1 Bolshakova L.S. bittaMilentiyev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Federal davlat byudjeti oliy kasbiy ta'lim muassasasi "Orlovskiy davlat instituti iqtisodiyot va savdo"

2 Federal davlat byudjet muassasasi "Orlovskiy" Kimyoviylashtirish va qishloq xo'jaligi radiologiyasi markazi

3 Federal davlat byudjeti oliy kasbiy ta'lim muassasasi "Davlat universiteti - o'quv, ilmiy va ishlab chiqarish majmuasi"

Oziq-ovqat moddalarining antioksidant faolligini baholash uchun xemiluminesansdan foydalanish imkoniyati o'rganildi. Taklif etilayotgan usul ishqoriy muhitda luminolning xemilyuminessensiyasiga asoslangan bo'lib, uning intensivligi kimiluminesans namunadagi peroksidlar miqdoriga bog'liq. Kimiluminesans dozalash pompasi, yorug'lik o'tkazmaydigan kamera, shisha vakuumli fotoko'paytiruvchi trubka va kompyuter tizimini o'z ichiga olgan ishlab chiqilgan qurilma yordamida qayd etildi. Xemiluminesansni kuchaytirish uchun luminolga kaliy ferrisiyanid eritmasi qo'shildi. Xemiluminesans intensivligidagi o'zgarishlar tahlil qilingan namunani luminol eritmasiga kiritish paytida qayd etilgan. Tahlil qilingan namuna sifatida quruq past haroratli distillash orqali olingan karahindiba ekstrakti ishlatilgan. Uning tarkibida yuqori antioksidant faolligi bilan mashhur fenolik birikmalar mavjud. Xemiluminesans usuli yordamida turli oziq-ovqat birikmalarining antioksidant xususiyatlarini aniqlash mumkinligi aniqlandi.

Oziq-ovqat moddalarining antioksidant faolligini baholash uchun xemiluminesansdan foydalanish imkoniyati o'rganildi. Taklif etilayotgan usul ishqoriy muhitda luminolning xemilyuminessensiyasiga asoslangan bo'lib, uning intensivligi kimiluminesans namunadagi peroksidlar miqdoriga bog'liq. Kimiluminesans dozalash pompasi, yorug'lik o'tkazmaydigan kamera, shisha vakuumli fotoko'paytiruvchi trubka va kompyuter tizimini o'z ichiga olgan ishlab chiqilgan qurilma yordamida qayd etildi. Xemiluminesansni kuchaytirish uchun luminolga kaliy ferrisiyanid eritmasi qo'shildi. Xemiluminesans intensivligidagi o'zgarishlar tahlil qilingan namunani luminol eritmasiga kiritish paytida qayd etilgan. Tahlil qilingan namuna sifatida quruq past haroratli distillash orqali olingan karahindiba ekstrakti ishlatilgan. Uning tarkibida yuqori antioksidant faolligi bilan mashhur fenolik birikmalar mavjud. Xemiluminesans usuli yordamida turli oziq-ovqat birikmalarining antioksidant xususiyatlarini aniqlash mumkinligi aniqlandi.

Bibliografik havola

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentiev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. XEMILYUMİNESSENSIYANI OZIQ NOVTALARNING ANTIOKSIDANT XUSUSIYATLARINI BAHOLASH UCHUN FOYDALANISH // Ratsional ovqatlanish, oziq-ovqat qo'shimchalari va biostimulyatorlar. - 2014. - No 6. - B. 36-37;
URL: http://journal-nutrition.ru/ru/article/view?id=283 (kirish sanasi: 17.12.2019). "Tabiiy tarix akademiyasi" nashriyoti tomonidan chop etilgan jurnallarni e'tiboringizga havola qilamiz.

Antioksidantlar (AO)- oksidlanishni oldini oluvchi moddalar. Tirik organizmda oksidlanishning etakchi omili erkin radikallarning hosil bo'lishidir, shuning uchun antioksidantlarning biologik tizimlardagi ta'siri asosan organik moddalarning erkin radikallar tomonidan oksidlanishini oldini olish nuqtai nazaridan ko'rib chiqiladi.

Hozirgi vaqtda antioksidantlarni aniqlash uchun juda ko'p turli xil usullar mavjud: fotometrik, kimyoviy, elektrokimyoviy va boshqalar. Biroq, ularning ko'pchiligi ushbu usullar bilan olingan natijalarni tushunish va undan foydalanishni qiyinlashtiradigan muhim kamchiliklarga ega. Eng keng tarqalgan kamchiliklarga quyidagilar kiradi:

  • Antioksidant ta'sirini o'lchash uchun sun'iy yoki biologik tizimlar uchun xos bo'lmagan shartlar qo'llaniladi. Masalan, biologik erkin radikal reaktsiyalar o'rniga sof kimyoviy redoks reaktsiyalari qo'llaniladi yoki moddaning elektr toki ta'sirida elektronlarni berish / qabul qilish qobiliyati o'lchanadi. Bunday sharoitlarda olingan o'lchovlar natijalari sinov moddasi tanada bir xil "antioksidant" ta'sir ko'rsatadi, deb aytishga imkon bermaydi.
  • Antioksidant ta'sirini aniqlash to'plangan oksidlanish mahsulotlari (oksidlanish belgilari) miqdorini o'lchash yo'li bilan amalga oshiriladi. Shunday qilib, sinov namunasida antioksidant miqdorini aniqlash haqiqatan ham mumkin, ammo antioksidantning faolligi haqida juda muhim ma'lumot o'tkazib yuborilgan. Antioksidantning faolligiga e'tibor bermaslik, o'z navbatida, uning miqdorini aniqlashda sezilarli xatolarga olib kelishi mumkin, masalan, sekin, lekin uzoq vaqt davomida harakat qiladigan "zaif" antioksidantlar uchun.
Umuman olganda, antioksidantlarni aniqlash sohasida standartlashtirish mavjud emas, bu turli usullar bilan olingan natijalarni bir-biri bilan solishtirish imkonini beradi.

Kimiluminesans usuli antioksidantlarni o'rganishning eng informatsion usuli bo'lib, bir qator muhim afzalliklarga ega:

  1. Antioksidant faollikni bevosita aniqlash- antioksidantlarning erkin radikallarga bevosita ta'siri qayd etilgan. Xemiluminesans usuli kimyoviy erkin radikallarni ishlab chiqarish tizimidan foydalanadi, bu nazorat kimyoviy nurlanishini hosil qiladi. Keyin bunday tizimga antioksidant qo'shiladi, bu erkin radikallarni zararsizlantiradi, bu esa nazorat qiluvchi xemiluminesansni bostirishga olib keladi.
    Ushbu yondashuvning muhim afzalligi erkin radikallarni hosil qilish uchun turli xil kimyoviy tizimlardan foydalanish imkoniyatidir, bu antioksidantlarning o'ziga xosligini va ularning ta'sirining lokalizatsiyasini qo'shimcha ravishda aniqlash imkonini beradi.
  2. Antioksidantlarning miqdoriy va sifat ko'rsatkichlarini o'lchash- xemiluminesans usuli antioksidant ta'sirga ega har qanday birikmani ikkita mustaqil ko'rsatkich bilan tavsiflash imkonini beradi:
    • Antioksidant quvvati (AOE)- ma'lum hajmdagi namunadagi birikmani zararsizlantirishi mumkin bo'lgan erkin radikallarning umumiy miqdori.
    • Antioksidant faollik (AOA)- erkin radikallarni zararsizlantirish tezligi, ya'ni. vaqt birligida neytrallangan radikallar soni.

Kimiluminesans usuli antioksidantlarning ta'sirini ikkita ko'rsatkich - miqdoriy (AOE) va sifat (AOA) bilan baholash kerakligi haqida muhim tushuncha beradi.
Quyidagi rasmda ushbu pozitsiya ko'rsatilgan:

Xemiluminesansga turli antioksidantlarning ta'siri
(grafiklar yonidagi raqamlar antioksidant kontsentratsiyasini ko'rsatadi):
chapda - "kuchli" antioksidant, o'ngda - "zaif" antioksidant.

Antioksidantlar faolligida sezilarli darajada farqlanadi. "Kuchli" antioksidantlar mavjud, ya'ni. yuqori faollikka ega antioksidantlar, erkin radikallarni yuqori tezlikda inhibe qiladi va kimyoluminesansni to'liq inhibe qiladi. Bunday antioksidantlar past konsentratsiyalarda allaqachon maksimal ta'sirga ega va tezda iste'mol qilinadi. Boshqa tomondan, "zaif" antioksidantlar mavjud, ya'ni. erkin radikallarni past tezlikda inhibe qiluvchi va xemiluminesansni qisman bostiruvchi past faollikka ega antioksidantlar. Bunday antioksidantlar faqat yuqori konsentratsiyalarda sezilarli ta'sir ko'rsatadi, lekin ular asta-sekin iste'mol qilinadi va uzoq vaqt davomida harakat qiladi.

Antioksidant parametrlarini aniqlash uchun xemiluminesans usulidan foydalanish mumkin:

  • biologik suyuqliklar (plazma, tupurik, siydik);
  • farmakologik preparatlar va biologik faol qo'shimchalar;
  • ichimliklar va oziq-ovqat qo'shimchalari;
  • kosmetika va parvarish mahsulotlari;
  • va boshq.
Antioksidantlarni aniqlashning xemiluminesans usulini amalga oshirish uchun quyidagi jihozlardan foydalanish tavsiya etiladi:
  • Chemiluminometer Lum-100 - haroratni nazorat qilish va 1 namunaning kimiluminesansini ro'yxatga olishni ta'minlaydi.
  • Chemiluminometer Lum-1200 - haroratni nazorat qilish va bir vaqtning o'zida 12 ta namunagacha kimiluminesansni ro'yxatga olishni ta'minlaydi.

], ammo antioksidantlarning ta'rifi sifatida kimyoviy birikmalar o'rganilayotgan ob'ektning himoya xususiyatlarining to'liq tasvirini bermaydi: ular nafaqat u yoki bu antioksidantning miqdori, balki ularning har birining faolligi bilan ham belgilanadi. Antioksidant faollik yoki antioksidant faollik, AOA, antioksidantning erkin radikal (kInH) bilan reaktsiyasi tezligi konstantasidir. Xemiluminesans (CL) usuli namunadagi antioksidantlar bog'laydigan radikallarning umumiy miqdorini (umumiy antioksidant sig'imi, TAU) va usuldan foydalanganda aniqlash imkonini beradi. matematik modellashtirish CL kinetikasi - shuningdek, antioksidantlar bilan radikallarning hosil bo'lish tezligi va reaktsiyasi, ya'ni AOA [ , , ].

Umumiy antioksidant sig'imni aniqlash uchun xemiluminesans usulining eng keng tarqalgan modifikatsiyasi luminoldan kimyoluminesans faollashtiruvchisi sifatida foydalanishga asoslangan [ , , , ]. Namuna luminol, vodorod peroksid va radikallar hosil qila oladigan birikma qo'shilgan holda xemiluminometr hujayrasiga joylashtiriladi. spontan parchalanish(termoliz), masalan, 2,2'-azobis-(2-amidinopropan) dihidroklorid (ABAP): ABAP → 2R. Molekulyar kislorod ishtirokida R alkil radikali peroksil radikal ROO hosil qiladi: R + O 2 → ROO. Bundan tashqari, peroksil radikali xemiluminesans prob luminolni (LH 2) oksidlaydi va luminol radikali (LH ) hosil bo'ladi: ROO + LH 2 → ROOH + LH . LH dan oraliq moddalar (luminol gidroperoksid va luminol endoperoksid) hosil bo'lishi orqali luminol oksidlanishining yakuniy mahsuloti - aminoftalik kislota molekulasi foton chiqaradigan elektron qo'zg'aluvchan holatda hosil bo'ladi va buning natijasida xemiluminesans kuzatiladi. . CL intensivligi foton ishlab chiqarish tezligiga mutanosibdir, bu esa o'z navbatida tizimdagi statsionar LH kontsentratsiyasiga proportsionaldir. Radikallar bilan o'zaro ta'sirlashganda, antioksidantlar tasvirlangan transformatsiyalar zanjirini to'xtatadi va foton shakllanishiga to'sqinlik qiladi.

