Mikroskop.

Ushbu maqolada men sizga mikroskop uchun preparatlar tayyorlashning 3 usulini aytib beraman. Bu usullar eng oddiy hisoblanadi.

Maqolaning boshida - lug'at deb ataladigan narsa, aniqrog'i, u yoki bu ob'ekt nima ekanligini tushuntirish.

Mikropreparatlarni ishlab chiqarish uchun maxsus vosita, bo'yoqlar, shuningdek, ma'lum bir aniqlik va mahorat talab etiladi. Barcha kerakli shartlarga qat'iy rioya qilish juda muhim - aks holda mikropreparat tadqiqot uchun yaroqsiz bo'lishi mumkin.

Sotuvda tadqiqot uchun tayyor to'plamlar mavjud (uy va maktab uchun qulay) - masalan, 25 dori, yoki Leeuvengukdan 38 ta slayd. Shuningdek, minerallar va boshqa to'plamlar.

tushuntirishlar

Ruxsat etilgan dori- mikrobiologiyada fiksatsiyalangan preparatlar ko'pincha tayyorlanadi, shuning uchun siz ularning nima ekanligini bilishingiz kerak. Ushbu preparatlar bo'yalgan shaklda mikroskop ostida tekshiriladi. "Fiksatsiya" so'zi tirik ob'ektni (siz ko'rib chiqmoqchi bo'lgan) shunday qayta ishlashni anglatadi, bu esa ma'lum bir ob'ektdagi hayot jarayonlarini tezda to'xtatishga imkon beradi (men oddiyroq tushuntiraman - o'ldirish), shu bilan birga jarimani saqlab qoladi. tuzilishi. Fiksatsiya natijasida hujayralar shishaga mahkam yopishadi va yaxshiroq bo'yaladi. Fiksatsiya patogen mikroorganizmlar bilan ishlaganda (o'z-o'zini himoya qilish uchun) zarur.

To'xtatib turish- har qanday moddalar aralashmasi, bu erda qattiq modda suyuq moddada cho'kmagan holatda mayda zarrachalar shaklida tarqaladi.

biologik halqa- yupqa metall tayoq, oxirida - yupqa metall halqa. Mikroorganizmlarning ma'lum bir suspenziyasining oz miqdorini ushlash uchun ishlatiladi.

Petrolatum- malhamga o'xshash suyuqlik, hidsiz va ta'msiz. Aralash mineral moy va qattiq parafinlardan (mumga o'xshash aralash) iborat.

Muhrlash- sirt va qismlarning bo'g'inlari turli gazlar va suyuqliklar uchun mukammal o'tkazuvchanlikni ta'minlash.

agar-agar- mikrobiologiyada qattiq va yarim suyuq ozuqa muhitini, ya'ni agar muhitini ishlab chiqarish uchun ishlatiladi.

Karnoy suyuqligi- mahkamlash uchun suyuqlik.

Burner- atmosfera havosiga kirish uchun teshiklari bo'lgan metall trubkaga o'rnatilgan injektorga ega bo'lgan qurilma, u quvurga gaz etkazib berish uchun yon kirish joyi bo'lgan stendga o'rnatiladi, bunda teshiklar yon yuzada amalga oshiriladi. burnerga havo etkazib berishni o'zgartirish uchun trubkada, bu teshiklarning oqim maydonini o'zgartiradigan harakatlanuvchi amortizator o'rnatilishi mumkin.

Nikiforov aralashmasi- qon smetalarini, organlar va har qanday to'qimalarning smearlarini tuzatish uchun ishlatiladigan teng hajmdagi etil spirti va suvsiz sulfat efir aralashmasi.

"Ezilgan tomchi" preparatini tayyorlash

"osilgan tomchi" preparatini tayyorlash

Osilgan tomchi.

1. Bir tomchi mikroorganizm suspenziyasini (tayyorlangan) biologik halqa yordamida toza qoplama ustiga yumshoq qilib qo'ying.
2. Suspenziya tomchisi bo'lgan qopqoqni teskari aylantiring, shunda tomchi erkin osilib turadi.
3. Markazda chuqurchaga ega bo'lgan maxsus qoplamaning qudug'iga bir tomchi bilan teskari qopqoqni qo'ying.
4. Tomchi oynaning chetiga va chuqurchaga (teshik) tegmasligi kerak, u qopqoqqa erkin osilishi kerak.
5. Maxsus qopqoqli oynaning chuqurchalarining chetlari kamerani yopish uchun oldindan vazelin bilan yog'langan.
6. Mikropreparatda bakteriyalarni kuzatishdan rohatlaning!

"Imprint" preparatini tayyorlash

Mutlaq uzluksiz maysazorda yoki alohida koloniyalar shaklida ba'zi mikroorganizmlar o'sadigan agar muhitidan skalpel bilan juda katta bo'lmagan kubni ehtiyotkorlik bilan kesib oling.

Uni shisha slaydga o'tkazing, shunda mikroorganizm kubining yuzasi yuqoriga qaratiladi.

Keyin mikroorganizmlar maysazoriga yoki koloniyaga oddiy qoplamani (mutlaqo toza) qo'llang, muloyimlik bilan va kuchli emas, balki engil, biologik halqa yoki cımbız bilan bosing va uni yon tomonga siljitmaslikka harakat qilib, darhol olib tashlang. .

Olingan preparat (tasma bilan qoplangan qog'oz) toza shisha slaydga bir tomchi oddiy suvga tushiriladi. Koloniya yuzasiga shisha slaydni tegizish orqali shisha slaydda ham iz olish mumkin.

