilüminesans kinetiğini kaydederek bitki hammaddelerinin toplam antioksidan kapasitesini değerlendirmek için seçtiğimiz koşullar (bileşen konsantrasyonları sırasıyla 4 nM, 100 μM ve 40 μM'dir; 20 mM fosfat tamponu, pH 7.4),

güçlü antioksidanların (askorbik asit) ve orta düzeyde antioksidanların (kersetin) 10 dakikada oksidasyonunu sağladı. Bu ölçüm süresi uygundur ve gerekli ölçüm kalitesini sağlar.

Kemilüminesans kinetiğinin bir analizi, incelenen nesnelerde (üvez, yabani gül, alıç meyveleri ve ahududu meyvesi infüzyonu), ana antioksidanların flavonoidler dahil orta güçlü antioksidanlar ve zayıf güçlü antioksidanlar (tokoferol vb.) olduğunu göstermiştir. ). Kemilüminesans ışık toplamındaki azalmaya dayanarak, incelenen nesneler için toplam antioksidan kapasitesi hesaplandı. Elde edilen TAU değerlerinin kimyasal analiz sonuçları ile karşılaştırılması, farklı oranlarda aynı miktarda antioksidan içeren ürünlerin, vücudu serbest radikallerin zararlı etkilerinden etkili bir şekilde koruma yeteneklerinde farklılık gösterebileceğini göstermiştir. Tarif edilen teknik, çeşitli antioksidanların bir karışımını içeren bitki nesnelerini incelemek için umut vericidir. Aynı zamanda, basitlik ve düşük araştırma maliyeti ile karakterizedir. Kemilüminesans kinetiğinin ölçümünün reaksiyonların matematiksel modellemesi ile birleştirilmesi yalnızca TAU belirleme sürecini otomatikleştirmekle kalmayacak, aynı zamanda bireysel antioksidan gruplarının göstergeye katkısını da belirleyecektir.

Edebiyat

1. Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A. Düzenleyici ve patolojik süreçlere katılanlar olarak serbest radikaller. İçinde: Grigoriev A.I., Vladimirov Yu.A., editörler. Temel bilimler - tıp. Biyofiz. bal. teknoloji. Moskova: MAKS Press; 2015. cilt 1. s. 38-71.

3. Khasanov V. V., Ryzhova G. L., Maltseva E. V. Antioksidanların incelenmesi için yöntemler. Kimya rast. İşlenmemiş içerikler. 2004; (3): 63-75.

4. Vasiliev R.F., Kancheva V.D., Fedorova G.F., Batovska D.I., Trofimov A.V. Kalkonların antioksidan aktivitesi. Reaktiflerin ve ara maddelerin enerjilerinin ve yapılarının kimyasal ışıldama tayini ve kuantum-kimyasal hesaplaması. Kinetik ve kataliz. 2010; 51(4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil "ev RF, Veprintsev TL. Peroksi-

radikal aracılı kemilüminesans: antioksidan tahlil için mekanik çeşitlilik ve temeller. Arkivoc. 2007; 8:163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. H2O2-hemin kaynaklı luminol kemilüminesans ile antiradikal kapasitenin değerlendirilmesi. J Tarım Gıda Kimya. 2003 Aralık 3; 51 (25): 7481-8.

9. Vladimirov Yu.A., Proskurnina E.V. Serbest radikaller ve hücresel kemilüminesans. Başarılar biyo. kimya 2009; 49:341-88.

10. Vladimirov Yu.A., Proskurnina E.V., Izmailov D. Yu. Serbest radikal reaksiyonlarını incelemek için bir yöntem olarak kinetik kemilüminesans. Biyofizik. 2011; 56(6): 1081-90.

11. Izmailov D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu. A. Kemilüminesans kinetiğini ölçerek antioksidan aktivitenin belirlenmesi. Fotobiyoloji ve fototıp. 2011; 7(2):70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termoliziyle indüklenen lüminol ışıldaması. Ücretsiz

Radic Res Komün. 1992; 17(5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. SOD aktivitesini değerlendirmek için luminol lüminesansının söndürülmesinin kullanımı hakkında. Serbest Radic Biol Med. 1994 Haziran; 16(6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Luminol ile güçlendirilmiş kemilüminesans ölçümlerinden toplam antioksidan potansiyelinin (TRAP) ve toplam antioksidan reaktivitesinin değerlendirilmesi. Serbest Radic Biol Med. Şubat 1995; 18(2):153-8.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Durdurulmuş akış teknikleri ile luminolün ışıldayan peroksidasyonunun mekanizmasının araştırılması. J Biol Chem. 1968 25 Eylül; 243(18): 4706-14.

21. Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A. 2,2'-azo-bis(2-amidinopropan kullanılarak aktive edilmiş kemilüminesans ile antioksidanların belirlenmesi).Moskova Devlet Üniversitesi Bülteni. Ser. 2. Khim. 2012; 53 ( 3): 187-93.

24. SSCB Sağlık Bakanlığı SSCB Devlet Farmakopesi XI ed. Sorun. 2 “Genel analiz yöntemleri. Tıbbi bitki materyalleri". M.: Tıp; 1987. s. 147-8.

25. Sergunova E.V., Sorokina A.A., Kornyushina M.A. Kuşburnu özü müstahzarlarının incelenmesi. Eczane. 2012; (2): 14-6.

26. Sergunova E.V., Sorokina A.A., Avrach A.S. Alıç meyvesinin çeşitli koruma ve su çıkarma yöntemleriyle incelenmesi. Eczane. 2010; (5): 16-8.

27. Avrach A.S., Sergunova E.V., Kuksova Ya. V. Meyvelerin biyolojik olarak aktif maddeleri ve ahududu su özleri. Eczane. 2014; (1): 8-10.

28. Avrach A.S., Samylina I.A., Sergunova E. V. Alıç meyvelerinin biyolojik olarak aktif maddelerinin incelenmesi - homeopatik matris tentürlerinin hazırlanması için hammaddeler. Oturdu. ilmi tr. XXIV Mosk'un malzemelerine dayanmaktadır. uluslararası homeopatik. konf. "Modern tıpta homeopatik yöntemin gelişimi"; 24-25 Ocak 2014; Moskova. M.; 2014. s. 146-7.

29. Sergunova E. V., Sorokina A. A. Çeşitli koruma yöntemlerinin tıbbi bitki materyallerinde biyolojik olarak aktif maddelerin bileşiminin incelenmesi. Oturdu. XX Ross'a dayalı özetler. nat. kongre "İnsan ve tıp"; 15-19 Nisan 2013; Moskova. Moskova: EkoOnis; 2013. s. 184-90.

30. Alexandrova E. Yu., Orlova M.A., Neiman P. L. Yaban turpu rizomlarından ve köklerinden elde edilen ekstraktlarda peroksidaz aktivitesinin ve çeşitli etkilere karşı stabilitesinin incelenmesi. Yelek Moskova Devlet Üniversitesi. Sör. 2. Kimya. 2006; 47(5):350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Serbest radikaly kak uchastniki düzenleyici düzenleyici ve patolojikheskikh protsessov. İçinde: Grigor "ev AI, Vladimirov YuA, editörler. Temel" nye nauki - meditsine. Biofizicheskie meditsinskie tekhnologii. Moskova: MAKS Press; 2015.v. 1. s. 38-71. Rusça.

2. Chanda S, Dave R. Antioksidan aktivite değerlendirmesi için in vitro modeller ve antioksidan özelliklere sahip bazı şifalı bitkiler: Genel bir bakış. Afr J Microbiol Res. Aralık 2009; 3(13): 981-96.

3. Khasanov VV, Ryzhova GL, Mal "tseva EV. Metody issledovaniya antioksidantov. Khimija Rastitel "nogo Syr" ja. 2004; (3): 63-75. Rusça.

4. Vasil "ev RF, K" "ncheva VD, Fedorova GF, B" "tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" khalkonov. Khemilyuminestsentnoe opredelenie reaktsionnoi sposobnosti ve kvantovo-khimicheskii raschet energii ve stroeniya reagentov ve intermediatov. Kinetik ve kataliz. 2010; 51(4): 533-41. Rusça.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA, et al. Kemilüminesans kinetiği, zincir kırma etkinlikleri, temizleme aktivitesi (ORAC) ve DFT hesaplamaları ile incelenen kurkumin ile ilgili bileşiklerin antioksidan potansiyeli. Beilstein J Org Chem. 2015 11 Ağustos; 11:1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil'ev RF, Veprintsev TL Peroksi-radikal aracılı kemilüminesans: antioksidan tahlil için mekanik çeşitlilik ve temeller Arkivoc.2007;8: 163-215.

7. Fedorova GF, Menshov VA, Trofimov AV, Vasil'ev RF Bitkisel lipidlerin antioksidan özellikleri için kolay kemilüminesans deneyi: temel bilgiler ve açıklayıcı örnekler Analist 2009 Ekim; 134 (10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. H2O2-hemin kaynaklı luminol ile antiradikal kapasitenin değerlendirilmesi

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Free radikaly ve kletochnaya khemilyuminestsentsiya. Usp Biol Khim. 2009; 49:341-88. Rusça.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya khemilyuminestsentsiya as metod izucheniya reaktsii svobodnykh radikalov. biyofizik. 2011; 56(6): 1081-90. Rusça.