Termolizga duchor bo'lgan birikmalar kimyoviy nurlanish usuli bilan namunaning antioksidant qobiliyatini tahlil qilishda radikallarning yagona mumkin bo'lgan manbai emas. Alternativlar - otquloq peroksidaza-vodorod peroksid [ , ], gemin-vodorod peroksid, sitoxrom tizimlari Bilan–kardiolipin–vodorod peroksid va boshqalar. Peroksidazalar ta’sirida luminol oksidlanish reaksiyalarining sxemasi Kormier va boshqalarning ishlarida ko‘rib chiqilgan. .

Ushbu tizimlar uchun CL kinetik egri reaksiyaning ikki bosqichini aks ettiradi: CL intensivligining ortishi bosqichi va plato bosqichi yoki CL intensivligi doimiy yoki sekin kamayib borayotgan lyuminesansning bosqichma-bosqich pasayishi. Qog'ozda egri chiziqlarning ushbu xususiyatini hisobga olgan holda umumiy antioksidant quvvatni o'lchashning ikkita yondashuvi tasvirlangan. TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) usuli CL ning yashirin davrini o'lchashga asoslangan. τ va troloks yoki askorbin kislotasi kabi antioksidantlarni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin: ular radikallar bilan reaksiya tezligi konstantasining yuqori qiymati bilan tavsiflanadi va shu sababli kuchli antioksidantlar deb atash mumkin. Yashirin davrda ularning to'liq oksidlanishi sodir bo'ladi. TAR usuli (umumiy antioksidant reaktivligi) xemiluminesansning so'nish darajasini o'lchaydi. q platoda yoki xemiluminesans egri chizig'ining maksimal darajasida: formula , bu erda I - antioksidantsiz xemiluminesansning intensivligi va I 1 - antioksidant mavjudligida CL ning intensivligi. Ushbu usul, agar tizimda radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish tezligi past bo'lgan, asosan, zaif antioksidantlar bo'lsa, qo'llaniladi - luminol konstantasiga nisbatan ancha past.

Antioksidantlarning ta'siri nafaqat ko'rsatkichlar bilan tavsiflanadi τ va q. [ , ] dan ko'rinib turibdiki, gemin-H2O2-luminol yoki tokoferol tizimidagi siydik kislotasi, sitoxromda rutin va quercetin kabi antioksidantlarning ta'siri. Bilan-kardiolipin-H 2 O 2 - luminol, CL ko'tarilishining maksimal tezligining o'zgarishi bilan tavsiflanadi ( vmax). Kinetikani matematik modellashtirish natijalari shuni ko'rsatadiki, ushbu antioksidantlarning radikallar bilan o'zaro ta'sirining tezligi konstantalarining qiymatlari luminol konstantasi qiymatiga yaqin, shuning uchun bunday antioksidantlarni o'rta kuchli antioksidantlar deb atash mumkin.

Agar o'rganilayotgan materialda, xususan, o'simlik xom ashyosida faqat bitta turdagi antioksidantlar bo'lsa, unda ularning tarkibi yuqorida sanab o'tilgan uchta ko'rsatkichdan biri bilan tavsiflanishi mumkin ( τ , q yoki vmax). Ammo o'simlik xom ashyosi turli xil kuchli antioksidantlarning aralashmasini o'z ichiga oladi. Ushbu muammoni hal qilish uchun ba'zi mualliflar [ , , , ] kimyoluminesans yorug'lik yig'indisining o'zgarishidan foydalanganlar. ma'lum vaqt∆S formula bilan hisoblangan , bu erda ∆ S0 va ∆ S S- ma'lum vaqt uchun CL yorug'lik summalari t mos ravishda nazorat va sinov namunalarida. Vaqt tizimdagi barcha antioksidantlarning oksidlanishi, ya'ni sinov namunasining CL egri chizig'i nazorat namunasining CL egri chizig'i darajasiga yetishi uchun etarli bo'lishi kerak. Ikkinchisi tadqiqotchilar nafaqat luminesansning yorug'lik yig'indisini qayd etishlari, balki CL kinetika egri chizig'ini etarlicha uzoq vaqt davomida yozib olishlari kerakligini taklif qiladi, bu har doim ham amalga oshirilmaydi.

Barcha o'lchangan ko'rsatkichlar qurilma va o'lchov sharoitlariga bog'liq bo'lganligi sababli, o'rganilayotgan tizimdagi moddaning antioksidant ta'siri odatda standart sifatida qabul qilingan antioksidantning ta'siri bilan taqqoslanadi, masalan, Trolox [ , ].

Horseradish peroksidaza-vodorod periks tizimi ko'plab mualliflar tomonidan o'simlik materiallarining umumiy antioksidant qobiliyatini tahlil qilish uchun ishlatilgan. Ishlarda [ , ] namunalardagi antioksidantlar miqdorini baholash uchun CL ning yashirin davri (TRAP usuli) ishlatilgan va ishlarda [ , , ] CL rivojlanish egri chizig'i ostidagi maydon ishlatilgan. Biroq, sanab o'tilgan ishlar TAUni baholash uchun u yoki bu parametrni tanlashning aniq asosini ta'minlamaydi.

Tadqiqotning maqsadi har xil turdagi antioksidantlarning nisbati TAU ga qanday ta'sir qilishini aniqlash va o'simlik materiallarida TAUni aniqroq aniqlash uchun kimyoluminesans usulini o'zgartirish edi. Buning uchun o‘z oldimizga bir qancha vazifalarni qo‘yganmiz. Birinchidan, qaysi turdagi antioksidantlar o'rganilayotgan ob'ektlarning TAE ga asosiy hissa qo'shishini tushunish uchun o'rganilayotgan ob'ektlarning CL kinetikasini uch turdagi (kuchli, o'rta va zaif) standart antioksidantlar kinetikasi bilan solishtirish. Ikkinchidan, TAU ga eng katta hissa qo'shadigan antioksidant ta'siriga nisbatan ushbu ob'ektlar ta'sirida CL yorug'lik yig'indisining pasayishini o'lchash orqali o'rganilayotgan ob'ektlarning TAU ni hisoblash.

MATERIALLAR VA USLUBLAR

Tadqiqot ob'ektlari "Krasnogorskleksredstva" OAJ (Rossiya) tomonidan ishlab chiqarilgan do'lana, tog 'kuli va yovvoyi atirgul mevalarining sanoat namunalari, shuningdek mualliflar tomonidan tabiiy o'sish sharoitida Moskva viloyatida to'plangan va haroratda quritilgan malina mevalari edi. 60-80 ° S ular sharbat chiqarishni to'xtatmaguncha va bosim deformatsiyalari.

Kimiluminesans usulida antioksidant quvvatini tahlil qilish uchun reagentlar quyidagilar edi: KH 2 PO 4, 20 mM bufer eritmasi(pH 7,4); otquloq ildizlaridan peroksidaza (faollik 112 U/mg, M = 44 173,9), 1 mM suvli eritma; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindion, 3-aminoftalik kislota gidrazid, M=177,11), 1 mM suvli eritma; vodorod periks (H 2 O 2, M = 34.01), 1 mM suvli eritma; antioksidantlarning eritmalari (askorbin kislotasi, quercetin, tokoferol). Barcha reagentlar Sigma Aldrich (AQSh) tomonidan ishlab chiqarilgan.

Dolana, tog 'kuli va yovvoyi atirgul mevalaridan qaynatmalar va malina mevalaridan infuzion SSSR Davlat farmakopeyasining "Infuzionlar va qaynatmalar" umumiy farmakopeya maqolasida keltirilgan metodologiyaga muvofiq tayyorlangan.

Umumiy antioksidant quvvati PowerGraph 3.3 dasturidan foydalangan holda Lum-100 xemiluminometrida (DISoft, Rossiya) xemiluminesansni qayd etish orqali aniqlandi. O'simlik materiallarida TAU ni aniqlash uchun 1 mM konsentratsiyada 40 mkl luminol, 0,1 mkM konsentratsiyada 40 mkl horseradish peroksidaza, 10 dan 50 µl gacha qaynatma yoki infuzion (kontsentratsiyaga qarab) va fosfat buferi. umumiy namuna hajmini 1 ml ga etkazish uchun zarur bo'lgan miqdorda. Kyuvet qurilmaga o'rnatildi va fon signalini kuzatgan holda CL qayd etildi. Fon signali ro'yxatga olingandan 48 soniya o'tgach, kyuvetaga 1 mM konsentratsiyadagi 100 µl H2O2 qo'shildi va CL ro'yxatga olish 10 daqiqa davomida davom ettirildi. O'simlik ob'ektlarining har birining har xil konsentratsiyasi bilan to'rtta namuna tayyorlandi. CL, shuningdek, antioksidantlarning har biri uchun besh xil konsentratsiyada askorbin kislotasi, quercetin va tokoferol eritmalari uchun qayd etilgan. Keyinchalik, qaynatmalar va infuziyalar namunalarining TAU kversetin uchun qayta hisoblab chiqildi.

Luminol, horseradish peroksidaza va vodorod periks kontsentratsiyasi o'rtacha vaqt ichida (10 daqiqadan ko'p bo'lmagan) dorivor o'simlik materiallaridan suvli ekstraktlarning antioksidant qobiliyatini aniqlash uchun tanlangan. Bu vaqt ichida antioksidantlar askorbat va flavonoid quercetin (o'simlik materiallarining asosiy antioksidantlari) uchun xemiluminesans egri chizig'i platoga yetdi, bu tizimdagi antioksidantlarning to'liq yo'q qilinishini ko'rsatdi. O'rganilayotgan namunalarning suyultirilishi va standart antioksidantlar eritmalarining konsentratsiyasi (rasmlar sarlavhalarida ko'rsatilgan) barcha CL kinetik egri chiziqlari bir xil asbob sezgirligida o'lchanadigan tarzda tanlangan.

Antioksidant quvvati maydon o'zgarishidan hisoblab chiqilgan (∆ S) antioksidantni o'z ichiga olgan moddaning qo'shilishi bilan xemiluminesansning kinetik egri ostida (yorug'lik yig'indisi). Buning uchun biz hisobladik S0 tizimi uchun antioksidantsiz va undan hududni olib tashlaydi S S antioksidant qo'shilgan tizimni tavsiflovchi. ∆ qiymati S xemiluminometrning sezgirligiga va o'lchash shartlariga bog'liq. Nisbat ∆ S/C V(qaerda C- o'rganilayotgan biologik materialning kyuvetada konsentratsiyasi, g/l, va V- kyuvetka hajmi, l) o'rganilayotgan materialning, ya'ni o'simlik materiallarining 1 g antioksidant qobiliyatini ifodalaydi.

Antioksidant qobiliyati ∆ S A reaksiya aralashmasining bir xil hajmiga joylashtirilgan quercetin kabi standart antioksidantning eritmasi. Nisbat ∆ S A / C A V(qaerda C A- kyuvetada antioksidantning vazn konsentratsiyasi, g/l) 1 g antioksidantning antioksidant qobiliyatini ifodalaydi.

Standart antioksidantlarning har biri uchun hisob-kitoblar chiziqli munosabatlar doirasida amalga oshirilganligiga va olingan natijalar takrorlanishiga ishonch hosil qilish uchun bir nechta konsentratsiyali eritmalardan signal qayd etilgan. Haqiqatan ham, chiziqli bog'liqlik olindi (∆ S A = k A C A) hisoblangan konsentratsiyadan signal stoxiometrik koeffitsient k A. Fisher mezoniga ko'ra, standart antioksidantlar uchun olingan qiymatlar k A 0,975 ehtimollik bilan statistik ahamiyatga ega. Keyinchalik, to'rtta konsentratsiyadan olingan signal to'rtta o'simlik namunasining har biri uchun qayd etildi va biz olgan barcha namunalar uchun chiziqli bog'liqlik konsentratsiya signali (∆ S = k C), bu stoxiometrik koeffitsientni hisoblash uchun ishlatilgan k. 0,975 (Fisher testi) ehtimoli bilan o'simlik namunalari uchun olingan k qiymatlari statistik ahamiyatga ega. Standart antioksidantning og'irligi (mg%) bo'yicha o'simlik materialining umumiy antioksidant qobiliyati formuladan foydalanib topildi.

Qiymatlar p da o'rtacha arifmetik ± standart og'ish (M ± d) sifatida taqdim etildi.