1. Preparat tayyor!
2. Diqqat! Tirik hujayra preparatlari "quruq tizimlar" mikroskopi yordamida tekshiriladi. Mikroskopdan so'ng, bunday preparatlar yuvishdan oldin dezinfektsiyali eritmada (dezinfektsiyalovchi) saqlanishi kerak.

"Imprint" preparatini tayyorlash, boshqa usul

"Fikslangan smear" preparatini tayyorlash

Ushbu preparatni tayyorlash uchun yog'sizlangan shisha slaydga bir tomchi suv kerak bo'ladi.

Biologik halqa bilan o'rganayotgan materialingizni unga kiriting va uni diametri taxminan 1-1,5 santimetr bo'lgan nozik va bir xil smeta olish uchun taqsimlang (faqat smearda materialning shunday taqsimlanishi bilan siz izolyatsiya qilingan bakterialni ko'rishingiz mumkin. hujayralar).

Agar sinov materiali suyuq muhitda bo'lsa, u to'g'ridan-to'g'ri halqali shisha slaydga surtiladi va smear tayyorlanadi. Smearlar havoda yoki issiq havo oqimida burner olovida quritiladi.


Smearni tuzatish uchun shisha slayd (ya'ni, surtma yuqoriga ko'tarilgan holda) gorelka olovidan 3 marta (3 soniya ichida) sekin o'tkaziladi. Smeardagi mikroorganizmlar fiksatsiya paytida nobud bo'lib, shisha slaydning yuzasiga mahkam yopishadi va preparatni keyingi qayta ishlash jarayonida ular yuvilmaydi.

1. Tayyor!

Diqqat! Uzoqroq isitish hujayra tuzilmalarining deformatsiyasiga olib kelishi mumkin. Qon surtmalari, a'zolar va har qanday to'qimalarning smear-izlari va (ba'zi hollarda kulturadan olingan surtmalar) 5-20 daqiqa davomida metil ko'k yoki etil spirtiga, Nikiforov aralashmasiga, shuningdek sublimat spirtiga yoki boshqa biriktiruvchi suyuqliklarga botiriladi.

Mikroskop slaydlariga misollar

Botanika va zoologiya:

piyoz qobig'i
Javdar donasi
ildiz qopqog'i
jo'ka novdasi
Anter
Tuxumdon
Kameliya
Geranium barglari epidermisi
ari a'zosi
ari qanoti
Tsikloplar
Volvox
Evglena
Infusoria poyabzali
Yomg'ir qurti (ko'ndalang kesim)
chivinlarning og'iz qismlari
Askarida
Dafniya

Biologiya va fiziologiya:

Drosophila mutatsiyasi (qanotsiz shakl)
Drosophila mutatsiyasi (qora tana)
Drosophila "norma"
hayvon hujayrasi
o'simlik hujayrasi
Mog'or mog'or
Tuxumning bo'linishi
Piyoz ildizida mitoz
chiziqli mushaklar
sutemizuvchilar spermatozoidlari
Nerv (kesim)
Bo'shashgan biriktiruvchi to'qima
sutemizuvchilar tuxumi
Nerv hujayralari
gialin xaftaga
Silliq mushaklar
Suyak
qurbaqa qoni
inson qoni
Bir qavatli epiteliy

Vaqtinchalik mikropreparatlarni tayyorlash uchun slaydlar va qoplamalar to'plami, kesuvchi ignalar, ustaralar, skalpellar, suv uchun shisha tayoqchalar, pinset, filtr qog'ozi va ba'zi reaktivlar bo'lishi kerak.

Shisha slayd va qoplama suv bilan yuviladi va yumshoq mato bilan artib quritiladi. O'simlik ob'ektining yupqa qismi bir tomchi suvga shisha slaydga joylashtiriladi va qopqoq bilan qoplanadi. Agar preparatdagi suyuqlik qoplamaning chetlaridan tashqariga chiqsa, ortiqcha filtr qog'oz chiziqlari bilan chiqariladi. Agar suv qopqoq ostidagi butun maydonni qoplamasa, qopqoq slipining chetiga yaqin joyda pipetka bilan yana bir tomchi qo'llaniladi, uning o'zi shisha ostiga tortiladi.

Har qanday rang beruvchi reagentni kiritish zarur bo'lsa, qoplama ostidagi suv filtr qog'ozi bilan so'riladi va reaktivning bir tomchisi qarama-qarshi tomondan qoplama chetiga surtiladi.

Bo'yash reagentlari quyidagi moddalar bo'lishi mumkin:

1) kaliy yodidda erigan yod (hujayralardagi kraxmal donalarini bo'yash uchun);

2) xlor-sink-yod (tsellyuloza hujayra membranalarini bo'yash uchun);

3) floroglyuksinol va xlorid kislotasi (lignlangan qobiqlarni bo'yash uchun);

4) fuksin (sitoplazmani bo'yash uchun);

5) gematoksilin (yadrolarni bo'yash uchun);

6) glitserin (dorilarni yoritish uchun).

Hujayra- o'simlik tanasining asosiy tarkibiy va funktsional birligi. Bir hujayrali o'simliklarda hujayra bir butun organizm sifatida ishlaydi, ko'p hujayrali organizmlarda hujayralarning differentsiatsiyasi kuzatiladi. Shuning uchun bunday organizmlarda hujayralarning hajmi, shakli va tuzilishi juda xilma-xildir. Voyaga etgan tirik o'simlik hujayrasi hujayra membranasi bilan o'ralgan va tirik bo'lmagan qo'shimchalarni (zaxira moddalar va metabolizmning yakuniy mahsulotlari) o'z ichiga olgan protoplastdan iborat.