11. İzmailov DYu, Demin EM, Vladimirov YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metodom izmereniya kinetiki khemilyuminestsen-tsii. Fotobiologiya ve fotomeditsina. 2011; 7(2):70-6. Rusça.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. 2.2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termoliziyle indüklenen lüminol lüminesansı. Free Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. SOD aktivitesini değerlendirmek için luminol lüminesansının söndürülmesinin kullanımı hakkında. Serbest Radic Biol Med. 1994 Haziran; 16(6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. Methemoglobin veya oksihemoglobin ile hidrojen peroksit arasındaki reaksiyonla bağlantılı görünür kemilüminesans. Photochem Photobiol. Kasım 1994; 60(5):405-11.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Luminol ile güçlendirilmiş kemilüminesans ölçümlerinden toplam antioksidan potansiyelinin (TRAP) ve toplam antioksidan reaktivitesinin değerlendirilmesi. Serbest Radic Biol Med. Şubat 1995; 18(2):153-8.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV, et al. Lipozomal flavonollerin antioksidan aktivitesinin HRP-H2O2-luminol sistemi tarafından in vitro değerlendirilmesi. J Mikroenkapsül. 2011; 28(4):258-67.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Mekanizmanın araştırılması

durdurulmuş akış teknikleri ile luminolün ışıldayan peroksidasyonunun analizi. J Biol Chem. 1968 25 Eylül; 243(18): 4706-14.

18. Chang CL, Lin CS, Lai GH. Beş şifalı bitki özünün fitokimyasal özellikleri, serbest radikal temizleme aktiviteleri ve nöro-koruması. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Alternatif Med. 2012; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011 10 Ağustos.

19. Chang CL, Lin CS. Terminalia chebula Retzius özlerinin fitokimyasal bileşimi, antioksidan aktivitesi ve nöroprotektif etkisi. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Alternatif Med. 2012; 2012: 125247. doi: 10.1155/2012/125247. Epub 2011 Temmuz 5

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. Farklı flavonoidlerin antioksidan aktivitelerinin kemilüminesans yöntemi ile değerlendirilmesi. AAPS PharmSci. 2003; 5(2):111-5.

21. Alekseev AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksidantov metodom aktivirovannoi khemilyuminestsentsii s ispol "zovaniem 2.2" -azo-bis (2-amidinopropana). Moskova Üniversitesi Kimya Bülteni. 2012; 53(3): 187-93. Rusça.

22. Pogacnik L, Ulrih NP. Bitkisel özlerin antioksidan kapasitesinin belirlenmesi için optimize edilmiş kemilüminesans testinin uygulanması. Lüminesans. 2012 Kasım-Aralık; 27(6):505-10.

23. Saleh L, Plieth C. Özet parametre olarak toplam düşük moleküler ağırlıklı antioksidanlar, biyolojik numunelerde bir kemilüminesans inhibisyon deneyi ile nicelleştirilmiştir. Nat Protokolü. 2010 Eylül; 5 (10): 1627-34.

24. Ministerstvo zdravookhraneniya SSSR. Gosudarsvennaya farmakopeya SSSR. 11. baskı. Is. 2. "Obshchie metody analizi.

Lekarstvennoe rastitel "noe syr" e", Moskova: Medltsina, 1987, s. 147-8. Rusça.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh hazırlıkov shipovnika. Eczane. 2012; (2): 14-6. Rusça.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii i vodnykh izvlechenii. Farmatsia. 2010; (5): 16-8. Rusça.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biologicheski aktivnye veshchestva plodov ve vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsia. 2014; (1): 8-10. Rusça.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr "ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. 14. Moskova Uluslararası Homeopati Konferansı Bildiriler Kitabı "Razvitie gomeopaticheskogo metoda v sovremennoi. 24- Moskova.

29. Sergunova EV, Sorokina AA. Izuchenie sostava biologicheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel "nom syr" ve razlichnykh sposobov konservatsii. 20. Rusya Ulusal Kongresi "Chelovek i lekarstvo" bildirileri; 2013 Nisan 1519; Moskova. Moskova: EkOOnis; 2013.p. 184-90. Rusça.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neiman PL. Izuchenie peroksidaznoi aktivnosti ve ekstraktakh iz kornevishcha i kornei khrena i ee stabil "nosti k razlichnym vozdeistviyam. Moskova Üniversitesi Kimya Bülteni. 2006; 47 (5): 350-2. Rusça.