TADQIQOT NATIJALARI

Natriy askorbat ishtirokida xemiluminesans kinetikasini o'rganish (1-rasm. Natriy askorbatning kimilyuminesans kinetikasiga ta'siri" data-not="Tizim komponentlarining kontsentratsiyasi: luminol - 40 mkM, xren peroksidazasi - 4 nM - vodorod peroksid - 10.0. Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,05 mkM; 3 - 0,10 mkM; 4 - 0,15 mkM; 5 - 0,2 mkM; 6 - 0,25 mkM natriy askorbat.Antioksidant CL ning deyarli to'liq bosilishi bilan yashirin davr bilan tavsiflanadi. sistemadagi antioksidant miqdoriga mutanosibdir.Shu bilan birga, CL egri chiziqlarining qiyaligi ham, platodagi CL intensivligi ham o‘zgarmaydi.Bu askorbin kislota kuchli antioksidant bo‘lib, barcha radikallarni tutib turadiganligi bilan bog‘liq. tizimda, shu jumladan luminol radikallari hosil bo'ladi va CL barcha askorbat oksidlanmaguncha rivojlanmaydi.

Boshqa tadqiqotchilar ham natijalarni ko'rsatdilar kimyoviy tahlil va xemiluminesans usuli bilan aniqlangan TAU qiymati ko'pincha mos kelmaydi. Ishda peroksidaza-luminol-vodorod peroksid tizimida aniqlangan umumiy antioksidant quvvati triterpen birikmalarining tarkibi bilan bog'liq. Shu bilan birga, boshqa o'simlik tadqiqot ob'ekti bo'lgan xuddi shu mualliflarning ishlarida TAU va har qanday moddalar guruhi, shu jumladan flavonoidlar tarkibi o'rtasida hech qanday bog'liqlik kuzatilmagan.

Ushbu nomuvofiqliklar kamida uchta omil bilan bog'liq. Birinchidan, antioksidantlarning faolligi muhim, ya'ni o'simlik namunasini tashkil etuvchi turli antioksidantlar uchun ularning radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish tezligi. Izmailovning so'zlariga ko'ra, mexidol, tokoferol va quercetin uchun mos keladigan reaktsiyalarning tezlik konstantalari 0,04: 2: 60 bilan bog'liq. Ikkinchidan, har bir antioksidant molekula, kimyoviy reaksiya, har xil miqdordagi radikallarni tuta oladi. Ishga ko'ra, quercetin, siydik va askorbin kislotalar reaksiyaga kirishgan antioksidant molekula uchun mos ravishda 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 va 0,5 ± 0,2 radikallarni ushlab turishgan (gemin-H 2 O 2 tizimi ishlatilgan - luminol). Uchinchidan, tadqiqot natijalariga ishda bo'lgani kabi o'simlik namunalarining o'zida ham peroksidaza faolligi, shuningdek namunalarda kaltsiy borligi ta'sir qilishi mumkin, bu ishda ko'rsatilganidek, ko'paytirishga qodir. muayyan sharoitlarda horseradish peroksidaza faolligi. Bu odatda platoda nazorat egri chizig'iga qaraganda yuqori CL intensivligini keltirib chiqaradi, ammo biz buni kuzatmadik.

Birinchi omil yorug'lik yig'indisining o'zgarishi kabi parametrdan foydalanishni keskin cheklaydi, chunki xemiluminesansni o'lchash vaqti sinov namunasidagi barcha antioksidantlarni iste'mol qilish vaqtidan uzoqroq bo'lishi kerak. Ushbu momentning yondashuvini faqat kimilyuminesans kinetikasini o'lchash orqali baholash mumkin. Bundan tashqari, zaif antioksidantlarning OAE ga qo'shgan hissasi keskin kam baholanadi, chunki ularning to'liq oksidlanish vaqti qabul qilinadigan o'lchash vaqtidan (10-20 minut) bir necha baravar ko'p.

Antioksidantning stoxiometrik koeffitsienti bundan ham katta ahamiyatga ega. Radikallar soni n, tomonidan kesilgan, ga teng, qaerda ρ - stexiometrik koeffitsient va ∆ m- o'lchash vaqtida antioksidant kontsentratsiyasining o'zgarishi, bizning holatlarimizda - sinov namunasidagi sinov moddasining dastlabki konsentratsiyasi.

Antioksidant yo'qligida va uning mavjudligida porlashning yorug'lik yig'indisi farqi proportsionaldir. n. Tutib olingan radikallarning umumiy soni , bu yerda r i ma'lum bir antioksidantning stexiometrik koeffitsienti va m i- o'lchash vaqtida uning konsentratsiyasi. To'xtatilgan radikallarning umumiy soni antioksidantlarning umumiy miqdoriga teng emas, chunki koeffitsientlar r i nafaqat birlikka teng, balki turli antioksidantlar uchun ham sezilarli darajada farqlanadi.

Qiymat n antioksidantni o'z ichiga olgan namuna va antioksidantlar bo'lmagan nazorat namunasi o'rtasidagi ma'lum vaqt davomida o'lchangan yorug'lik summalarining farqiga proportsionaldir: S = k n, qayerda k- bir xil o'lchov sharoitida koeffitsient konstantasi.

Maqolada ko'rib chiqilgan usul umumiy antioksidant quvvatni aniqlashga imkon beradi, kimyoviy tahlil esa mahsulotdagi antioksidantlarning umumiy miqdorini aniqlashga imkon beradi. Shu sababli, kimyoluminesans usuli kimyoviy tahlillarga qaraganda ko'proq ma'lumotli ko'rinadi.

Horseradish peroksidaza, vodorod peroksid va luminoldan tashkil topgan tizimda xemiluminesans kinetikasini qayd qilish orqali o'simlik xom ashyosining umumiy antioksidant qobiliyatini baholash uchun biz tanlagan shartlar (komponent konsentratsiyasi mos ravishda 4 nM, 100 mkM va 40 mM; 20 mM). fosfat buferi, pH 7,4), 10 daqiqada kuchli antioksidantlar (askorbin kislotasi) va o'rtacha antioksidantlarning (quercetin) oksidlanishini ta'minladi. Ushbu o'lchov davomiyligi qulay va o'lchovlarning kerakli sifatini ta'minlaydi.

Xemiluminesans kinetikasining tahlili shuni ko'rsatdiki, o'rganilayotgan ob'ektlarda (rovon, yovvoyi gul, do'lana mevalari va malina mevalari infuziyasi) asosiy antioksidantlar o'rta kuchli antioksidantlar, shu jumladan flavonoidlar va zaif kuchli antioksidantlar (tokoferol va boshqalar). ). Kimiluminesans yorug'lik yig'indisining pasayishiga asoslanib, o'rganilayotgan ob'ektlar uchun umumiy antioksidant quvvati hisoblab chiqildi. Olingan TAU qiymatlarini kimyoviy tahlil natijalari bilan taqqoslash shuni ko'rsatdiki, turli nisbatlarda bir xil miqdordagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan mahsulotlar tanani samarali himoya qilish qobiliyatida farq qilishi mumkin. zararli ta'sirlar erkin radikallar. Ta'riflangan texnika turli xil antioksidantlar aralashmasini o'z ichiga olgan o'simlik ob'ektlarini o'rganish uchun istiqbolli hisoblanadi. Shu bilan birga, tadqiqotning soddaligi va arzonligi bilan ajralib turadi. Kimiluminesans kinetikasini o'lchashni reaksiyalarni matematik modellashtirish bilan birlashtirish nafaqat TAU ​​ni aniqlash jarayonini avtomatlashtiradi, balki antioksidantlarning alohida guruhlarini indikatorga qo'shgan hissasini ham aniqlaydi.

diplom ishi

1.4 Antioksidantlar uchun tadqiqot usullari

antioksidant faollik tasniflanadi: namoyon bo'lgan AOA ni ro'yxatdan o'tkazish usullari bo'yicha (volümetrik, fotometrik, kimiluminesans, lyuminestsent, elektrokimyoviy); oksidlanish manbasining turi bo'yicha; oksidlangan birikmaning turi bo'yicha; oksidlangan birikmani o'lchash usuli bo'yicha.

Biroq, antioksidant faollikni aniqlashning eng mashhur usullari:

1 TEAC (trolox ekvivalenti antioksidant quvvati): usul quyidagi reaksiyaga asoslangan:

Metmioglobin + H 2 O 2 > Ferrilglobin + ABTS > ABTS * + AO.

Trolox ekvivalentlik usuli (TEAC) antioksidantlarning 2,2-azinobis radikal kationlarini (ABTS) kamaytirish qobiliyatiga asoslanadi va shu bilan spektrning uzun to'lqin uzunlikdagi qismida (600 nm) so'rilishini inhibe qiladi. Usulning muhim kamchiliklari radikalni olishning ikki bosqichli reaktsiyasidir. Bu tahlil qilish vaqtini uzaytiradi va tahlil qilish uchun standartlashtirilgan reagentlar to'plamidan foydalanilganiga qaramay, natijalarning tarqalishini oshirishi mumkin.

2 FRAP (temir kamaytiruvchi antioksidant quvvat): usul quyidagi reaktsiyaga asoslangan:

Fe (III) - Tripiridiltriazin + AO> Fe (II) - Tripiridiltriazin.

Temirni kamaytiruvchi/antioksidant qobiliyati (FRAP). Bu yerda Fe(III)-tripiridiltriazinning Fe(II)-tripiridiltriazinga qaytarilish reaksiyasidan foydalaniladi. Biroq, bu usul ba'zi antioksidantlarni, masalan, glutationni aniqlay olmaydi. Bu usul past molekulyar og'irlikdagi antioksidantlarni bevosita aniqlash imkonini beradi. Past pHda Fe (III) tripiridiltriazin kompleksining Fe (II) kompleksiga qisqarishi kuchli ko'k rangning paydo bo'lishi bilan birga keladi. O'lchovlar antioksidantlarning reaktsiya aralashmasida hosil bo'lgan reaksiya zarralarining oksidlovchi ta'sirini bostirish qobiliyatiga asoslanadi. Bu usul sodda, tez va bajarishda arzon.

3 ORAC (kislorod radikalini yutish qobiliyati): usul quyidagi reaktsiyaga asoslangan:

Fe (II) + H 2 O 2 > Fe (III) + OH * + AO> OH * + Luminol.

Kislorod radikallarini yutish qobiliyatini aniqlash (ORAC). Ushbu usulda substratning (fikoeritrin yoki flüoresein) floresansi qayd etiladi, bu uning ROS bilan o'zaro ta'siri natijasida yuzaga keladi. Agar sinov namunasida antioksidantlar mavjud bo'lsa, u holda nazorat namunasi bilan solishtirganda flüoresansning pasayishi kuzatiladi. Ushbu usul dastlab 1992 yilda Milliy qarish institutida doktor Guohua Cao tomonidan ishlab chiqilgan. 1996 yilda doktor Ronald Prayer bilan USDA qarish bo'yicha tadqiqot markazida qo'shma guruhga qo'shildi, bu erda yarim avtomatlashtirilgan usul mavjud edi. rivojlangan.

4 TRAP (jami radikal tuzoqqa qarshi antioksidant parametr): usul quyidagi reaksiyaga asoslangan:

AAPH+AO>AAPH* + PL (PE).

Bu usul antioksidantlarning peroksil radikali 2,2-azobis (2-amidinopropan) dihidroxlorid (AAPH) bilan o'zaro ta'sir qilish qobiliyatidan foydalanadi. TRAP modifikatsiyalari analitik signalni ro'yxatga olish usullaridan iborat. Ko'pincha, tahlilning yakuniy bosqichida AAPH peroksi radikali lyuminestsent (luminol), floresan (diklorofloressen diasetat, DCFH-DA) yoki boshqa optik faol substrat bilan o'zaro ta'sir qiladi.

Suvda eruvchan E vitamini hosilasi Trolox (6-gidroksi-2,5,7,8-tetrametilkroman-2-karboksi kislotasi) TEAC, ORAC va TRAP usullari uchun standart sifatida ishlatiladi.

So'nggi paytlarda antioksidant faollikni baholash uchun foydalanishga qiziqish ortdi elektrokimyoviy usullar. Ushbu usullar juda sezgir va tezkor tahlildir.

Ayrimlarning antioksidant faolligini baholash oziq-ovqat mahsulotlari enol (-OH) va sulfgidril (-SH) guruhlari tufayli oksidlanish-qaytarilish reaktsiyalarida ishtirok etish uchun antioksidant moddalarning xususiyatlaridan foydalanishga asoslangan potensiometriya usuli bilan amalga oshiriladi.

