1 Bolshakova L.S. jedanMilentiev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Federalna državna budžetska obrazovna ustanova visokog stručnog obrazovanja „Orlovsky državni institut privreda i trgovina"

2 Federalna državna budžetska ustanova "Centar za hemikalizaciju i poljoprivrednu radiologiju "Orlovsky"

3 Federalna državna budžetska obrazovna ustanova visokog stručnog obrazovanja "Državni univerzitet - obrazovni, naučni i industrijski kompleks"

Proučavana je mogućnost primjene hemiluminiscencije za procjenu antioksidativne aktivnosti prehrambenih supstanci. Predložena metoda se zasniva na hemiluminiscenciji luminola u alkalnoj sredini, čiji intenzitet zavisi od količine peroksida u hemiluminiscentnom uzorku. Hemiluminiscencija je snimljena korištenjem razvijene instalacije koja sadrži dozirnu pumpu, svjetlo-nepropusnu komoru, staklenu vakuumsku fotomultiplikatorsku cijev i kompjuterski sistem. Da bi se pojačala hemiluminiscencija, u luminol je dodan rastvor kalij-fericijanida. Promjene u intenzitetu hemiluminiscencije zabilježene su u trenutku unošenja analiziranog uzorka u otopinu luminola. Kao analizirani uzorak korišten je ekstrakt maslačka dobiven suhom niskotemperaturnom destilacijom. Sadrži fenolne spojeve poznate po visokoj antioksidativnoj aktivnosti. Utvrđeno je da se metoda hemiluminiscencije može koristiti za određivanje antioksidativnih svojstava različitih jedinjenja hrane.

Bibliografska veza

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentiev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. UPOTREBA KEMILUMINESCENCIJE ZA OCJENU ANTIOKSIDANTNIH SVOJSTVA HRANJIVIH MATERIJA // Racionalna prehrana, aditivi u hrani i biostimulansi. - 2014. - br. 6. - str. 36-37;
URL: http://journal-nutrition.ru/ru/article/view?id=283 (datum pristupa: 17.12.2019.). Predstavljamo Vam časopise koje izdaje izdavačka kuća "Akademija prirodne istorije"

antioksidansi (AO)- supstance koje sprečavaju oksidaciju. U živom organizmu vodeći faktor oksidacije je stvaranje slobodnih radikala, stoga se djelovanje antioksidansa u biološkim sustavima razmatra uglavnom sa stanovišta sprječavanja oksidacije organskih tvari slobodnim radikalima.

Trenutno postoji veliki broj različitih metoda za određivanje antioksidansa: fotometrijski, hemijski, elektrohemijski itd. Međutim, mnoge od njih imaju značajne nedostatke koji otežavaju razumevanje i dalju upotrebu rezultata dobijenih ovim metodama. Najčešći nedostaci uključuju sljedeće:

Koriste se veštački ili nekarakteristični za biološke sisteme uslovi za merenje antioksidativnog dejstva. Na primjer, umjesto bioloških reakcija slobodnih radikala, koriste se čisto kemijske redoks reakcije ili se mjeri sposobnost tvari da donira/prihvati elektrone kada je izložena električnoj struji. Rezultati mjerenja dobiveni u takvim uvjetima ne dozvoljavaju nam da kažemo da će ispitivana supstanca ispoljiti isto "antioksidativno" djelovanje u tijelu.
Određivanje antioksidativnog djelovanja vrši se mjerenjem količine akumuliranih oksidacijskih proizvoda (oksidacijski markeri). Dakle, zaista je moguće odrediti količinu antioksidansa u test uzorku, ali se propuštaju vrlo važne informacije o aktivnosti antioksidansa. Zanemarivanje aktivnosti antioksidansa, zauzvrat, može dovesti do značajnih grešaka u određivanju njegove količine, na primjer, za "slabe" antioksidanse koji djeluju sporo, ali dugo.

Općenito, ne postoji standardizacija u području određivanja antioksidansa, što omogućava poređenje rezultata dobivenih različitim metodama.