Protoplast- hujayraning tirik tarkibi - gialoplazma bilan o'ralgan organellalar yoki organellalardan iborat. Organoidlar uch guruhga bo'lish mumkin: ikki membranali - yadro, plastidalar, mitoxondriyalar; bir membranali - endoplazmatik retikulum (endoplazmatik to'r - ER), Golji apparati (kompleks), vakuola, lizosomalar, plazmalemma; membrana bo'lmagan - ribosomalar, mikronaychalar, mikrofilamentlar. Gialoplazma ma'lum bir yopishqoqlikka ega bo'lgan hujayraning uzluksiz kolloid fazasidir. U barcha organoidlarni o'rab oladi va ularning o'zaro ta'sirini ta'minlaydi. Organoidlar minus yadro va plastidli gialoplazma deyiladi sitoplazma.

Yadro eukaryotik hujayraning muhim qismidir. Bu irsiy ma'lumotni saqlash va ko'paytirish joyidir. Yadro shuningdek, metabolizm va hujayrada sodir bo'ladigan deyarli barcha jarayonlarni boshqarish markazi bo'lib xizmat qiladi. Tashqarida yadro qo'sh membrana bilan qoplangan - teshiklar bilan teshilgan yadro membranasi, uning chetlarida tashqi membrana ichki qismga o'tadi. Yadroning ichki tarkibi karioplazma bo'lib, unda xromatin va nukleolalar va ribosomalar joylashgan.

Mitoxondriya barcha tirik eukaryotik hujayralarda mavjud. Ularning ichki membranasi mitoxondriyalar bo'shlig'iga krista deb ataladigan plastinka yoki naychalar shaklida o'simtalar hosil qiladi. Kristalar orasidagi bo'shliq bir hil matritsa bilan to'ldiriladi. Matritsada ribosomalar va o'z DNKsi mavjud. Mitoxondriyaning asosiy vazifasi nafas olish orqali hujayraning energiya ehtiyojlarini ta'minlashdir.

plastidlar organoidlar faqat o'simlik hujayralarida uchraydi. Ular xloroplastlar (yashil), xromoplastlar (sariq, to'q sariq, qizil-to'q sariq) va leykoplastlar (rangsiz) bilan ifodalanadi. Xloroplastlar ikki membranali membranaga ega. Ichki membrana xloroplastning bo'shlig'iga bir nechta o'simtalar bilan chiqib turadi. O‘simtalar orasida stroma joylashgan. O'simtalar va stroma xloroplast bo'shlig'ida membrana sirtlarining murakkab tizimini hosil qiladi, ular maxsus tekis qoplarni ajratib turadi. tilakoidlar yoki lamellar. Tillakoidlar steklarni hosil qiladi - donalar. Tilakoid membranalarda yashil o'simliklarning asosiy pigmenti - xlorofill va yordamchi pigmentlar - karotinoidlar mavjud.

Endoplazmatik retikulum- tekis qoplar yoki tanklar ko'rinishidagi vakuolalar va tubulalarning uch o'lchovli tizimi. Qo'pol ER oqsil sintezi joyi bo'lib, ko'plab ribosomalar bilan qoplangan. Silliq ER ribosomalardan mahrum va lipidlar hosil bo'lish joyi bo'lib xizmat qiladi.

Vakuolalar eukaryotik hujayralar protoplastidagi bo'shliqlar. Vakuolalar membrana bilan chegaralangan EPS hosilalaridir - tonoplast va suvli tarkib bilan to'ldirilgan - hujayra sharbati. Yosh o'simlik hujayralarida vakuolalar tubulalar va pufakchalar (pro-vakuolalar) tizimini ifodalaydi, hujayralar o'sishi bilan ular ko'payadi va bitta katta vakuolaga birlashadi. U hujayra hajmining 70-90% ni egallaydi, protoplast esa yupqa devorli qatlam shaklida joylashadi. Asosan hujayra hajmining oshishi
vakuolaning o'sishi tufayli yuzaga keladi. Natijada turgor bosimi paydo bo'ladi va hujayralar va to'qimalarning elastikligi saqlanadi.

hujayra shirasi mineral tuzlar va turli xil organik birikmalarning suvli eritmasi: uglevodlar (mono-, di- va polisaxaridlar), oqsillar, organik kislotalar va ularning tuzlari (eng keng tarqalgan limon, olma, süksin, oksalat kislotalari va ularning hosilalari), alkaloidlar ( azot o'z ichiga olgan birikmalar , ularning ko'pchiligi o'simlik zaharlari, ba'zilari odamlar tomonidan qo'llaniladi - kofein, atropin, xinin, morfin, kodein), taninlar (fenol hosilalari), glikozidlar (shakar hosilalari). Ikkinchisi orasida eng qiziqarli guruh flavonoidlardir (bular ikkita asosiy rangning pigmentlari: flavonlar - sariq va antosiyaninlar - qizil-binafsha). Ko'pincha flavonoidlar gullarning perianth hujayralarida mavjud bo'lib, ular turli xil ranglarni beradi. Qizig'i shundaki, antosiyaninlar hujayra shirasining reaktsiyasiga qarab rangni o'zgartirishga qodir: ozgina kislotali bo'lsa, ular qizil, neytral yoki asosli bo'lsa, ular ko'k-binafsha rangga ega. Antosiyaninlar rangining o'zgarishini unut-me-not, o'pka yoki qo'pol comfrey gullari ochilganda kuzatish mumkin. Bu o'simliklarning kurtaklari pushti korollalarga ega, ochilgan gullar esa ko'k yoki binafsha rangga ega. Gulbarglardan tashqari, antosiyaninlar o'simlikning boshqa qismlarida - barglarda, poyalarda, ildizlarda mavjud bo'lib, ularga o'ziga xos rang beradi.

golgi apparati alohida diktiosomalar va Golji pufakchalaridan iborat. Diktiosomalar bir-biriga tegmaydigan va membranalar bilan chegaralangan tekis disk shaklidagi sisternalar to'plamidir. Golji pufakchalari diktiosoma plastinkalarining chetidan yoki naychalar uchidan ajralib, plazmalemma yoki vakuola tomon yo‘nalgan. Golji pufakchalari hosil bo'lgan polisaxaridlarni tashiydi.