Eritmalarning antioksidant xususiyatlarini aniqlash quyidagilarga asoslanadi kimyoviy o'zaro ta'sir mediator tizimiga ega bo'lgan antioksidantlar, bu uning redoks potentsialining o'zgarishiga olib keladi. Elektrokimyoviy hujayra K-Na-fosfat bufer eritmasi, vositachi tizimi Fe (III) / Fe (II) va oksidlanish-qaytarilish potentsialini o'lchashdan oldin murakkab elektrodni o'z ichiga olgan idishdir. Antioksidant faolligi g-ekv/L da baholanadi.

Antioksidant faollikni aniqlashning amperometrik usuli o'lchovga asoslangan elektr toki ma'lum bir potentsial ostida bo'lgan ishchi elektrod yuzasida sinov moddasining oksidlanishidan kelib chiqadi. Amperometrik usulning sezgirligi ham ishchi elektrodning tabiati, ham unga qo'llaniladigan potentsial bilan belgilanadi. Polifenollar, flavonoidlarning amperometrik detektorini nano-pikogrammalar darajasida aniqlash chegarasi, bunday past konsentratsiyalarda, turli xil antioksidantlarning ularning birgalikda mavjudligida o'zaro ta'sir qilish ehtimoli kamroq, xususan, sinergizm fenomenining namoyon bo'lishi. . Usulning kamchiliklari uning o'ziga xosligini o'z ichiga oladi: bunday sharoitlarda kislorodning elektroreduksiya potentsiallari hududida oksidlangan yoki kamaygan antioksidantlarni tahlil qilib bo'lmaydi. Usulning afzalliklari uning tezligi, prostata va sezgirlikni o'z ichiga oladi.

Elektrogeneratsiyalangan oksidlovchilardan foydalangan holda galvanostatik kulometriya usuli - bu usul yog'da eriydigan antioksidantlarni tahlil qilish uchun qo'llaniladi.

Askorbin kislotani aniqlashning turli usullari ishlab chiqilgan:

oddiy eritmani botirish usuli bilan nikel (II) geksasiyanoferrat plyonkasi bilan o'zgartirilgan alyuminiy elektrod yordamida amperometrik usul;

Vavel reaktivi va mis (II) indikator kukuni sifatida modifikatsiyalangan kremniy kislotasi kserogel yordamida askorbin kislotani qattiq fazali spektrofotometrik va vizual sinovdan aniqlash usuli;

askorbin kislotani xemilyuminesans bilan aniqlash sulfat kislota muhitida rodamin B ning seriy (IV) bilan xemiluminesans reaktsiyasiga ko'ra oqimli in'ektsiya usuli bilan amalga oshirilishi mumkin.

suvli va suvli-organik muhitda anodik voltammetriya yordamida 10 -8 -10 -3 g/sm 3 oralig'ida askorbin kislotani aniqlash.

Eng keng tarqalgani FRAP usulidir, chunki u ekspress, juda sezgir. So'nggi bir necha o'n yilliklarda FRAP usuli bo'yicha antioksidant faollikni aniqlashning ko'plab turlari ishlab chiqildi (1-jadval).

1-jadval FRAP usulini ishlab chiqish va uni turli ob'ektlarning antioksidant faolligini aniqlash uchun qo'llash

Tahlil ob'ektlari

Eslatmalar

qon plazmasi

t=4min. Reaksiya stoxiometriyasi va qo'shilish qobiliyati o'rganildi.

Choy, vino

Polifenollar tufayli AOA ni aniqlash

Turli xil choy turlarining AOA qiymatlari taqqoslanadi

Pulido, Bravo, Saura-Kaliksto

Model yechimlari

t=30min. Suvsiz erituvchining ta'siri aniqlandi

O'simliklar

qon, to'qima

PIA usuli. Chet moddalarning ta'siri tekshirildi.

Firuzi, Lakanna, Petruchchi e.a.

Model yechimlari

Turli AO larning tuzilishi va oksidlanish-qaytarilish potentsialiga qarab aniqlashning sezgirligi o‘rganildi.

Katalinich, Milos,

Har xil vinolar

Temerdashev, Tsyupko va boshqalar.

Model aralashmalari

Loginova, Konovalova

Dorilar. Tayyorgarlik

sinov usuli

Temerdashev, Tsyupko va boshqalar.

Quruq qizil vinolar

AOA ning vino sifatining boshqa ko'rsatkichlari bilan bog'liqligi

1-jadval davom etdi

Model aralashmalari

Turli AO ni aniqlashning sezgirligi

Vershinin, Vlasova, Tsyupko

Model aralashmalari

Oksidlovchi moddaning etishmasligi bilan signalning qo'shilmasligi aniqlandi

Anisimovich, Deineka va boshqalar.

Model yechimlari

AOA baholash uchun kinetik parametrlar taklif etiladi.

Eslatmalar: an'anaviy tarzda etiketlangan: PIA-oqim-in'ektsiya tahlili, TPTZ-tripiridiltriazin, DIP-2,2, -dipiridil, PHEN-o-fenantrolin, DPA-piridindikarboksilik kislota, FZ-ferrozin, AA-askorbin kislotasi, CT-katexol, t - ta'sir qilish vaqti, min.

Suvli eritmalardagi oqsillar va polielektrolitlarning o'zaro ta'siri

Protein-polielektrolit komplekslarini tavsiflash uchun turli xil tahlil usullari qo'llaniladi. Instrumental usullar strukturaviy va optik xususiyatlar haqida ma'lumot beradi, shuningdek, PEC ulanishining dinamikasi va tabiatini aniqlaydi ...

d-metall birikmalarining bipolyar membranada suv molekulasining dissotsilanish tezligiga ta'siri

Yangi BPMlarni sintez qilish jarayonida, sintez qilingan membranalarning elektrokimyoviy xususiyatlarini yaxshilashni ta'minlaydigan sintez sharoitlarini keyingi tanlash uchun olingan namunalarning xususiyatlarini o'rganishga katta e'tibor qaratish lozim...

Dizayner preparatlari va sintetik kannabinoidlar

O'simlik aralashmalarida sintetik kannabinoidlarni aniqlash turli fizik-kimyoviy usullar bilan amalga oshirilishi mumkin, masalan, gaz xromatografiyasi - massa spektrometriyasi, gaz, yupqa qatlam va yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi ...

Dorivor o'simlik materiallarida flavonoidlarni aniqlash usulini ishlab chiqish

Xinolinonlarning sintezi va farmakologik xossalari-2

Tadqiqot ob'ekti: Xinolinon-2. Tadqiqot usuli: “Marvin JS” kompyuter dasturi yordamida moddaning tuzilishi yaratildi. Keyinchalik, u qo'shimcha tekshirish uchun "http://www.way2drug.com/PASSOnline/predict.php" saytiga yuborildi...

Epoksi polimerning bug'lanish mahsulotlarini o'rganishning termospektral usuli

Qisqichbaqasimonlar qobig'idan yuqori darajada tozalangan xitozan olish texnologiyasi

Xitozanning molekulyar og'irligini aniqlash Xitosanning molekulyar og'irligi standart protsedura bo'yicha viskometrik tarzda aniqlandi. 0,05 va 0,5 g/dl konsentratsiyali eritmalar polimer kukunining tortilgan qismini asetat tamponida (0...) eritib tayyorlandi.

Tabiat bog'i hududining fizik-geografik xususiyatlari

Kalit so'zlar

erkin radikal/antioksidant/ antioksidant faollik / umumiy antioksidant qobiliyati / kimyoluminesans/ luminol / erkin radikal / antioksidant / antioksidant faollik / umumiy antioksidant quvvat / xemiluminesans / luminol

izoh kimyo fanlari bo'yicha ilmiy maqola, ilmiy maqola muallifi - Georgiy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Dorivor o'simlik materiallari inson tanasi uchun antioksidantlar manbalaridan biridir. O'simlik ob'ektlarida antioksidantlar miqdorini aniqlash usullari orasida xemilyuminessent tahlil usuli keng tarqalgan. Hozirgi ishda u taxmin qilish uchun ishlatilgan umumiy antioksidant qobiliyati(OAU) rovon, yovvoyi gul va do'lana mevalaridan tayyorlangan qaynatmalar va malina mevalari infuzioni. Tajribada kinetika qayd etildi kimyoluminesans horseradish peroksidaz, vodorod peroksid va luminoldan tashkil topgan tizimda. Namunadagi tizim komponentlarining kontsentratsiyasi va hajmlari kuchli antioksidantlar (askorbin kislota) va o'rtacha kuchli antioksidantlar (kercetin) o'lchash vaqtida (10 minut) to'liq oksidlanishi uchun tanlangan. Yorug'lik yig'indisining o'zgarishiga asoslangan TAUni hisoblash usuli taklif qilinadi va asoslanadi. kimyoluminesans o'simlik namunalari mavjudligida. Kinetik tahlil kimyoluminesans o'rganilayotgan ob'ektlarda o'rtacha kuchli antioksidantlar, jumladan flavonoidlar va kuchsiz antioksidantlar (tokoferol va boshqalar) ustunlik qilishini ko'rsatdi. O'rganilayotgan ob'ektlar uchun hisoblangan TAU qiymatlarini taqqoslash va ularning kimyoviy tahlili ma'lumotlari shuni ko'rsatdiki, bir xil miqdordagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan mahsulotlar turlari bo'yicha har xil nisbatlarda tanani erkin radikallarning zararli ta'siridan himoya qilish qobiliyatida farq qilishi mumkin. Ta'riflangan texnika har xil turdagi antioksidantlar aralashmasini o'z ichiga olgan o'simlik ob'ektlarini o'rganish uchun istiqbolli hisoblanadi.

Aloqador mavzular kimyo fanlari bo'yicha ilmiy maqolalar, ilmiy maqola muallifi - Georgiy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

  • 2016 yil / Georgiy Vladimirov, Sergunova E.V., Izmaylov D.Yu., Vladimirov Yu.A.

  • 2,2"-azo-bis (2-amidinopropan) yordamida faollashtirilgan xemiluminesans orqali antioksidantlarni aniqlash

    2012 yil / Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.

  • Sitokrom c tomonidan katalizlangan peroksidaza reaktsiyalarida dihidrokersetin va rutinning antioksidant ta'siri

    2008 yil / Demin E.M., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.

  • Fenton reaktsiyasi natijasida kelib chiqqan xemiluminesans orqali biologik substratlarning oksidlovchi va antioksidant qobiliyatini baholash.

    2016 yil / Piskarev Igor Mixaylovich, I.P. Ivanova

  • Mikroperoksidaza-luminol tizimi yordamida qon zardobidagi lipoproteinlar tarkibidagi lipohidroperoksidlar miqdorini aniqlash.

    2011 yil / Teselkin Yuriy Olegovich, Babenkova Irina Vladimirovna

  • Antioksidantlarni o'rganish usullari

    2004 yil / Xasanov V. V., Ryjova G. L., Maltseva E. V.

  • Tuva etnomedicisida ishlatiladigan o'simliklarning antioksidant faolligi

    2012 yil / Chexani N.R., Teselkin Yu.O., Pavlova L.A., Kozin S.V., Lyubitskiy O.B.

  • Turli biologik test tizimlarida Fosprenilning antioksidant xususiyatlarini o'rganish

    2017 yil / A. V. Sanin, A. N. Narovlyanskiy, A. V. Pronin, T. N. Kozhevnikova, V. Yu. Sanina, A. D. Agafonova

  • Poliklorli bifenillarning turli dozalarining o'z-o'zidan va immunoglobulin bilan bog'liq luminolga bog'liq bo'lgan butun qonning xemiluminesans holatiga ta'siri.

    2016 yil / Gabdulxakova I.R., Qayumova A.F., Samohodova O.V.

  • Spektrofotometriya va xemiluminesans usullaridan foydalangan holda muhim arterial gipertenziyasi bo'lgan bolalarda antioksidantlarni himoya qilishning lipid peroksidlanish tizimini baholash.