Hemiluminiscentna metoda je najinformativnija metoda za proučavanje antioksidansa i ima niz značajnih prednosti:

Direktno određivanje antioksidativne aktivnosti- zabilježeno je direktno djelovanje antioksidansa na slobodne radikale. Hemiluminiscentna metoda koristi hemijski sistem stvaranja slobodnih radikala koji proizvodi kontrolni hemiluminiscentni sjaj. Zatim se takvom sistemu dodaje antioksidans koji neutrališe slobodne radikale, što dovodi do supresije kontrolne hemiluminiscencije.
Značajna prednost ovog pristupa je mogućnost upotrebe različitih hemijskih sistema za stvaranje slobodnih radikala, što omogućava dodatno određivanje specifičnosti antioksidansa i lokalizacije njihovog delovanja.
Mjerenje kvantitativnih i kvalitativnih karakteristika antioksidansa- hemiluminiscentna metoda omogućava karakterizaciju bilo kojeg spoja s antioksidativnim učinkom pomoću dva nezavisna indikatora:
- Antioksidativni kapacitet (AOE)- ukupna količina slobodnih radikala koja može neutralizirati spoj sadržan u uzorku određene zapremine.
- Antioksidativna aktivnost (AOA)- brzina neutralizacije slobodnih radikala, tj. broj neutralisanih radikala u jedinici vremena.

Hemiluminiscentna metoda daje važno razumijevanje da se djelovanje antioksidansa mora vrednovati pomoću dva indikatora - kvantitativnog (AOE) i kvalitativnog (AOA).
Sljedeća slika prikazuje ovu poziciju:

Utjecaj različitih antioksidansa na hemiluminiscenciju
(brojevi pored grafikona označavaju koncentraciju antioksidansa):
lijevo - "jaki" antioksidans, desno - "slab" antioksidans.

Antioksidansi se značajno razlikuju po svojoj aktivnosti. Postoje "jaki" antioksidansi, tj. antioksidansi visoke aktivnosti, koji inhibiraju slobodne radikale velikom brzinom i potpuno inhibiraju hemiluminiscenciju. Takvi antioksidansi imaju maksimalan učinak već pri niskim koncentracijama i brzo se troše. S druge strane, postoje „slabi“ antioksidansi, tj. antioksidansi niske aktivnosti, koji malom brzinom inhibiraju slobodne radikale i samo djelomično potiskuju hemiluminiscenciju. Takvi antioksidansi imaju značajan učinak samo u visokim koncentracijama, ali se sporo troše i djeluju dugo.

Hemiluminiscentna metoda se može koristiti za određivanje antioksidativnih parametara:

biološke tečnosti (plazma, pljuvačka, urin);
farmakološki pripravci i biološki aktivni aditivi;
pića i aditivi za hranu;
Kozmetika i proizvodi za njegu;
i sl.

Za primjenu hemiluminiscentne metode za određivanje antioksidansa preporučuje se korištenje sljedeće opreme:

Hemiluminometar Lum-100 - omogućava kontrolu temperature i registraciju hemiluminiscencije 1 uzorka.
Hemiluminometar Lum-1200 - omogućava kontrolu temperature i istovremenu registraciju hemiluminiscencije do 12 uzoraka.

], međutim, definicija antioksidansa kao hemijska jedinjenja ne daje potpunu sliku o zaštitnim svojstvima predmeta koji se proučava: ona su određena ne samo količinom jednog ili drugog antioksidansa, već i aktivnošću svakog od njih. Antioksidativna aktivnost, ili antioksidativna aktivnost, AOA, je konstanta brzine za reakciju antioksidansa sa slobodnim radikalom (kInH). Metoda hemiluminiscencije (CL) omogućava određivanje ukupne količine radikala koje antioksidansi vezuju u uzorku (ukupni antioksidativni kapacitet, TAU), a kada se koristi metoda matematičko modeliranje CL kinetika - također brzina stvaranja i reakcije radikala sa antioksidansima, odnosno AOA [ , , ].