Davlat byudjeti ta’lim muassasasi

Oliy kasbiy ta'lim

"Bashkir davlat tibbiyot universiteti"

Sog'liqni saqlash va ijtimoiy rivojlanish vazirligi

Rossiya Federatsiyasi

Farmakognoziya kafedrasi botanika kursi va o'simlikshunoslik asoslari

"9" _ sentyabr _____2012 yil

Intizom Botanika Mutaxassislik 060301 Dorixona

Xo'sh 1 (kunduzgi bo'lim) Semestr 1

Bo'lim: "Hujayra haqidagi ta'limot. O'simlik hujayrasidagi ergastik va sekretor moddalar

№1 laboratoriya

Mavzu bo'yicha taqdimot: "Optik mikroskoplar. Botanika mikrotexnologiyasining xususiyatlari. O'simlik hujayrasining osmotik xususiyatlari

Laboratoriya №2

Mavzu bo'yicha taqdimot: "Hujayra devorining tuzilishi. Plastidlar, zaxira va mineral qo'shimchalar"

talabalar

Ufa 2012 yil
№1 laboratoriya

Dars mavzusi: “Optik mikroskoplar. Botanika mikrotexnologiyasining xususiyatlari. O'simlik hujayrasining osmotik xususiyatlari

1. Muvofiqlik. Botanika mikrotexnika usullarini o‘rganish “O‘simliklar sitologiyasi, gistologiyasi va anatomiyasi” bo‘limida amaliy ko‘nikmalarni egallashning zaruriy sharti hisoblanadi. O'simlik hujayrasining tuzilishi va uning osmotik xususiyatlarini o'rganish o'simlik organizmlarining hujayra tuzilishi, tuzilish xususiyatlari va hayvonlardan farqlari haqida tasavvur beradi.

2. Darsning maqsadlari:

1. Mikroskop bilan ishlash malakalarini egallash;

2. Vaqtinchalik mikropreparatlar tayyorlash malakalarini egallash

3. Butun, kesilgan va kukun holidagi dorivor o‘simlik materiallarini mikroskopik tahlil qilish botanika mikrotexnologiyasi ko‘nikmalarini egallash;

4. O'simlik hujayrasining tuzilish xususiyatlarini o'rganing

5. O‘simlik hujayrasining xossalarini o‘rganing

bilish :

Mikroskop qurilmasi va u bilan ishlash qoidalari;

· hujayraning o'rganish tarixi, hujayra nazariyasi postulatlari;

Prokaryotik hujayraning tuzilishi

Eukariot hujayraning tuzilishi, uning asosiy organellalari;

O'simlik hujayrasi tuzilishining xususiyatlari.

Kasbiy kompetensiyalarni shakllantirish uchun talaba kerak imkoniyatiga ega bo'lish :

mikropreparat tayyorlang;

Mikroskopni past va yuqori kattalashtirishda mikropreparatni tekshirish;

hujayraning organlarini toping;

· plazmoliz va deplazmoliz reaksiyalarini olib borish, nazariy asoslash;

Kasbiy kompetentsiyani shakllantirish uchun talaba kerak Shaxsiy :

Botanika kontseptual apparati;

· o'simlik ob'ektlarining mikropreparatlarini mikroskopiya va gistokimyoviy tahlil qilish texnikasi.

3. Zarur asosiy bilim va malakalar:

prokaryotik va eukaryotik hujayralarning tuzilishi, ularning farqlari haqidagi zamonaviy g'oyalar.

mikroskop qurilmasi.

4. Sinfdan tashqari ishlarning davomiyligi– 2 akademik soat (90 min).

O'z-o'zini tayyorlash uchun savollar:

1. Mikroskop. Mexanik va optik tizimlar.

2. Mikroskop bilan ishlash qoidalari

3. Ishlash masofasi. Rezolyutsiya. Umumiy o'sish.

4. Hujayra. O'rganish tarixi. hujayra nazariyasi

5. O'simlik hujayrasining qo'ziqorin va hayvon hujayrasining farqi

6. Hujayraning tuzilishi. Yadro, tuzilishi, funktsiyalari.

7. O‘simlik hujayrasi organoidlari. Tuzilishi, funktsiyalari

8. Sitoplazma. Tuzilishi, funktsiyalari

9. Vakuol, tuzilishi, funktsiyalari

Vazifalar uchun tushuntirish

Mikroskop.

Mikroskop - optik-mexanik tizim bo'lib, o'lchamlari yalang'och ko'zning ruxsatidan tashqarida joylashgan ob'ektlarning kattalashtirilgan tasvirini olish imkonini beradi. Ko'zning o'lchamlari 0,15 mm. Yorug'lik mikroskoplarining aniqligi yalang'och ko'zning aniqligidan 300-400 marta yuqori va 0,1-0,3 mikronga teng.