    2014 yil / Natyaganova Larisa Viktorovna, Gavrilova Oksana Aleksandrovna, Kolesnikova Larisa Romanovna

Dorivor o'simlik materialida umumiy antioksidant quvvatni kimyoluminesans yordamida aniqlash

Dorivor o'simlik materiali inson tanasi uchun antioksidantlar manbalaridan biridir. Xemiluminesans tahlili o'simlik materiallaridagi antioksidantlar tarkibini aniqlashning keng tarqalgan usullaridan biridir. Bizning ishimizda tog 'kuli, atirgul va do'lana meva qaynatmalari, shuningdek, malinali meva infuzionining umumiy antioksidant qobiliyatini (TAC) aniqlash uchun xemiluminesans tahlilidan foydalanildi. Tajribalar xren peroksidaza, vodorod peroksid va luminoldan tashkil topgan tizimning xemiluminesans kinetikasini aniqladi. Tizim tarkibiy qismlarining konsentratsiyasi va hajmlari shunday tanlanganki, kuchli antioksidantlar (askorbin kislotasi) va o'rtacha quvvatdagi antioksidantlar (kversetin) o'lchash vaqtida (10 daqiqa) to'liq oksidlanadi. O'simlik namunalari mavjud bo'lganda xemiluminesans yorug'lik yig'indisining o'zgarishiga asoslangan TACni hisoblash usuli taklif qilindi va asoslandi. Xemiluminesans kinetikasining tahlili shuni ko'rsatdiki, o'rganilayotgan ob'ektlarda o'rtacha kuchli antioksidantlar, jumladan flavonoidlar va zaif antioksidantlar (tokoferol va boshqalar) ustunlik qiladi. O'rganilayotgan ob'ektlar uchun hisoblangan TAC qiymatlarini va ularning kimyoviy tahlil ma'lumotlarini taqqoslash shuni ko'rsatdiki, bir xil miqdordagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan mahsulotlar turlari bo'yicha turli xil antioksidantlar nisbati bilan tanani erkin radikallarning zararli ta'siridan himoya qilish qobiliyatida farq qilishi mumkin. . Ta'riflangan texnika har xil turdagi antioksidantlar aralashmasini o'z ichiga olgan o'simlik ob'ektlarini o'rganish uchun istiqbolli hisoblanadi.

Ilmiy ish matni "Dorivor o'simlik materiallarining umumiy antioksidant qobiliyatini aniqlashning xemiluminesans usuli" mavzusida

dorivor o'simlik materiallarida umumiy antioksidant qobiliyatini aniqlash uchun kimyoluminesans usuli

G. K. Vladimirov1^, E. V. Sergunova2, D. Yu. Izmailov1, Yu. A. Vladimirov1

1 Tibbiy biofizika kafedrasi, Moskva, fundamental tibbiyot fakulteti Davlat universiteti M.V.Lomonosov nomidagi, Moskva

2 Farmakognoziya kafedrasi, Farmatsevtika fakulteti,

I. M. Sechenov nomidagi Birinchi Moskva davlat tibbiyot universiteti, Moskva

Dorivor o'simlik materiallari inson tanasi uchun antioksidantlar manbalaridan biridir. O'simlik ob'ektlarida antioksidantlar miqdorini aniqlash usullari orasida xemiluminesans tahlil usuli keng tarqalgan. Ushbu ishda rovon, yovvoyi atirgul, do'lana mevalari va malina mevasi infuzioni qaynatmalarining umumiy antioksidant qobiliyatini (TOA) baholash uchun foydalanilgan. Tajribada xemiluminesans kinetikasi xren peroksidaza, vodorod peroksid va luminoldan tashkil topgan tizimda qayd etilgan. Namunadagi tizim komponentlarining kontsentratsiyasi va hajmlari kuchli antioksidantlar (askorbin kislota) va o'rtacha kuchli antioksidantlar (kercetin) o'lchash vaqtida (10 minut) to'liq oksidlanishi uchun tanlangan. O'simlik namunalari mavjud bo'lganda kimilyuminesans yorug'lik yig'indisining o'zgarishiga asoslangan RAE ni hisoblash usuli taklif qilingan va asoslangan. Xemiluminesans kinetikasining tahlili shuni ko'rsatdiki, o'rganilayotgan ob'ektlarda o'rtacha kuchli antioksidantlar, jumladan flavonoidlar va kuchsiz antioksidantlar (tokoferol va boshqalar) ustunlik qiladi. O'rganilayotgan ob'ektlar uchun hisoblangan TAU qiymatlarini taqqoslash va ularning kimyoviy tahlili ma'lumotlari shuni ko'rsatdiki, bir xil miqdordagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan mahsulotlar turlari bo'yicha har xil nisbatlarda tanani erkin radikallarning zararli ta'siridan himoya qilish qobiliyatida farq qilishi mumkin. Ta'riflangan texnika har xil turdagi antioksidantlar aralashmasini o'z ichiga olgan o'simlik ob'ektlarini o'rganish uchun istiqbolli hisoblanadi.

Kalit so'zlar: erkin radikal, antioksidant, antioksidant faollik, umumiy antioksidant sig'im, xemiluminesans, luminol

Moliyalashtirish: ish rus tomonidan qo'llab-quvvatlandi ilmiy fond, grant No 14-15-00375.

Ex3 Yozuvlarga murojaat qilish kerak: Georgiy Konstantinovich Vladimirov

119192, Moskva, Lomonosovskiy pr-t, 31, 5-bino; [elektron pochta himoyalangan]

Qabul qilingan maqola: 10.03.2016 Maqola nashrga qabul qilingan: 18.03.2016

dorivor o'simlik materialida umumiy antioksidant qobiliyatini kimyoluminesans yordamida aniqlash

1 Tibbiyot biofizikasi kafedrasi, Lomonosov nomidagi Moskva davlat universiteti, fundamental tibbiyot fakulteti, Moskva, Rossiya

2 Farmakognoziya kafedrasi, Farmatsevtika fakulteti,

Sechenov nomidagi Birinchi Moskva Davlat Tibbiyot Universiteti, Moskva, Rossiya

Dorivor o'simlik materiali inson tanasi uchun antioksidantlar manbalaridan biridir. Xemiluminesans tahlili o'simlik materiallaridagi antioksidantlar tarkibini aniqlashning keng tarqalgan usullaridan biridir. Bizning ishimizda tog 'kuli, atirgul va do'lana meva qaynatmalari, shuningdek, malinali meva infuzionining umumiy antioksidant qobiliyatini (TAC) aniqlash uchun xemiluminesans tahlilidan foydalanildi. Tajribalar xren peroksidaza, vodorod peroksid va luminoldan tashkil topgan tizimning kimilyuminesans kinetikasini aniqladi. Tizim tarkibiy qismlarining konsentratsiyasi va hajmlari shunday tanlanganki, kuchli antioksidantlar (askorbin kislotasi) va o'rtacha quvvatdagi antioksidantlar (kversetin) o'lchash vaqtida (10 daqiqa) to'liq oksidlanadi. O'simlik namunalari mavjud bo'lganda xemiluminesans yorug'lik yig'indisining o'zgarishiga asoslangan TACni hisoblash usuli taklif qilindi va asoslandi. Xemiluminesans kinetikasining tahlili shuni ko'rsatdiki, o'rganilayotgan ob'ektlarda o'rtacha kuchli antioksidantlar, jumladan flavonoidlar va zaif antioksidantlar (tokoferol va boshqalar) ustunlik qiladi. O'rganilayotgan ob'ektlar uchun hisoblangan TAC qiymatlarini va ularning kimyoviy tahlil ma'lumotlarini taqqoslash shuni ko'rsatdiki, bir xil miqdordagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan mahsulotlar turlari bo'yicha turli xil antioksidantlar nisbati bilan tanani erkin radikallarning zararli ta'siridan himoya qilish qobiliyatida farq qilishi mumkin. . Ta'riflangan texnika har xil turdagi antioksidantlar aralashmasini o'z ichiga olgan o'simlik ob'ektlarini o'rganish uchun istiqbolli hisoblanadi.

Kalit so'zlar: erkin radikal, antioksidant, antioksidant faollik, umumiy antioksidant sig'im, xemiluminesans, luminol

Moliyalashtirish: ushbu ish Rossiya Ilmiy Jamg'armasi tomonidan qo'llab-quvvatlandi, grant №. 14-15-00375.

Tashakkur: mualliflar Lomonosov nomidagi Moskva davlat universitetidan Andrey Alekseevga eksperimentni o'tkazishdagi yordami uchun minnatdorchilik bildiradilar. Yozuvlarga murojaat qilish kerak: Jorj Vladimirov

Lomonosovskiy prospekti, d. 31, k. 5, Moskva, Rossiya, 119192; [elektron pochta himoyalangan] Qabul qilingan: 03/10/2016 Qabul qilingan: 18/03/2016

Organizmda hosil bo'lgan erkin radikallar hujayra membranalarining tuzilishini buzadi, bu esa, o'z navbatida, turli patologik holatlarning rivojlanishiga olib keladi. Radikallarning halokatli oksidlovchi ta'siri tananing antioksidant himoya tizimi tomonidan oldini oladi, bunda past molekulyar og'irlikdagi birikmalar - radikallarni tozalash vositalari (tuzoqlar) muhim rol o'ynaydi. Antioksidantlar manbalaridan biri bu dorivor o'simlik xom ashyosi, shuningdek, uning asosidagi preparatlar bo'lib, ularning antioksidant salohiyatini o'rganish ularning profilaktik va terapevtik ta'sirini oshirishga yordam beradi.

Antioksidantlarni aniqlashning asosiy usullari ishlarda ko'rib chiqiladi, ammo antioksidantlarning kimyoviy birikmalar sifatida ta'rifi o'rganilayotgan ob'ektning himoya xususiyatlari haqida to'liq tasavvurni bermaydi: ular nafaqat u yoki bu antioksidant miqdori bilan belgilanadi. , balki ularning har birining faoliyati bilan ham. Antioksidant faollik yoki antioksidant faollik, AOA, antioksidantning erkin radikal (kInH) bilan reaktsiyasi tezligi konstantasidir. Xemiluminesans (CL) usuli namunadagi antioksidantlar bog'laydigan radikallarning umumiy miqdorini (umumiy antioksidant sig'imi, TAU) va CL kinetikasini matematik modellashtirish usulidan foydalanganda, shuningdek, hosil bo'lish tezligini va reaktsiyasini aniqlashga imkon beradi. antioksidantlar bilan radikallar, ya'ni AOA.

Jami antioksidant quvvatni aniqlash uchun kemiluminesans usulining eng keng tarqalgan modifikatsiyasi luminolni kimyoluminesans faollashtiruvchisi sifatida ishlatishga asoslangan. Xemiluminometrning kyuvetasiga luminol, vodorod peroksid va o'z-o'zidan parchalanish (termoliz) natijasida radikallar hosil qila oladigan birikma qo'shilgan namuna joylashtiriladi, masalan, 2,2"-azobis-(2-amidinopropan). ) dihidroklorid (ABAP):

Molekulyar kislorod ishtirokida R^ alkil radikali peroksil radikal ROO^ hosil qiladi:

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv LH dan oraliq moddalar (luminol gidroperoksid va luminol endoperoksid) hosil bo'lishi orqali luminol oksidlanishining yakuniy mahsuloti - aminoftalik kislota molekulasi foton chiqaradigan elektron qo'zg'atilgan holatda hosil bo'ladi. , va buning natijasida xemiluminesans kuzatiladi. CL intensivligi foton ishlab chiqarish tezligiga mutanosibdir, bu esa o'z navbatida tizimdagi statsionar LH kontsentratsiyasiga proportsionaldir. Radikallar bilan o'zaro ta'sirlashganda, antioksidantlar tasvirlangan transformatsiyalar zanjirini to'xtatadi va foton shakllanishiga to'sqinlik qiladi.

Termolizga duchor bo'lgan birikmalar kimyoviy nurlanish usuli bilan namunaning antioksidant qobiliyatini tahlil qilishda radikallarning yagona mumkin bo'lgan manbai emas. Alternativlar xren peroksidaza-vodorod peroksid, gemin-vodorod peroksid, sitoxrom c-kardiolipin-vodorod peroksid va boshqalar. Peroksidazalar bilan luminol oksidlanish reaktsiyalarining sxemasi Kormier va boshqalarning ishida ko'rib chiqiladi. .

Ushbu tizimlar uchun CL kinetik egri reaktsiyaning ikki bosqichini aks ettiradi: CL intensivligining ortishi bosqichi va plato bosqichi yoki lyuminesansning asta-sekin kamayishi, qachon

CL intensivligi doimiy yoki asta-sekin kamayadi. Qog'ozda egri chiziqlarning ushbu xususiyatini hisobga olgan holda umumiy antioksidant quvvatni o'lchashning ikkita yondashuvi tasvirlangan. TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) usuli CL kechikish t ni o'lchashga asoslangan va troloks yoki askorbin kislotasi kabi antioksidantlarni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin: ular radikallar bilan yuqori reaksiya tezligi konstantasi bilan tavsiflanadi va shu sababli kuchli antioksidantlar deb ataladi. Yashirin davrda ularning to'liq oksidlanishi sodir bo'ladi. TAR usuli (umumiy antioksidant reaktivlik) platoda yoki xemiluminesans egri chizig'ining maksimal darajasida xemiluminesans q ning so'nish darajasini o'lchaydi:

bu erda I - antioksidantsiz kimilyuminesansning intensivligi va 11 - antioksidant ishtirokidagi CL intensivligi. Ushbu usul, agar tizimda radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish tezligi past bo'lgan, asosan, zaif antioksidantlar bo'lsa, qo'llaniladi - luminol konstantasiga nisbatan ancha past.