Najčešća modifikacija hemiluminiscentne metode za određivanje ukupnog antioksidativnog kapaciteta zasniva se na upotrebi luminola kao aktivatora hemiluminiscencije [ , , , ]. Uzorak se stavlja u ćeliju hemiluminometra uz dodatak luminola, vodikovog peroksida i jedinjenja sposobnog da generiše radikale kao rezultat spontano propadanje(termoliza), na primjer 2,2'-azobis-(2-amidinopropan) dihidroklorid (ABAP): ABAP → 2R. U prisustvu molekularnog kiseonika, alkil radikal R formira peroksilni radikal ROO : R + O 2 → ROO . Dalje, peroksilni radikal oksidira hemiluminiscentnu sondu luminol (LH 2), a luminol radikal (LH ) nastaje: ROO + LH 2 → ROOH + LH . Iz LH formiranjem intermedijara (luminol hidroperoksid i luminol endoperoksid) nastaje molekul konačnog proizvoda oksidacije luminola, aminoftalne kiseline, u elektronski pobuđenom stanju, koji emituje foton, a kao rezultat toga se opaža hemiluminiscencija. . Intenzitet CL je proporcionalan brzini proizvodnje fotona, koja je zauzvrat proporcionalna stacionarnoj koncentraciji LH u sistemu. U interakciji s radikalima, antioksidansi prekidaju opisani lanac transformacija i sprječavaju stvaranje fotona.

Spojevi podložni termolizi nisu jedini mogući izvor radikala u analizi antioksidativnog kapaciteta uzorka hemiluminiscentnom metodom. Alternative su sistemi ren peroksidaza–vodikov peroksid [ , ], hemin–vodikov peroksid, citokrom With–kardiolipin–vodonik peroksid itd. Šema reakcija oksidacije luminola peroksidazama razmatrana je u radu Cormier et al. .

Kinetičke krive CL za ove sisteme odražavaju dvije faze reakcije: fazu povećanja intenziteta CL i fazu platoa ili postepeno smanjenje luminescencije, kada je intenzitet CL ili konstantan ili polako opada. U radu su opisana dva pristupa mjerenju ukupnog antioksidativnog kapaciteta koji uzimaju u obzir ovu osobinu krivulja. TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) metoda se zasniva na mjerenju latentnog perioda CL τ i mogu se koristiti za određivanje antioksidansa kao što su trolox ili askorbinska kiselina: karakterizira ih visoka vrijednost konstante brzine reakcije s radikalima i zbog toga se mogu nazvati jakim antioksidansima. Tokom latentnog perioda dolazi do njihove potpune oksidacije. TAR metoda (Total Antioxidant Reactivity) mjeri stepen gašenja hemiluminiscencije q na platou ili na maksimumu hemiluminiscentne krivulje: formula , gdje je I intenzitet hemiluminiscencije bez antioksidansa, a I 1 je intenzitet CL u prisustvu antioksidansa. Ova metoda se koristi ako sistem sadrži pretežno slabe antioksidante sa niskim konstantama brzine interakcije sa radikalima - mnogo nižim u poređenju sa luminol konstantom.

Djelovanje antioksidansa karakteriziraju ne samo indikatori τ i q. Kao što se može vidjeti iz [ , ], efekat antioksidanata kao što su mokraćna kiselina u sistemu hemin–H2O2–luminol ili tokoferol, rutina i kvercetina u citokromu With–kardiolipin–H 2 O 2 –luminol, karakteriziran promjenom maksimalne brzine porasta CL ( vmax). Kao što pokazuju rezultati matematičkog modeliranja kinetike, vrijednosti konstanti brzine interakcije ovih antioksidansa s radikalima su blizu vrijednosti luminol konstante, pa se takvi antioksidansi mogu nazvati antioksidansima srednje jačine.