Mikroskopda optik va mexanik tizimlar ajralib turadi. Optik tizim yoritgich, linza va okulyardan iborat. Mexanik tizim revolver, trubka, tripod, ob'ektlar stoli, makro va mikro vintlardan iborat.

Yoritish moslamasi quyidagilarni o'z ichiga oladi:

Kondenser (eng yaxshi yoritish, tasvir aniqligini nazorat qilish uchun mo'ljallangan);

Iris diafragmasi (yorug'lik nurining diametrini va ko'rish maydonining chuqurligini tartibga solish uchun mo'ljallangan);

Oyna (nurlarni yorug'lik manbasidan kondensatorga yo'naltirish uchun mo'ljallangan).

Ob'ektiv optik tizimning eng muhim qismidir. Ob'ektiv qismlarning teskari joylashuvi bilan ob'ektning tasvirini beradi. Shu bilan birga, u yalang'och ko'z bilan ko'rish mumkin bo'lmagan tuzilmalarni ("hal qiladi") ochib beradi.

Ob'ektiv tomonidan qurilgan tasvirni kuzatish uchun okulyar ishlatiladi. Okuyarning diafragmasi ko'rish maydonining chegaralarini belgilaydi. Umuman olganda, ob'ektiv ham, okulyar ham mikroskopning ajralish kuchini ta'minlaydi va mikroskopning umumiy kattalashishini aniqlaydi (mikroskopning umumiy kattalashtirishi ob'ektiv okulyarning kattalashtirish mahsuloti sifatida aniqlanadi).

Mikroskopning mexanik tizimi optik tizim qismlarini o'rnatish uchun mo'ljallangan.

Mikroskop bilan ishlash

1. Mikroskopni chap yelkaning qarshisiga o'rnating, oldingizda albom uchun joy ajrating. Ob'ektivni ish holatiga qo'ying. Ob'ektivning to'g'ri o'rnatilishi revolver aylantirilganda seziladigan bosish orqali baholanishi kerak. Ob'ektiv va slayd orasidagi masofa taxminan 1 sm bo'lishi kerak.Har doim mikroskop bilan ishlashni past kattalashtirishda boshlang.

2. Diafragmani to'liq oching. Kondensatorni sahna darajasiga ko'taring. Yorug'likni konkav oyna bilan yo'naltiring, shunda butun maydon yorqin va teng ravishda yoritiladi.

3. Tayyorlangan mikropreparatni sahnaga qo'ying, shunda bo'limlardan biri ob'ektiv ostida aniq joylashadi. Mikropreparatni tuzatish uchun slaydni qisqich bilan bosing.

4. Mikroskopda aniq tasvirni olish uchun so'l vint yordamida kerakli fokus uzunligini o'rnating. Masofani mikro vint bilan to'g'rilang.

5. Mikroskopni yuqoriroq kattalashtirishga o'tkazishdan oldin kerakli kesish nuqtasini tanlang, uni ko'rish maydonining markaziga qo'ying va shundan keyingina revolverni ehtiyotkorlik bilan aylantirib, ob'ektivlarni o'zgartiring.

6. Ishni tugatgandan so'ng, mikroskopni past kattalashtirishga o'tkazish va mikropreparatni olib tashlash kerak.

7. Foydalanishdan keyin mikroskopni himoya qilish yoki changdan tozalash uchun qopqoq bilan yopish kerak.

Vaqtinchalik mikropreparatlarni tayyorlash usuli

1. Ob'ektni chap qo'lda olish va uchta barmoq bilan qisish kerak, o'ng qo'lda xavfsizlik ustara yoki pichoqni ushlab turish kerak.

2. Ob'ektning sirtini kesilgan tekislik organning o'qiga perpendikulyar bo'lishi uchun tekislang. Tilimlar ustarani sizga qarab harakatlantirish orqali amalga oshiriladi.

3. Pipetka yordamida slaydning o'rtasiga 2-3 tomchi suv qo'ying va kesuvchi igna uchidagi eng nozik bo'laklarni o'tkazing, ob'ektni qopqoq bilan yoping. Qopqoq ostidan suyuqlik oqmasligi kerak.

4. Tayyorlangan preparatni ob'ekt stoliga qo'ying, uni past va yuqori kattalashtirishda tekshiring.

5. Ob'ektlarni o'rganish uchun vaqtinchalik tayyorgarlikdan tashqari doimiy preparatlar qo'llaniladi. Ulardagi inklyuziya suyuqligi jelatin yoki Kanada balzamli glitserindir.

6. Preparatni bo'yashda shuni hisobga olish kerakki, konsentrlangan kislotalar ta'sirida hujayradagi organik qo'shimchalar kuyib ketishi, mineral qo'shimchalar (kristallar, druzalar, tsistolitlar) butunlay yo'q bo'lib ketishi yoki shaklini o'zgartirishi mumkin.

7. Siz x40 linzalari ostidan preparatni olib tashlay olmaysiz, chunki. uning ish masofasi 0,6 mm va old linzalarni buzish oson.

Hujayra

Hujayra barcha tirik mavjudotlarning asosiy strukturaviy va funktsional birligidir. Hujayralar birinchi marta XVII asrning o'rtalarida (1665) Robert Guk tomonidan qo'ziqorin bo'lagini tekshirish paytida tasvirlangan. Mikroskopning takomillashuvi bilan hujayra haqidagi bilimlar kengaydi. 19-asrning oʻrtalariga kelib hujayra haqida yetarlicha bilimlar toʻplandi - yadro, plastidalar, hujayra boʻlinishi va boshqalarning kashf etilishi. Hujayra haqidagi barcha bilimlar 19-asrning 30-40-yillari boshlarida umumlashtirildi. botanik M. Shleyden va zoolog T. Shvann hujayra nazariyasi shaklida.