Antioksidantlarning ta'siri nafaqat t va c ko'rsatkichlari bilan tavsiflanadi. Ishlardan ko'rinib turibdiki, gemin-H202-luminol tizimidagi siydik kislotasi yoki sitoxrom c-kardiolipin-H202-luminol tizimidagi tokoferol, rutin va quercetin kabi antioksidantlarning ta'siri maksimal tezlikning o'zgarishi bilan tavsiflanadi. CL o'sishi (utx). Kinetikani matematik modellashtirish natijalari shuni ko'rsatadiki, ushbu antioksidantlarning radikallar bilan o'zaro ta'sirining tezligi konstantalarining qiymatlari luminol konstantasi qiymatiga yaqin, shuning uchun bunday antioksidantlarni o'rta kuchli antioksidantlar deb atash mumkin.

Agar o'rganilayotgan materialda, xususan, o'simlik xom ashyosida faqat bitta turdagi antioksidantlar mavjud bo'lsa, unda ularning tarkibi yuqorida sanab o'tilgan uchta ko'rsatkichdan biri (m, q yoki V) bilan tavsiflanishi mumkin edi. Ammo o'simlik xom ashyosi turli xil kuchli antioksidantlarning aralashmasini o'z ichiga oladi. Ushbu muammoni hal qilish uchun ba'zi mualliflar formula bo'yicha hisoblangan ma'lum bir DE vaqti davomida kimyoluminesans yorug'lik yig'indisining o'zgarishidan foydalanganlar.

DE = DE0 - DE,

bu erda DE0 va DE5 ma'lum vaqt uchun CL yorug'lik yig'indisidir? mos ravishda nazorat va sinov namunalarida. Vaqt tizimdagi barcha antioksidantlarning oksidlanishi, ya'ni sinov namunasining CL egri chizig'i nazorat namunasining CL egri chizig'i darajasiga yetishi uchun etarli bo'lishi kerak. Ikkinchisi tadqiqotchilar nafaqat luminesansning yorug'lik yig'indisini qayd etishlari, balki CL kinetika egri chizig'ini etarlicha uzoq vaqt davomida yozib olishlari kerakligini taklif qiladi, bu har doim ham amalga oshirilmaydi.

Barcha o'lchangan ko'rsatkichlar asbob va o'lchov sharoitlariga bog'liq bo'lganligi sababli, o'rganilayotgan tizimdagi moddaning antioksidant ta'siri odatda Trolox kabi standart sifatida qabul qilingan antioksidantning ta'siri bilan taqqoslanadi.

Tizim horseradish peroksidaz-vodorod periks ko'p mualliflar tomonidan o'simlik materiallari umumiy antioksidant salohiyatini tahlil qilish uchun ishlatilgan. Ishlarda namunalardagi antioksidantlar miqdorini baholash uchun CL latent davri (TRAP usuli) ishlatilgan va ishlarda CL rivojlanish egri chizig'i ostidagi maydon ishlatilgan. Biroq, bu ishlar aniq asos bermaydi

OAUni baholash uchun u yoki bu parametrni tanlash.

Tadqiqotning maqsadi har xil turdagi antioksidantlarning nisbati TAU ga qanday ta'sir qilishini aniqlash va o'simlik materiallarida TAUni aniqroq aniqlash uchun kimyoluminesans usulini o'zgartirish edi. Buning uchun o‘z oldimizga bir qancha vazifalarni qo‘yganmiz. Birinchidan, qaysi turdagi antioksidantlar o'rganilayotgan ob'ektlarning TAE ga asosiy hissa qo'shishini tushunish uchun o'rganilayotgan ob'ektlarning CL kinetikasini uch turdagi (kuchli, o'rta va zaif) standart antioksidantlar kinetikasi bilan solishtirish. Ikkinchidan, TAE ga eng katta hissa qo'shadigan antioksidant ta'siriga nisbatan ushbu ob'ektlar ta'sirida CL yorug'lik yig'indisining pasayishini o'lchash orqali o'rganilayotgan ob'ektlarning TAE ni hisoblash.

MATERIALLAR VA USLUBLAR

Tadqiqot ob'ektlari "Krasnogorskleksredstva" OAJ (Rossiya) tomonidan ishlab chiqarilgan do'lana, tog 'kuli va atirgul mevalarining sanoat namunalari, shuningdek mualliflar tomonidan tabiiy o'sish sharoitida Moskva viloyatida to'plangan va haroratda quritilgan malina mevalari edi. 60-80 ° S, ular sharbati va bosim deformatsiyalarini izolyatsiya qilishni to'xtatmaguncha.

Xemiluminesans usulida antioksidant sig'imini tahlil qilish uchun reaktivlar quyidagilar edi: KH2PO4, 20 mM bufer eritmasi (pH 7,4); otquloq ildizlaridan peroksidaza (faollik 112 U/mg, M = 44 173,9), 1 mM suvli eritma; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindion, 3-aminoftalik kislota gidrazid, M=177,11), 1 mM suvli eritma; vodorod periks (H2O2, M = 34,01), 1 mM suvli eritma; antioksidantlarning eritmalari (askorbin kislotasi, quercetin, tokoferol). Barcha reagentlar Sigma Aldrich (AQSh) tomonidan ishlab chiqarilgan.

Dolana, tog 'kuli va yovvoyi atirgul mevalaridan qaynatmalar va malina mevalaridan infuzion SSSR Davlat farmakopeyasining "Infuzionlar va qaynatmalar" umumiy farmakopeya maqolasida keltirilgan metodologiyaga muvofiq tayyorlangan.

Umumiy antioksidant quvvati PowerGraph 3.3 dasturidan foydalangan holda Lum-100 kimyo-luminometrida (DISoft, Rossiya) kimyoluminesansni qayd etish orqali aniqlandi. O'simlik materiallarida TAU ni aniqlash uchun 1 mM konsentratsiyada 40 mkl luminol, 0,1 mkM konsentratsiyada 40 mkl horseradish peroksidaza, 10 dan 50 µl gacha qaynatma yoki infuzion (kontsentratsiyaga qarab) va fosfat buferi. umumiy namuna hajmini 1 ml ga etkazish uchun zarur bo'lgan miqdorda. Kyuvet qurilmaga o'rnatildi va fon signalini kuzatgan holda CL qayd etildi. Fon signali ro'yxatga olingandan 48 soniya o'tgach, kyuvetaga 1 mM konsentratsiyali 100 mkl H2O2 qo'shildi va CL ro'yxatga olish 10 daqiqa davom ettirildi. O'simlik ob'ektlarining har birining har xil konsentratsiyasi bilan to'rtta namuna tayyorlandi. CL, shuningdek, antioksidantlarning har biri uchun besh xil konsentratsiyada askorbin kislotasi, quercetin va tokoferol eritmalari uchun qayd etilgan. Keyinchalik, qaynatmalar va infuziyalar namunalarining TAU kversetin uchun qayta hisoblab chiqildi.

Luminol, horseradish peroksidaza va vodorod periks kontsentratsiyasi o'rtacha vaqt ichida (10 daqiqadan ko'p bo'lmagan) dorivor o'simlik materiallaridan suvli ekstraktlarning antioksidant qobiliyatini aniqlash uchun tanlangan. Bu vaqt ichida askorbat antioksidantlari va flavonoid quercetin (o'simlik materiallarining asosiy antioksidantlari) uchun xemiluminesans egri chiziqlari.

platoga yetdi, bu tizimdagi antioksidantlarning to'liq yo'q qilinishini ko'rsatdi. O'rganilayotgan namunalarning suyultirilishi va standart antioksidantlar eritmalarining konsentratsiyasi (rasmlar sarlavhalarida ko'rsatilgan) barcha CL kinetik egri chiziqlari bir xil asbob sezgirligida o'lchanadigan tarzda tanlangan.

Antioksidant quvvati antioksidantni o'z ichiga olgan moddaning qo'shilishi natijasida xemiluminesans kinetik egri chizig'i ostidagi maydonning (AS) o'zgarishidan hisoblab chiqilgan. Buning uchun biz antioksidantsiz tizim uchun S0 ni hisoblab chiqdik va undan antioksidant qo'shilgan tizimni tavsiflovchi SS maydonini ayirdik. AS qiymati xemiluminometrning sezgirligiga va o'lchash shartlariga bog'liq. AS/C ■ V nisbati (bu erda C - kyuvetada o'rganilayotgan biologik materialning konsentratsiyasi, g/l, V - kyuvetaning hajmi, l) o'rganilayotgan materialning 1 g antioksidant qobiliyatini ifodalaydi, ya'ni. , o'simlik materiallari.

Reaksiya aralashmasining bir xil hajmiga joylashtirilgan standart antioksidant, masalan, quercetin eritmasining antioksidant sig'imi ASa shunga o'xshash tarzda hisoblab chiqilgan. AS/CÄ ■ V nisbati (bu erda CA - kyuvetada antioksidantning og'irlik konsentratsiyasi, g/l) 1 g antioksidantning antioksidant qobiliyatini ifodalaydi.

Standart antioksidantlarning har biri uchun hisob-kitoblar chiziqli munosabatlar doirasida amalga oshirilganligiga va olingan natijalar takrorlanishiga ishonch hosil qilish uchun bir nechta konsentratsiyali eritmalardan signal qayd etilgan. Haqiqatan ham, konsentratsiya bo'yicha signalning chiziqli bog'liqligi (ASa = kA ■ CA) olindi, undan kA stoxiometrik koeffitsienti hisoblab chiqilgan. Fisher mezoniga ko'ra, standart antioksidantlar uchun olingan kA qiymatlari 0,975 ehtimollik bilan statistik ahamiyatga ega. Keyinchalik, to'rtta konsentratsiyadan olingan signal to'rtta o'simlik namunasining har biri uchun qayd etildi va barcha namunalar uchun signalning konsentratsiyaga chiziqli bog'liqligi (AS = k ■ C) olindi, undan k stoxiometrik koeffitsient hisoblab chiqildi. 0,975 (Fisher testi) ehtimoli bilan o'simlik namunalari uchun olingan k qiymatlari statistik ahamiyatga ega. Standart antioksidantning og'irligi (mg%) bo'yicha o'simlik materialining umumiy antioksidant qobiliyati formula bo'yicha topildi.

OAU = k ■ 105. k

Qiymatlar p da o'rtacha arifmetik ± standart og'ish (M ± 5) sifatida taqdim etildi.<0,05.

TADQIQOT NATIJALARI

Natriy askorbat (1-rasm) ishtirokida xemiluminesans kinetikasini o'rganish shuni ko'rsatdiki, bu antioksidant CL deyarli to'liq bostirilgan yashirin davr bilan tavsiflanadi. Uning davomiyligi tizimdagi antioksidant miqdori bilan mutanosibdir. Bunday holda, CL egri chizig'ining qiyaligi ham, platodagi CL intensivligi ham o'zgarmaydi. Bu askorbin kislotaning kuchli antioksidant bo'lib, tizimda hosil bo'lgan barcha radikallarni, shu jumladan luminol radikallarini ushlab turadiganligi va CL barcha askorbat oksidlanmaguncha rivojlanmasligi bilan izohlanadi.

Tokoferolning ta'siri (2-rasm) platoda CL intensivligining pasayishi bilan namoyon bo'ldi, bu zaif antioksidantlar uchun xosdir, garchi tokoferol eng ko'p bo'lganlardan biri hisoblanadi.

kuchli antioksidantlar. Ehtimol, bu nomuvofiqlik bizning tajribamizda erkin radikallar suvli eritmada bo'lganligi bilan bog'liq bo'lsa, tokoferolning ta'siri odatda qutbsiz muhitda o'rganiladi. Kardiolipin bilan sitoxrom c kompleksi radikallar manbai bo'lib xizmat qilgan va bu kompleks ichida luminol bilan reaksiya davom etgan ishda tokoferol o'rtacha kuchli antioksidant xususiyatlariga ega edi.