Ako je proučavani materijal, posebno biljne sirovine, sadržavao samo jednu vrstu antioksidansa, onda bi se njihov sadržaj mogao okarakterizirati jednim od tri gore navedena pokazatelja ( τ , q ili vmax). Ali biljne sirovine sadrže mješavinu antioksidansa različite jačine. Da bi riješili ovaj problem, neki autori [ , , , ] koristili su promjenu sume kemiluminiscencije svjetlosti za određeno vrijeme∆S izračunato po formuli , gdje je ∆ S0 i ∆ S S- CL svjetlosne sume za dato vrijeme t u kontrolnim i ispitnim uzorcima. Vrijeme treba biti dovoljno za oksidaciju svih antioksidanata u sistemu, odnosno da CL kriva ispitnog uzorka dostigne nivo CL krive kontrolnog uzorka. Potonje sugerira da istraživači ne samo da bi trebali snimiti svjetlosnu sumu luminiscencije, već i snimiti CL kinetičku krivu dovoljno dugo, što je daleko od uvijek.

Budući da svi mjereni pokazatelji zavise od uređaja i uslova mjerenja, antioksidativni učinak neke supstance u ispitivanom sistemu obično se uspoređuje sa učinkom antioksidansa koji se uzima kao standard, na primjer, Trolox [ , ].

Sistem peroksidaza ren-vodonik peroksid koristili su mnogi autori za analizu ukupnog antioksidativnog kapaciteta biljnog materijala. U radovima [ , ] korišćen je latentni period CL (TRAP metoda) za procenu količine antioksidanata u uzorcima, a u radovima [ , , ] korišćena je površina ispod krive razvoja CL. Međutim, navedeni radovi ne daju jasno obrazloženje za izbor jednog ili drugog parametra za procjenu TAU.

Cilj istraživanja bio je utvrditi kako odnos antioksidansa različitih tipova utiče na TAU, te modificirati metodu hemiluminiscencije na način da se može preciznije odrediti TAU u biljnom materijalu. Da bismo to učinili, postavili smo si nekoliko zadataka. Prvo, uporediti kinetiku CL proučavanih objekata sa kinetikom standardnih antioksidanata tri tipa (jaki, srednji i slabi) kako bi se shvatilo koji tip antioksidansa daje glavni doprinos TAE-u proučavanih objekata. Drugo, izračunati RAE proučavanih objekata mjerenjem smanjenja svjetlosne sume CL pod djelovanjem ovih objekata u poređenju sa djelovanjem antioksidansa, koji daje najveći doprinos TAC-u.

MATERIJALI I METODE

Predmet istraživanja bili su industrijski uzorci plodova gloga, planinskog jasena i divlje ruže proizvođača Krasnogorskleksredstva dd (Rusija), kao i plodovi maline koje su autori sakupljali u Podmoskovskoj oblasti u uslovima prirodnog rasta i sušeni na temperaturi od 60–80 °C dok ne prestanu da izvlače sok i deformacije pritiska.

Reagensi za analizu antioksidativnog kapaciteta hemiluminiscentnom metodom bili su: KH 2 PO 4 , 20 mM puferski rastvor(pH 7,4); peroksidaza iz korijena rena (aktivnost 112 U/mg, M = 44 173,9), 1 mM vodeni rastvor; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindion, hidrazid 3-aminoftalne kiseline, M=177,11), 1 mM vodeni rastvor; vodonik peroksid (H 2 O 2 , M = 34,01), 1 mM vodeni rastvor; rastvori antioksidansa (askorbinska kiselina, kvercetin, tokoferol). Svi reagensi su proizvedeni od strane Sigma Aldrich (SAD).

Uvarci od gloga, planinskog pepela i plodova divlje ruže i infuzija plodova maline pripremljeni su prema metodologiji Državne farmakopeje SSSR-a, navedenoj u općem farmakopejskom članku "Infuzije i dekocije".