Hujayra nazariyasining asosiy tezislari (postulatlari):

1. hujayra - barcha tirik mavjudotlarning strukturaviy va funktsional birligi;

2. ko'p hujayrali organizm - faoliyat yurituvchi va o'zaro ta'sir qiluvchi hujayralardan tashkil topgan murakkab tashkil etilgan, yaxlit tizim;

3. barcha hujayralar tuzilishi bo'yicha gomologik;

4. "hujayradan hujayra." Hujayraning boʻlinish yoʻli bilan uzluksizligi tamoyiliga 1958-yilda nemis olimi R.Virxov asos solgan.

Hujayralarning shakli, tuzilishi va hajmi juda xilma-xildir. O'simlik hujayrasi quyidagilardan iborat protoplast, membrana yoki hujayra devori va vakuola.

Protoplast o'z ichiga oladi: sitoplazma, yadro, plastidlar, mitoxondriyalar.

Sitoplazma- plazma membranasi va yadro orasidagi protoplastning bir qismi. Sitoplazmaning asosi uning matritsasi yoki gialoplazma- murakkab, rangsiz kolloid sistema. Gialoplazmaning eng muhim roli barcha hujayra tuzilmalarini yagona tizimga birlashtirish, hujayra metabolizmi jarayonlarida ular o'rtasidagi o'zaro ta'sirni ta'minlashdir. Sitoplazmada nuklein kislotalarning sintezidan tashqari hujayra metabolizmining ko'p jarayonlari amalga oshiriladi.

Yadro- barcha eukariotlarning tirik hujayrasining majburiy va asosiy qismi. Yadroning funktsiyalari: irsiy ma'lumotlarni saqlash va ko'paytirish, metabolizmni va hujayrada sodir bo'ladigan deyarli barcha jarayonlarni boshqarish, nuklein kislotalar sintezi, oqsil sintezi. Yadro juda katta teshiklari bo'lgan ikkita membranadan iborat membrana bilan o'ralgan. Yadroning ichki tarkibi yadro shirasi yoki nukleoplazma deb ataladi. Bir yoki bir nechta yadrochalar yadro sharbatiga botiriladi.

Mitoxondriya shakli, hajmi va soni doimiy ravishda o'zgarib turadigan hujayra organellalari. Asosiy vazifasi energiyaga boy moddalarni (qandlarni) oksidlash va ATP va ADP sintez qilish orqali hujayraning energiya ehtiyojlarini ta'minlashdir. Mitoxondriyalar ikkita membrana bilan o'ralgan, ichki qismi o'simtalarni - kristalarni hosil qiladi. Mitoxondriya ham plastidlar kabi yarim avtonom organellalardir, chunki matritsada DNK va ribosomalarni o'z ichiga oladi.

plastidlar faqat o'simliklarga xosdir. Plastidlarning uch turi mavjud: xloroplastlar, xromoplastlar va leykoplastlar. Xloroplastlarning asosiy vazifasi fotosintez, leykoplastlar ozuqa moddalarini saqlash, xromoplastlar esa gullar va mevalarning rangidir. Xloroplastlar qo'sh membrana, matritsa, granaga birlashtirilgan tilakoidlar, DNK, ribosomalar, birlamchi kraxmal donalaridan iborat.

Golji kompleksi- membranalar bilan o'ralgan diskoid qoplar va pufakchalar tizimi. Ayrim polisaxaridlarni (pektinlar, shilimshiq va boshqalar), ikkilamchi metabolitlarni sintez qilish, to'plash va izolyatsiya qilish funktsiyalarini bajaradi; vakuolalar va lizosomalarning shakllanishi; ma'lum oqsillarni taqsimlash va hujayra ichidagi tashish; sitoplazmatik membranani qurishda ishtirok etadi.

EPS (endoplazmatik retikulum) - submikroskopik kanallarning membrana bilan cheklangan tizimi. EPS silliq va qo'polga bo'linadi. Qo'pol EPS funktsiyalari: oqsil sintezi; makromolekulalar va ionlarni yo'naltirilgan tashish; membranani shakllantirish; organoidlarning o'zaro ta'siri. Silliq EPS funktsiyasi lipofil birikmalarning sintezidir.

Vakuola- hujayradagi membrana (tonoplast) bilan o'ralgan va hujayra shirasi bilan to'ldirilgan bo'shliq. Hujayra sharbati turli moddalarning suvli eritmasi - protoplast chiqindilari. Vakuolalarning vazifalari: zahiradagi moddalar va shlaklarning to'planishi; hujayra turgorini saqlash; hujayraning suv-tuz balansini tartibga solish.

hujayra devori hujayrani muhitdan ajratib turadi. U mikrofibrillalar va fibrillalarga birlashtirilgan tsellyuloza molekulalariga asoslangan. Tsellyuloza molekulalari ko'proq shoxlangan tuzilishga ega bo'lgan polisaxaridlar - gemitsellyulozalar va pektinlar, shuningdek, suvdan iborat matritsaga botiriladi. Hujayra devori juda kuchli va shu bilan birga elastik. Unga kuch tsellyuloza molekulalari tomonidan, elastiklik - matritsa tomonidan beriladi. Hujayra devori shakllantirish va mexanik funktsiyalarni bajaradi, protoplastni himoya qiladi, vakuolaning yuqori osmotik bosimiga qarshilik ko'rsatadi va moddalar hujayra devori orqali tashiladi.