Kversetinning turli kontsentratsiyalarining bizning tizimimizga ta'sirini o'rganib chiqdik (3-rasm) va uning va natriy askorbat va tokoferol uchun kinetik egri chiziqlarni taqqoslab, shuni ta'kidlash mumkinki, quercetinning asosiy ta'siri qiyaligining o'zgarishida namoyon bo'ladi. egri chiziqlar, ya'ni mo''tadil antioksidantlar uchun xos bo'lgan CL ning rivojlanish tezligi.

Barcha o'rganilgan damlamalar uchun CL egri chiziqlari (4-rasm) oxirida, ya'ni CL intensivligining bir oz pasayishi bilan quercetin uchun egri chiziqlarga o'xshaydi, ya'ni.

Vaqt, min

Guruch. 1. Natriy askorbatining xemiluminesans kinetikasiga ta'siri

Tizim tarkibiy qismlarining konsentratsiyasi: luminol - 40 mkM, xren peroksidaza - 4 nM, vodorod periks - 100 mkM. Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,05 mkM; 3 - 0,10 mkM; 4 - 0,15 mkM; 5 - 0,2 mkM; 6 - 0,25 mkM natriy askorbat.

plato. Ishda ko'rsatilganidek, bu xatti-harakatlar o'rta kuchli antioksidantlar uchun xosdir, bizning holatlarimizda polifenollar - flavonoidlar va taninlar kiradi. Malinali mevalarning infuzioni uchun (4-rasm, D), plato darajasida kemiluminesansning pasayishi sezilarli bo'lib, bu holda tokoferol bo'lgan zaif antioksidantlar uchun xosdir. Quercetin va tokoferol nuqtai nazaridan, malina mevasi infuzioni 4,7 ± 0,9 mkmol / g kvertsetin va 11,9 ± 0,8 mkmol / g tokoferolni o'z ichiga oladi.

O'simlik materiallaridan o'rganilgan to'rtta suvli ekstraktning turli kontsentratsiyasi uchun olingan xemiluminesans egri chiziqlarini solishtirganda, o'rta va kuchsiz antioksidantlarning namunalarning umumiy antioksidant qobiliyatiga qo'shgan hissasi quyidagi tartibda kamayishi ko'rsatilgan: malina mevasi infuzioni (1-rasm). 4, D), atirgul mevasi qaynatmasi (4-rasm, C), rovon mevalari (4-rasm, A), do'lana mevalari (4-rasm, B). Kyuvetada o'rganilayotgan moddaning C kontsentratsiyasi bo'yicha AS qiymatlari va quercetin bo'yicha umumiy antioksidant quvvati qiymatlari jadvalda keltirilgan.

NATIJALARNING MUHOKAMASI

Tajribalar davomida olingan ma'lumotlar va ular asosida hisoblangan o'rganilayotgan ob'ektlarning TAU qiymatlari kimyoviy tahlil usullari yordamida aniqlangan ulardagi asosiy antioksidantlarning tarkibi bilan taqqoslandi. Turli ob'ektlardagi antioksidantlarning umumiy miqdori va TAU o'rtasidagi ijobiy bog'liqlik shubhasiz bo'lishiga qaramay, bu ko'rsatkichlar o'rtasida sezilarli farqlar mavjud. Misol uchun, agar flavonoidlar, taninlar va askorbin kislotasi tarkibining yig'indisini oladigan bo'lsak, u do'lana mevalarining qaynatmasidan tashqari barcha o'rganilgan ob'ektlar uchun hisoblangan TAU dan ko'p bo'ladi (jadval).

Boshqa tadqiqotchilar ham kimyoviy tahlil natijalari va xemiluminesans usuli bilan aniqlangan TAU qiymati ko'pincha mos kelmasligini ko'rsatdi. Ishda umumiy antioksidant quvvati aniqlandi

46 Vaqt, min

Men" "h chi----.

Guruch. 2. Tokoferolning xemiluminesans kinetikasiga ta'siri

Tizim tarkibiy qismlarining konsentratsiyasi: luminol - 40 mkM, xren peroksidaza - 4 nM, vodorod periks - 100 mkM. Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,01 mkM; 3 - 0,025 mkM; 4 - 0,06 mkM; 5 - 0,1 mkM; 6 - 0,2 mkM tokoferol.

46 Vaqt, min

Guruch. 3-rasm. Kversetinning xemiluminesans kinetikasiga ta'siri Tizim komponentlarining kontsentratsiyasi: luminol - 40 mkM, xren peroksidaza - 4 nM, vodorod peroksid - 100 mkM. Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,02 mkM; 3 - 0,03 mkM; 4 - 0,04 mkM; 5 - 0,05 mkM; 6 - 0,06 mkM quercetin.

Vaqt, min

46 Vaqt, min

46 Vaqt, min

120 I 100 80 \ 60 40 20

46 Vaqt, min

Guruch. 4-rasm. Rovon mevalari (A), do'lana (B), yovvoyi gul (C) va malina mevasi infuzioni (D) qaynatmalarining kimilyuminesans kinetikasiga ta'siri. (A) Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,002 g/l; 3 - 0,004 g/l; 4 - 0,006 g/l; 5 - 0,008 g/l rovon mevalari qaynatmasi. (B) Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,005 g/l; 3 - 0,0075 g/l; 4 - 0,01 g/l; 5 - 0,0125 g/l do'lana mevalaridan qaynatma. (C) Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,0015 g/l; 4 - 0,002 g/l; 5 - 0,0025 g/l gul dumbasining qaynatmasi. (D) Egri chiziqlar: 1 - nazorat namunasi; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,003 g/l; 4 - 0,004 g/l; 5 - 0,005 g / l malina infuzioni.

tizimda peroksidaz-luminol-vodorod peroksid triterpen birikmalarining tarkibi bilan bog'liq. Shu bilan birga, boshqa o'simlik tadqiqot ob'ekti bo'lgan xuddi shu mualliflarning ishlarida TAU va har qanday moddalar guruhi, shu jumladan flavonoidlar tarkibi o'rtasida hech qanday bog'liqlik kuzatilmagan.

Ushbu nomuvofiqliklar kamida uchta omil bilan bog'liq. Birinchidan, antioksidantlarning faolligi muhim, ya'ni o'simlik namunasini tashkil etuvchi turli antioksidantlar uchun ularning radikallar bilan o'zaro ta'sir qilish tezligi. Izmailovning fikricha, mexidol, tokoferol va quercetin uchun mos keladigan reaksiyalarning tezlik konstantalari 0,04: 2: 60 ga bog'liq. Ikkinchidan, kimyoviy reaksiyaga kiradigan har bir antioksidant molekula turli xil miqdordagi radikallarni ushlab turishi mumkin. Ishga ko'ra, quercetin, siydik va askorbin kislotalar reaksiyaga kirishgan antioksidant molekula uchun mos ravishda 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 va 0,5 ± 0,2 radikallarni ushlab turishgan (gemin-H202-luminol tizimi ishlatilgan). Uchinchidan, tadqiqot natijalariga ishda bo'lgani kabi o'simlik namunalarining o'zida ham peroksidaza faolligi, shuningdek namunalarda kaltsiy borligi ta'sir qilishi mumkin, bu ishda ko'rsatilganidek, ko'paytirishga qodir. muayyan sharoitlarda horseradish peroksidaza faolligi. Bu odatda ko'proq natijaga olib keladi

platoda nazorat egri chizig'iga qaraganda yuqori CL intensivligi, ammo biz buni kuzatmadik.

Birinchi omil yorug'lik yig'indisining o'zgarishi kabi parametrdan foydalanishni keskin cheklaydi, chunki xemiluminesansni o'lchash vaqti sinov namunasidagi barcha antioksidantlarni iste'mol qilish vaqtidan uzoqroq bo'lishi kerak. Ushbu momentning yondashuvini faqat kimilyuminesans kinetikasini o'lchash orqali baholash mumkin. Bundan tashqari, zaif antioksidantlarning OAE ga qo'shgan hissasi keskin kam baholanadi, chunki ularning to'liq oksidlanish vaqti qabul qilinadigan o'lchash vaqtidan (10-20 minut) bir necha baravar ko'p.

Antioksidantning stoxiometrik koeffitsienti bundan ham katta ahamiyatga ega. Ular tomonidan tutilgan n radikallar soni teng

Bu erda p - stoxiometrik koeffitsient, Am esa o'lchash vaqtida antioksidant konsentratsiyasining o'zgarishi, bizning holatlarimizda sinov namunasidagi sinov moddasining dastlabki konsentratsiyasi.

Antioksidant yo'qligida va uning mavjudligida lyuminesansning yorug'lik yig'indisining farqi n ga proportsionaldir.Ushlab olingan radikallarning umumiy soni n = Y.p. m,

bu yerda ma'lum bir antioksidantning stexiometrik koeffitsienti, m esa o'zgarish vaqtidagi konsentratsiyasi

Tadqiqot ob'ekti Flavonoidlar, mg%* Taninlar, mg%* Askorbin kislotasi, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. birliklar OAU, mg% kuersetin

Rovon mevalaridan qaynatma 8,87 ± 0,01 210,00 ± 10,00 0,67 ± 0,02 7,13 ± 0,96 56,53 ± 7,61

Atirgulning qaynatmasi 4,66 ± 0,04 850,00 ± 20,00 3,70 ± 0,12 16,60 ± 3,40 131,63 ± 27,26

Do‘lana mevalaridan qaynatma 3,01 ± 0,06 12,00 ± 3,00 0,23 ± 0,002 3,18 ± 0,29 25,20 ± 2,32

Quritilgan malina infuzioni 90,00 ± 4,00 40,00 ± 20,00 3,91 ± 0,08 6,65 ± 1,21 52,69 ± 9,56

Eslatma: * - adabiyot ma'lumotlari, . AS - namuna uchun yorug'lik summasining o'zgarishi, rel. birlik, C - kyuvetada namunaning konsentratsiyasi, g/l. Hisoblangan qiymatlar p da ishonchli<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

reniy. Tushunarli radikallarning umumiy soni antioksidantlarning umumiy miqdoriga teng emas, chunki pt koeffitsientlari nafaqat birlikka teng emas, balki turli antioksidantlar uchun ham sezilarli darajada farqlanadi.

n qiymati antioksidant bo'lgan namuna va antioksidantsiz nazorat namunasi o'rtasidagi ma'lum vaqt davomida o'lchangan yorug'lik yig'indisi farqiga proportsionaldir:

Bu erda k - bir xil o'lchash sharoitida doimiy bo'lgan koeffitsient.

Maqolada ko'rib chiqilgan usul umumiy antioksidant quvvatni aniqlashga imkon beradi, kimyoviy tahlil esa mahsulotdagi antioksidantlarning umumiy miqdorini aniqlashga imkon beradi. Shu sababli, kimyoluminesans usuli kimyoviy tahlillarga qaraganda ko'proq ma'lumotli ko'rinadi.

Horseradish peroksidaza, vodorod periks va luminoldan tashkil topgan tizimda kimilyuminesans kinetikasini qayd qilish orqali o'simlik xom ashyosining umumiy antioksidant qobiliyatini baholash uchun biz tanlagan shartlar (komponentlarning kontsentratsiyasi mos ravishda 4 nM, 100 mkM va 40 mkM; 20) mM fosfat buferi, pH 7,4),

10 daqiqada kuchli antioksidantlar (askorbin kislota) va o'rtacha antioksidantlarning (kversetin) oksidlanishini ta'minladi. Ushbu o'lchov davomiyligi qulay va o'lchovlarning kerakli sifatini ta'minlaydi.

Xemiluminesans kinetikasining tahlili shuni ko'rsatdiki, o'rganilayotgan ob'ektlarda (rovon, yovvoyi gul, do'lana mevalari va malina mevalari infuziyasi) asosiy antioksidantlar o'rta kuchli antioksidantlar, shu jumladan flavonoidlar va zaif kuchli antioksidantlar (tokoferol va boshqalar). ). Kimiluminesans yorug'lik yig'indisining pasayishiga asoslanib, o'rganilayotgan ob'ektlar uchun umumiy antioksidant quvvati hisoblab chiqildi. Olingan TAU qiymatlarini kimyoviy tahlil natijalari bilan taqqoslash shuni ko'rsatdiki, turli nisbatlarda bir xil miqdordagi antioksidantlarni o'z ichiga olgan mahsulotlar tanani erkin radikallarning zararli ta'siridan samarali himoya qilish qobiliyatida farq qilishi mumkin. Ta'riflangan texnika turli xil antioksidantlar aralashmasini o'z ichiga olgan o'simlik ob'ektlarini o'rganish uchun istiqbolli hisoblanadi. Shu bilan birga, tadqiqotning soddaligi va arzonligi bilan ajralib turadi. Kimiluminesans kinetikasini o'lchashni reaksiyalarni matematik modellashtirish bilan birlashtirish nafaqat TAU ​​ni aniqlash jarayonini avtomatlashtiradi, balki antioksidantlarning alohida guruhlarini indikatorga qo'shgan hissasini ham aniqlaydi.