Ukupni antioksidativni kapacitet određen je registrovanjem hemiluminiscencije na hemiluminometru Lum-100 (DISoft, Rusija) korišćenjem softvera PowerGraph 3.3. Za određivanje TAU-a u biljnom materijalu, 40 µl luminola u koncentraciji od 1 mM, 40 µl peroksidaze iz hrena u koncentraciji od 0,1 µM, od 10 do 50 µl dekokcije ili infuzije (ovisno o koncentraciji) i fosfatni pufer u količini potrebnoj da se ukupna zapremina uzorka dovede do 1 ml. Kiveta je ugrađena u uređaj i CL je snimljen, posmatrajući pozadinski signal. Nakon 48 s registracije pozadinskog signala, u kivetu je dodano 100 µl H2O2 u koncentraciji od 1 mM, a registracija CL je nastavljena 10 min. Pripremljena su četiri uzorka s različitim koncentracijama svakog biljnog objekta. CL je također zabilježen za otopine askorbinske kiseline, kvercetina i tokoferola u pet različitih koncentracija za svaki od antioksidansa. Nakon toga, TAU uzoraka dekocija i infuzija je ponovo izračunat za kvercetin.

Koncentracije luminola, peroksidaze hrena i vodikovog peroksida odabrane su tako da se u razumnom vremenu (ne duže od 10 min) odredi antioksidativni kapacitet vodenih ekstrakata iz ljekovitog biljnog materijala. Za to vrijeme, krivulje hemiluminiscencije za antioksidanse askorbat i flavonoid kvercetin (glavni antioksidansi biljnog materijala) dostigle su plato, što je ukazivalo na potpuno uništenje antioksidansa u sistemu. Razblaženja proučavanih uzoraka i koncentracije rastvora standardnih antioksidanata (navedene u natpisima slika) odabrane su na način da su sve CL kinetičke krive merene pri istoj osetljivosti instrumenta.

Antioksidativni kapacitet izračunat je iz promjene površine (∆ S) ispod kinetičke krivulje hemiluminiscencije (svjetlosne sume) uz dodatak supstance koja sadrži antioksidans. Za ovo smo računali S0 za sistem bez antioksidansa i od njega oduzeti površinu S S karakterizira sistem u koji je dodat antioksidans. ∆ vrijednost S zavisi od osetljivosti hemiluminometra i uslova merenja. Odnos ∆ S/C V(gde C- koncentracija proučavanog biološkog materijala u kiveti, g/l, i V- zapremina kivete, l) izražava antioksidativni kapacitet 1 g ispitivanog materijala, odnosno biljnog materijala.

Antioksidativni kapacitet ∆ S A rastvor standardnog antioksidansa, kao što je kvercetin, stavljen u istu zapreminu reakcione smeše. Odnos ∆ S A /C A V(gde C A- težinska koncentracija antioksidansa u kiveti, g/l) izražava antioksidativni kapacitet 1 g antioksidansa.

Za svaki od standardnih antioksidansa zabilježen je signal iz otopina nekoliko koncentracija kako bi se osiguralo da se proračuni izvode u granicama linearnog odnosa i da su dobiveni rezultati ponovljivi. Zaista, dobijena je linearna zavisnost (∆ S A = k A C A) signal iz koncentracije koja je izračunata stehiometrijski koeficijent k A. Prema Fišerovom kriteriju, dobivene vrijednosti za standardne antioksidante k A statistički značajno sa vjerovatnoćom od 0,975. Zatim je zabilježen signal iz četiri koncentracije za svaki od četiri uzorka biljaka i za sve uzorke koje smo dobili linearna zavisnost signal koncentracije (∆ S = k C), koji je korišten za izračunavanje stehiometrijskog koeficijenta k. Sa vjerovatnoćom od 0,975 (Fischerov test), k vrijednosti dobijene za uzorke biljaka su statistički značajne. Ukupni antioksidativni kapacitet biljnog materijala u odnosu na masu standardnog antioksidansa (mg%) utvrđen je pomoću formule .