Siz birinchisini sotib oldingiz optik mikroskop, uning dizaynini, shuningdek, u bilan ishlash qoidalarini diqqat bilan o'rganib chiqdi. To'g'ridan-to'g'ri o'qishga o'tish vaqti keldi. Biz nimani o'rganamiz? Har qanday ob'ektni yorug'lik mikroskopi yordamida o'rganish uchun avvalo mikropreparat tayyorlash kerak.

Mikropreparat vaqtinchalik yoki doimiy bo'lishi mumkin. Ovqat pishirish uchun vaqtinchalik dori, avval shisha slaydga bir tomchi suv (glitserin, eritma, bo'yoq, reagent) qo'yish kerak, so'ngra mikroob'ektning o'zini bu tomchiga qo'yish kerak. Shundan so'ng, tomchi qopqoq bilan qoplangan. Olingan mikropreparat foydalanishga tayyor. Bunday vaqtinchalik preparat, agar to'g'ri saqlangan bo'lsa, keyingi bir necha kun ichida qayta ishlatilishi mumkin. Doimiy mikropreparatlar, vaqtinchaliklardan farqli o'laroq, yillar davomida saqlanishi mumkin, buning uchun mikroob'ektlar maxsus balzamga (celloidin) joylashtiriladi.

Aytmoqchi, yana bir hiyla bor - agar preparatda namuna sifatida ishlatiladigan mikroorganizmlar juda harakatchan bo'lsa, suvga 1,5% metiltsellyuloza eritmasi qo'shilishi mumkin, bu ularning harakatini sekinlashtiradi.

Mikropreparatlarni quruq va ho'l bo'lish mumkin. Nam preparatni tayyorlash texnikasi, ya'ni namuna tirik qolish uchun suvsiz ishlamaydigan preparat yuqorida tavsiflangan. Haqida quruq mikropreparatlar, keyin ularni tayyorlash uchun suv ishlatilmaydi. Namunaning juda yupqa qismi shisha slaydga joylashtiriladi va qopqoq bilan qoplanadi. Shundan so'ng, qoplamani engil bosib qo'yish mumkin (izlarni qoldirmaslik uchun buni faqat rezina qo'lqop bilan bajaring).

Ba'zida mikropreparatlarni tayyorlashda qo'shimcha ravishda maxsus bo'yoq qo'llaniladi, chunki bo'yashsiz ba'zi namunalarni mikroskop ostida o'rganish juda qiyin. Odatda, bo'yoq sifatida yod va kaliy yodid eritmasi ishlatiladi ("metilen ko'k" yoki "kristal binafsha" eritmasi ham ishlatilishi mumkin).

O'rganilayotgan namunalar mikroskop ostida bir butun sifatida ko'rish mumkin bo'lganlarga (masalan, sporalar, gulchanglar va boshqalar) va o'rganish uchun oldindan kesishni talab qiladiganlarga bo'linadi. Butun namunalardan foydalanadigan slaydlar deyiladi jami.

Kesishlarga kelsak, ular bo'lishi mumkin ko'ndalang yoki uzunlamasına(radial, tangensial, paradermal). Ko'ndalang kesma organ o'qiga perpendikulyar, bo'ylama esa organ o'qi radiusi bo'ylab amalga oshiriladi. Tangensial kesma silindrsimon konstruksiya (mas, poya) radiusiga perpendikulyar, paradermal kesma esa tekis konstruksiya (mas, barg) yuzasiga parallel ravishda amalga oshiriladi.

Kesmalar juda o'tkir pichoq bilan amalga oshiriladi, u doimo suv bilan namlanadi. Bir vaqtning o'zida bir nechta bo'laklarni qilish kerak, shundan so'ng eng nozikini tanlang va uni kesish ignasi yordamida bir tomchi suvga slaydning o'rtasiga qo'ying.

1) Vaqtinchalik tayyorgarlik

O'simlik ob'ektlarini yorug'lik mikroskopi yordamida o'rganish uchun mikropreparat tayyorlash kerak. Uzoq muddatli saqlash uchun mo'ljallanmagan mikropreparatlar vaqtinchalik deyiladi. O'rganilayotgan ob'ekt bir tomchi suv, glitserin, eritma, reagent yoki bo'yoq solingan shisha slaydga qo'yiladi va qopqoq bilan yopiladi. Bunday preparatlarni nam muhitda joylashtirish orqali bir necha kun davomida saqlanishi mumkin.

2) Doimiy tayyorgarlik

Doimiy preparatlar o'nlab yillar davomida saqlanishini ta'minlaydigan maxsus usullar bo'yicha tayyorlanadi. Doimiy preparatlarga smear, umumiy preparatlar va bo'limlar kiradi. Smears qon hujayralarini, mikroorganizmlar madaniyatini, izolyatsiya qilingan to'qima hujayralarini o'rganishda qo'llaniladi. Jami preparatlar alohida shaffof va yupqa narsalardir.O'quv bo'limlarini ustara yordamida qo'lda qilish mumkin. Biroq, berilgan qalinligi 10 ... 22 mikrometr bo'lgan yuqori sifatli bo'limlar odatda maxsus qurilmalar - mikrotomlar yordamida amalga oshiriladi. Bunday bo'limlar ko'pincha mikrotom preparatlari deb ataladi. Yupqaroq bo'laklarni (0,01 ... 0,05 mikron yoki 10 ... 50 nanometr) olish uchun ultramikrotomlar qo'llaniladi.

Keling, doimiy tayyorgarlikni tayyorlashning asosiy bosqichlarini qisqacha ko'rib chiqaylik.