Adabiyot

1. Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Erkin radikallar tartibga solish va patologik jarayonlarning ishtirokchilari sifatida. In: Grigoriev A. I., Vladimirov Yu. A., muharrirlar. Asosiy fanlar - tibbiyot. Biofizika. asal. texnologiya. Moskva: MAKS matbuoti; 2015. 1-jild. bet. 38-71.

3. Xasanov V. V., Ryjova G. L., Maltseva E. V. Antioksidantlarni o'rganish usullari. Kimyo. rast. xomashyo. 2004; (3): 63-75.

4. Vasilev R. F., Kancheva V. D., Fedorova G. F., Batovska D. I., Trofimov A. V. Kalkonlarning antioksidant faolligi. Reaktivlikni xemiluminesans yordamida aniqlash va reagentlar va oraliq mahsulotlarning energiyalari va tuzilmalarini kvant-kimyoviy hisoblash. Kinetika va kataliz. 2010; 51(4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil "ev RF, Veprintsev TL. Peroksi-

radikal vositachi xemiluminesans: mexanik xilma-xillik va antioksidant tahlil uchun asoslar. Arkivoc. 2007; 8:163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Antiradikal imkoniyatlarni H2O2-gemin bilan qo'zg'atilgan luminol xemiluminesans bilan baholash. J Agric Food Chem. 2003 yil 3 dekabr; 51 (25): 7481-8.

9. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V. Erkin radikallar va hujayrali kimiluminesans. Muvaffaqiyatlar biol. kimyo. 2009; 49:341-88.

10. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V., Izmailov D. Yu. Kinetik kimiluminesans erkin radikal reaktsiyalarni o'rganish usuli sifatida. Biofizika. 2011; 56(6): 1081-90.

11. Izmailov D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu. A. Xemiluminesans kinetikasini o'lchash orqali antioksidant faollikni aniqlash. Fotobiologiya va fotomeditsina. 2011; 7(2):70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termoliz natijasida hosil bo'lgan luminol luminesans. Bepul.

Radic Res Commun. 1992 yil; 17(5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. SOD faolligini baholash uchun luminol lyuminestsensiyasini o'chirishdan foydalanish to'g'risida. Bepul Radic Biol Med. 1994 yil iyun; 16(6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Xanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Luminol bilan kuchaytirilgan xemiluminesans o'lchovlaridan umumiy antioksidant potentsial (TRAP) va umumiy antioksidant reaktivligini baholash. Bepul Radic Biol Med. 1995 yil fevral; 18(2):153-8.

17. Cormier MJ, Prichard PM. To'xtatilgan oqim texnikasi bilan luminolning lyuminestsent peroksidlanish mexanizmini o'rganish. J Biol Chem. 1968 yil 25 sentyabr; 243(18): 4706-14.

21. Alekseev A. V., Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. 2,2'-azo-bis (2-amidinopropan) yordamida faollashtirilgan xemiluminesans orqali antioksidantlarni aniqlash. Moskva davlat universiteti axborotnomasi. Ser. 2. Xim. 2012; 53 3): 187-93.

24. SSSR Davlat farmakopeyasi SSSR Sog'liqni saqlash vazirligi XI nashr. Nashr. 2 «Tahlilning umumiy usullari. Dorivor o'simlik materiallari". M.: Tibbiyot; 1987. bet. 147-8.

25. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Kornyushina M. A. Rosehip ekstrakti preparatlarini o'rganish. Dorixona. 2012; (2): 14-6.

26. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Avrach A. S. Do'lana mevasini saqlash va suv olishning turli usullarida o'rganish. Dorixona. 2010; (5): 16-8.

27. Avrach A. S., Sergunova E. V., Kuksova Ya. V. Mevalarning biologik faol moddalari va oddiy malinaning suv ekstraktlari. Dorixona. 2014 yil; (1): 8-10.

28. Avrach A. S., Samylina I. A., Sergunova E. V. Do'lana mevalarining biologik faol moddalarini o'rganish - gomeopatik matritsali damlamalarni tayyorlash uchun xom ashyo. Shanba kuni. ilmiy tr. XXIV Moskva materiallari asosida. intl. gomeopatist. konf. “Zamonaviy tibbiyotda gomeopatik usulni ishlab chiqish”; 2014 yil 24-25 yanvar; Moskva. M.; 2014. p. 146-7.

29. Sergunova E. V., Sorokina A. A. Turli xil saqlash usullarining dorivor o'simlik materiallaridagi biologik faol moddalar tarkibini o'rganish. Shanba kuni. XX Rossga asoslangan tezislar. nat. kong. "Odam va tibbiyot"; 2013 yil 15-19 aprel; Moskva. Moskva: EkoOnis; 2013. p. 184-90.

30. Aleksandrova E. Yu., Orlova M. A., Neiman P. L. Horseradish ildizpoyalari va ildizlaridan olingan ekstraktlarda peroksidaza faolligini va uning turli ta'sirlarga barqarorligini o'rganish. Vestn. Moskva davlat universiteti. Ser. 2. Kimyo. 2006; 47(5):350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Free radikaly kak uchastniki regulyatornykh i patologicheskikh protsessov. In: Grigor "ev AI, Vladimirov YuA, muharrirlar. Fundamental" nye nauki - meditsine. Biofizicheskie meditsinskie texnologiyalari. Moskva: MAKS matbuoti; 2015.v. 1. p. 38-71. rus.

2. Chanda S, Dave R. Antioksidant faollikni baholash uchun in vitro modellari va antioksidant xususiyatlarga ega bo'lgan ba'zi dorivor o'simliklar: Umumiy ko'rinish. Afr J Microbiol Res. 2009 yil dekabr; 3(13): 981-96.

3. Xasanov V.V., Ryjova G.L., Mal "tseva EV. Metodiya issledovaniya antioksidant. Ximija Rastitel "nogo Sir" ja. 2004; (3): 63-75. Rus.

4. Vasil "ev RF, K" "ncheva VD, Fedorova GF, B" "tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" xalkonov. Xemilyuminestsentnoe opredelenie reaktsionnoi sposobnosti i kvantovo-ximicheskii raschet energii i stroeniya reagentov va intermediatov. Kinetika va kataliz. 2010; 51(4): 533-41. rus.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA va boshqalar. Curcumin bilan bog'liq bo'lgan birikmalarning antioksidant potentsiali xemiluminesans kinetikasi, zanjirni buzish samaradorligi, tozalash faolligi (ORAC) va DFT hisob-kitoblari bilan o'rganiladi. Beilstein J Org Chem. 2015 yil 11 avgust; 11:1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasilyev RF, Veprintsev TL.Peroksi-radikal vositachilikli xemiluminesans: mexanik xilma-xillik va antioksidant tahlil uchun asoslar.Arkivoc.2007;8:163-215.

7. Fedorova GF, Menshov V.A., Trofimov AV, Vasilyev RF.O'simlik lipidlarining antioksidant xossalari uchun oson xemiluminesans tahlili: asoslar va tasviriy misollar.Tahlilchi.2009 yil, 134 (10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. H2O2-gemin tomonidan qo'zg'atilgan luminol bilan antiradikal imkoniyatlarni baholash

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Erkin radikaly i kletochnaya xemilyuminestsentsiya. Usp Biol Khim. 2009; 49:341-88. rus.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya khemilyuminestsentsiya metodi izucheniya reaktsii svobodnykh radikalov. biofizika. 2011; 56(6): 1081-90. rus.

11. Izmailov DYu, Demin E.M., Vladimirov YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metodom izmereniya kinetiki khemilyuminestsen-tsii. Fotobiologiya va fotomeditsina. 2011; 7(2):70-6. rus.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termoliz natijasida hosil bo'lgan luminol luminesans. Free Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. SOD faolligini baholash uchun luminol lyuminestsensiyasini o'chirishdan foydalanish to'g'risida. Bepul Radic Biol Med. 1994 yil iyun; 16(6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. Methemoglobin yoki oksihemoglobinning vodorod peroksid bilan reaktsiyasi bilan bog'liq ko'rinadigan chemiluminesans. Photochem Photobiol. 1994 yil noyabr; 60(5):405-11.

15. Lissi EA, Salim-Xanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Luminol bilan kuchaytirilgan xemiluminesans o'lchovlaridan umumiy antioksidant potentsial (TRAP) va umumiy antioksidant reaktivligini baholash. Bepul Radic Biol Med. 1995 yil fevral; 18(2):153-8.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV va boshqalar. HRP-H2O2-luminol tizimi tomonidan liposomal flavonollarning antioksidant faolligini in vitro baholash. J Mikrokapsula. 2011; 28(4):258-67.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Mexanizmni tekshirish

to'xtatilgan oqim texnikasi bilan luminolning lyuminestsent peroksidlanishi. J Biol Chem. 1968 yil 25 sentyabr; 243(18): 4706-14.

18. Chang CL, Lin CS, Lai GH. Fitokimyoviy xususiyatlar, erkin radikallarni tozalash faoliyati va beshta dorivor o'simlik ekstraktining neyroproteksiyasi. Evidga asoslangan komplement Alternativ Med. 2012; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011 yil 10-avgust.

19. Chang CL, Lin CS. Terminalia chebula Retzius ekstraktlarining fitokimyoviy tarkibi, antioksidant faolligi va neyroprotektiv ta'siri. Evidga asoslangan komplement Alternativ Med. 2012; 2012: 125247. doi: 10.1155/2012/125247. Epub 2011 yil 5-iyul.

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. Xemiluminesans usuli bilan turli flavonoidlarning antioksidant faolligini baholash. AAPS PharmSci. 2003 yil; 5(2): 111-5.

21. Alekseev AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksidantov metodom aktivirovannoi khemilyuminestsentsii s ispol "zovaniem 2.2" -azo-bis (2-amidinopropana). Moskva universiteti kimyo byulleteni. 2012; 53(3): 187-93. rus.

22. Pogacnik L, Ulrih NP. O'simlik ekstraktlarining antioksidant qobiliyatini aniqlash uchun optimallashtirilgan xemiluminesans tahlilini qo'llash. Luminesans. 2012 yil noyabr-dekabr; 27(6):505-10.

23. Saleh L, Plieth C. Xemilyuminesans inhibisyon tahlili bilan biologik namunalarda aniqlangan umumiy parametr sifatida umumiy past molekulyar og'irlikdagi antioksidantlar. Nat protokoli. 2010 yil sentyabr; 5(10): 1627-34.

24. SSSR vazirlik zdravooxraneniya. Gosudarsvennaya farmokopeya SSSR. 11-nashr. Iss. 2. “Obshchie metodikasi tahlili.

Lekarstvennoe rastitel "noe sir" e", Moskva: Medltsina, 1987, 147-8-bet. Rus.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh preparatov shipovnika. Dorixona. 2012; (2): 14-6. rus.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii va vodnykh izvlechenii. Farmatsiya. 2010; (5): 16-8. rus.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biologicheski aktivnye veshchestva plodov i vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsiya. 2014; (1): 8-10. rus.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr "ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. "Razvitie gomeopaticheskogo metoda v sovremennoi meditsine" 14-Moskva xalqaro gomeopatik konferentsiya materiallari to'plami; 2014-yil Moskva;

29. Sergunova EV, Sorokina AA. Izuchenie sostava biologicheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel "nom syr" e razlichnykh sposobov konservatsii. "Chelovek i lekarstvo" 20-Rossiya Milliy Kongressi materiallari; 2013 yil 1519 aprel; Moskva. Moskva: EkOOnis; 2013. p. 184-90. rus.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neyman PL. Izuchenie peroksidaznoi aktivnosti v ekstraktax iz kornevishcha i kornei khrena i ee stabil "nosti k razlichnym vozdeistviyam. Moskva universiteti kimyo byulleteni. 2006; 47 (5): 350-2. Rus.