Vrijednosti su predstavljene kao aritmetička sredina ± standardna devijacija (M ± δ) na p

REZULTATI ISTRAŽIVANJA

Proučavanje kinetike hemiluminiscencije u prisustvu natrijum askorbata (slika 1. Uticaj natrijum askorbata na kinetiku hemiluminiscencije" data-note="Koncentracije komponenti sistema: luminol - 40 µM, peroksidaza rena - 4 nM, vodonik peroksid - 0µ10. Krivulje: 1 - kontrolni uzorak; 2 - 0,05 µM; 3 - 0,10 µM; 4 - 0,15 µM; 5 - 0,2 µM; 6 - 0,25 µM natrijum askorbat. Antioksidans se karakteriše latentnim periodom skoro potpunog sušenja kada je CL pritisnut. je proporcionalna količini antioksidansa u sistemu.Istovremeno se ne menja ni nagib CL krive ni intenzitet CL na platou.To je zbog činjenice da je askorbinska kiselina jak antioksidans koji presreće sve radikale formirani u sistemu, uključujući luminol radikale, a CL se ne razvija dok se sav askorbat ne oksidira.

Drugi istraživači su također pokazali da su rezultati hemijska analiza i TAU vrijednost određena hemiluminiscentnom metodom često se ne podudaraju. U radu je ukupan antioksidativni kapacitet određen u sistemu peroksidaza–luminol–vodonik peroksid korelirao sa sadržajem jedinjenja triterpena. Međutim, u radu istih autora, u kojem je druga biljka bila predmet proučavanja, nije uočena korelacija između TAU-a i sadržaja bilo koje grupe supstanci, uključujući flavonoide.

Ova odstupanja su povezana sa najmanje tri faktora. Prvo, važna je aktivnost antioksidansa, odnosno brzina njihove interakcije s radikalima, koja je različita za različite antioksidanse koji čine biljni uzorak. Prema Izmailovu, konstante brzine odgovarajućih reakcija za meksidol, tokoferol i kvercetin koreliraju kao 0,04:2:60. Drugo, svaki molekul antioksidansa, ulazi u hemijska reakcija, može presresti različit broj radikala. Prema radu, kvercetin, mokraćna i askorbinska kiselina su presrele 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 i 0,5 ± 0,2 radikala po reagovanom molekulu antioksidansa, respektivno (korišćen je sistem hemin–H 2 O 2 – luminol). Treće, na rezultate istraživanja moglo bi uticati prisustvo aktivnosti peroksidaze u samim biljnim uzorcima, kao iu radu, kao i prisustvo kalcijuma u uzorcima, koji, kako je prikazano u radu, može povećati aktivnost peroksidaze hrena pod određenim uslovima. To obično uzrokuje veći intenzitet CL na platou nego na kontrolnim krivuljama, što, međutim, nismo uočili.

Prvi faktor oštro ograničava upotrebu takvog parametra kao što je promjena svjetlosne sume, budući da bi vrijeme mjerenja hemiluminiscencije trebalo biti duže od vremena potrošnje svih antioksidansa u test uzorku. Približavanje ovog trenutka može se procijeniti samo mjerenjem kinetike hemiluminiscencije. Osim toga, doprinos slabih antioksidanata OAE je oštro potcijenjen, jer je vrijeme njihove potpune oksidacije višestruko duže od prihvatljivog vremena mjerenja (10-20 min).

Još veći značaj ima stehiometrijski koeficijent antioksidansa. Broj radikala n, presretnuti njime, jednako je , gdje ρ - stehiometrijski koeficijent, i ∆ m- promjena koncentracije antioksidansa tokom mjerenja, u našem slučaju - početne koncentracije ispitivane supstance u uzorku za ispitivanje.

Razlika u zbiru svjetlosti sjaja u odsustvu antioksidansa iu njegovom prisustvu proporcionalna je n. Ukupan broj presretnutih radikala je , gdje ρ i je stehiometrijski koeficijent određenog antioksidansa, i m i- njegovu koncentraciju tokom mjerenja. Ukupan broj presretnutih radikala očito nije jednak ukupnoj količini antioksidanata, budući da su koeficijenti ρ i ne samo da nisu jednaki jedinici, već se i značajno razlikuju za različite antioksidanse.