1. Materialni mahkamlash. Fiksatsiya tugagandan so'ng darhol material suv bilan yuviladi (suv fiksatorlaridan keyin) yoki 80% alkogol (spirtli fiksatorlardan keyin). Yuvish suyuqliklarining o'zgarishlar soni - kamida 3. Vaqt - 24 soatgacha.

2. Konsentratsiyani oshiradigan spirtlarda suvsizlanish. Bunga parallel ravishda material siqiladi. Bir qator eritmalar orqali materialning ketma-ket harakatlanishiga simlar deyiladi. Suvni fiksatorlardan so'ng 8 ta alkogol o'zgarishi qo'llaniladi: 20%, 40%, 80%, ikkita o'zgarish 96%, ikkita o'zgarish 100%. Spirtli ichimliklarni fiksatorlardan so'ng - 4 ta alkogol o'zgarishi: 96% ning ikkita o'zgarishi va 100% ning ikkita o'zgarishi. Har bir smenada material 1 soat davomida qariydi.

3. Ma'rifat. Bu materialni kerosin erituvchisi - ksilen (benzol, xloroform) bilan singdirishdir. Namuna quyidagi eritmalarning har biriga ketma-ket 1 soat davomida joylashtiriladi: 3 qism spirt + 1 qism ksilen, keyin 2 qism spirt + 2 qism ksilen, keyin 1 qism spirt + 3 qism ksilen, so'ngra ksilenning ikki o'zgarishi.

4. Parafin ichiga singdirilgan. Bu ksilenni kerosin bilan almashtirishdir. Namuna 55 ... 57 daraja haroratda ksilen va kerosin aralashmasiga joylashtiriladi va ksilen to'liq bug'lanib ketguncha (bir necha soatdan bir necha kungacha) bu haroratda termostatda qoldiriladi. Keyin, 55 ... 57 daraja haroratda, simlar parafin I (6 ... 12 soat), kerosin II (6 ... 12 soat) orqali amalga oshiriladi va kerosin III ga quyiladi. I, II, III parafinlar faqat tozaligi bilan farqlanadi: parafin III oxirgi muhit bo'lib, u eng yuqori tozalikka ega bo'lishi kerak. Natijada kerosin bloklari olinadi, unda material namunalari o'raladi. Ushbu bloklar har qanday yo'nalishda kesilishi mumkin.

5. Kesilgan joylarni bo'yash. Parafin bo'laklari toza shisha slaydga yopishtiriladi. Yopishtiruvchi sifatida siz tovuq tuxumi oqsilining glitserin bilan aralashmasidan (1: 2 nisbatda) antiseptik (timol yoki fenol) qo'shilishi bilan foydalanishingiz mumkin. Bo'limlar odatda parafinsizlanadi. Buning uchun elimlangan kesmalari bo'lgan shisha ksilen, konsentratsiyasi pasaygan spirtlar (100%, 96%, 80%, 70%) va distillangan suvdan o'tkaziladi. Har bir muhitda yashash vaqti 2...3 minut. Keyin usullarga muvofiq bo'yalgan.

6. Bo'yalgan qismlarni suvsizlantirish va tozalash. Bu ortib borayotgan konsentratsiyali spirtlar orqali, so'ngra ksilen orqali simlar orqali amalga oshiriladi.

7. Atrof-muhitdagi xulosa (to'ldirish). Dori-darmonlarni uzoq muddatli saqlash uchun ular preparatni havo oksidlanishidan va qo'ziqorin hujumidan himoya qiladigan muhitga joylashtirilishi kerak. To'ldirish uchun maxsus qatronlar (Kanada balzami, archa balzam) ishlatiladi, ular ksilenda suyuq asalning mustahkamligigacha eritiladi. Ushbu eritmaning bir tomchisi bo'limga qo'llaniladi va qoplama bilan qoplanadi.

6. Hujayra moddaning kimyoviy tarkibi. Mikro va makro elementlar.

Hujayra tarkibida 80 dan ortiq kimyoviy elementlar topilgan, faqat tirik organizmlarga xos bo'lgan maxsus elementlar topilmagan. Biroq, faqat 27 ta element qanday funktsiyalarni bajarishini biladi. qolgan 53 element, ehtimol, tashqi muhitdan tanaga kiradi.

1. Makronutrientlar

Ular hujayra moddasining asosiy qismini tashkil qiladi. Ular butun hujayra massasining taxminan 99% ni tashkil qiladi. To'rt elementning konsentratsiyasi ayniqsa yuqori: kislorod (65-75%), uglerod (15-18%), azot (1,5-3%) va vodorod (8-10%). Makroelementlarga hujayradagi tarkibi foizning o'ndan va yuzdan bir qismi bilan hisoblangan elementlar ham kiradi. Bular, masalan, kaliy, magniy, fosfor, oltingugurt, temir, xlor, natriy.

2. Mikroelementlar Bularga asosan fermentlar, gormonlar va bir qismi bo'lgan metall atomlari kiradi

boshqa muhim moddalar. Organizmda bu elementlar juda oz miqdorda bo'ladi: 0,001 dan 0,000001% gacha; bunday elementlar orasida bor, kobalt, mis, molibden, rux, yod, brom va boshqalar bor.

3. Ultramikroelementlar

Ularning konsentratsiyasi 0,000001% dan oshmaydi. Ularga uran, radiy, oltin, simob, berilliy, seziy va boshqa nodir elementlar kiradi. Bu elementlarning ko'pchiligining o'simliklar, hayvonlar, zamburug'lar va bakteriyalar organizmlarida fiziologik roli hali aniqlanmagan.