Vrijednost n proporcionalan je razlici u svjetlosnim sumama izmjerenim tokom određenog vremena između uzorka koji sadrži antioksidans i kontrolnog uzorka koji ne sadrži antioksidanse: S = k n, gdje k- konstanta koeficijenta pod istim uslovima mjerenja.

Metoda razmatrana u članku omogućava određivanje ukupnog antioksidativnog kapaciteta, dok hemijska analiza omogućava određivanje ukupnog sadržaja antioksidansa u proizvodu. Stoga se čini da je metoda hemiluminiscencije informativnija od kemijskih analiza.

Uslove koje smo odabrali za procjenu ukupnog antioksidativnog kapaciteta biljnih sirovina snimanjem kinetike hemiluminiscencije u sistemu koji se sastoji od peroksidaze hrena, vodonik peroksida i luminola (koncentracije komponenti su 4 nM, 100 μM i 40 μM, respektivno; 20 mM fosfatni pufer, pH 7,4), osigurao je oksidaciju jakih antioksidansa (askorbinska kiselina) i umjerenih antioksidanata (kvercetin) za 10 min. Ovo trajanje mjerenja je pogodno i osigurava potreban kvalitet mjerenja.

Analiza kinetike kemiluminiscencije pokazala je da su u proučavanim objektima (dekoti od vrane, divlje ruže, plodova gloga i plodova maline) glavni antioksidansi antioksidansi srednje jačine, uključujući flavonoide, i antioksidansi slabe snage (tokoferol i dr. ). Na osnovu smanjenja hemiluminiscencije svjetlosne sume izračunat je ukupni antioksidativni kapacitet za proučavane objekte. Poređenje dobijenih TAU vrednosti sa rezultatima hemijske analize pokazalo je da se proizvodi koji sadrže istu količinu antioksidanata u različitim omjerima mogu razlikovati po svojoj sposobnosti da efikasno zaštite organizam od štetnih efekata slobodni radikali. Opisana tehnika je obećavajuća za proučavanje biljnih objekata koji sadrže mješavinu različitih antioksidansa. Istovremeno ga karakterizira jednostavnost i niska cijena istraživanja. Kombinacija mjerenja kinetike hemiluminiscencije s matematičkim modeliranjem reakcija omogućit će ne samo automatizaciju procesa određivanja TAU-a, već i određivanje doprinosa pojedinih grupa antioksidanata indikatoru.

diplomski rad

1.4 Metode istraživanja antioksidansa

antioksidativna aktivnost se klasifikuju: prema metodama registracije ispoljene AOA (volumetrijska, fotometrijska, hemiluminiscentna, fluorescentna, elektrohemijska); prema vrsti izvora oksidacije; prema vrsti oksidiranog spoja; prema metodi mjerenja oksidiranog spoja.

Međutim, najpoznatije metode za određivanje antioksidativne aktivnosti su:

1 TEAC (trolox ekvivalentni antioksidativni kapacitet): metoda se zasniva na sljedećoj reakciji:

Metmioglobin + H 2 O 2 > Ferrylglobin + ABTS > ABTS * + AO.

Metoda ekvivalencije Troloxa (TEAC) zasniva se na sposobnosti antioksidansa da smanje katione 2,2-azinobis radikala (ABTS) i na taj način inhibiraju apsorpciju u dijelu spektra duge talasne dužine (600 nm). Značajan nedostatak metode je dvostepena reakcija dobivanja radikala. Ovo produžava vrijeme analize i može povećati rasipanje rezultata, uprkos činjenici da se za analizu koristi standardizirani set reagensa.

2 FRAP (antioksidativna moć redukcije željeza): metoda se zasniva na sljedećoj reakciji:

Fe(III)-Tripiridiltriazin+AO>Fe(II)-Tripiridiltriazin.

Kapacitet smanjenja gvožđa/antioksidativni kapacitet (FRAP). Ovdje se koristi reakcija redukcije Fe(III)-tripiridiltriazina u Fe(II)-tripiridiltriazin. Međutim, ova metoda ne može odrediti neke antioksidanse, kao što je glutation. Ova metoda omogućava direktno određivanje antioksidansa niske molekularne težine. Pri niskom pH, redukcija Fe(III) tripiridiltriazinskog kompleksa u Fe(II) kompleks je praćena pojavom intenzivne plave boje. Mjerenja se zasnivaju na sposobnosti antioksidansa da potisnu oksidativni učinak reakcionih čestica nastalih u reakcijskoj smjesi. Ova metoda je jednostavna, brza i jeftina u izvođenju.

3 ORAC (kapacitet apsorpcije radikala kisika): metoda se zasniva na sljedećoj reakciji:

Fe (II) + H 2 O 2 > Fe (III) + OH * + AO> OH * + Luminol.

Određivanje sposobnosti apsorpcije kisikovih radikala (ORAC). U ovoj metodi se bilježi fluorescencija supstrata (fikoeritrin ili fluorescein), koja nastaje kao rezultat njegove interakcije sa ROS. Ako u testnom uzorku postoje antioksidansi, tada se opaža smanjenje fluorescencije u odnosu na kontrolni uzorak. Ovu metodu je prvobitno razvio dr. Guohua Cao na Nacionalnom institutu za starenje 1992. Godine 1996. Dr. Cao se pridružio dr. Ronaldu Pryeru u zajedničkoj grupi u USDA istraživačkom centru za starenje, gdje je bila poluautomatska metoda. razvijen.

4 TRAP (ukupni parametar antioksidansa za hvatanje radikala): metoda se zasniva na sljedećoj reakciji:

AAPH+AO>AAPH* + PL (PE).

Ova metoda koristi sposobnost antioksidansa da interaguju sa peroksil radikalom 2,2-azobis(2-amidinopropan) dihidrokloridom (AAPH). TRAP modifikacije se sastoje od metoda za registraciju analitičkog signala. Najčešće, u završnoj fazi analize, AAPH peroksi radikal stupa u interakciju sa luminiscentnim (luminol), fluorescentnim (dihlorofluorescein diacetat, DCFH-DA) ili drugim optički aktivnim supstratom.

Derivat vitamina E rastvorljiv u vodi Trolox (6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametilkroman-2-karboksi kiselina) koristi se kao standard za TEAC, ORAC i TRAP metode.

U posljednje vrijeme, za procjenu antioksidativne aktivnosti, poraslo je interesovanje za upotrebu elektrohemijske metode. Ove metode su vrlo osjetljive i brze analize.

Procjena antioksidativne aktivnosti nekih prehrambenih proizvoda izvedeno metodom potenciometrije zasnovanom na korišćenju svojstava antioksidativnih supstanci da učestvuju u redoks reakcijama zbog enol (-OH) i sulfhidril (-SH) grupa.

Određivanje antioksidativnih svojstava rastvora zasniva se na hemijska interakcija antioksidansi sa posredničkim sistemom, što dovodi do promjene njegovog redoks potencijala. Elektrohemijska ćelija je kontejner koji sadrži rastvor K-Na-fosfatnog pufera, posrednički sistem Fe(III)/Fe(II) i kompleksnu elektrodu pre merenja redoks potencijala. Antioksidativna aktivnost se procjenjuje u g-eq/l.

Amperometrijska metoda za određivanje antioksidativne aktivnosti zasniva se na mjerenju električna struja nastaje oksidacijom ispitivane tvari na površini radne elektrode koja je pod određenim potencijalom. Osjetljivost amperometrijske metode određena je i prirodom radne elektrode i potencijalom koji se na nju primjenjuje. Granica detekcije amperometrijskog detektora polifenola, flavonoida na nivou nano-pikograma, pri tako niskim koncentracijama, manja je vjerovatnoća međusobnog utjecaja različitih antioksidanata u njihovom zajedničkom prisustvu, a posebno manifestacija fenomena sinergizma . Nedostaci metode uključuju njenu specifičnost: pod ovim uvjetima antioksidansi koji su sami oksidirani ili reducirani u području potencijala elektroredukcije kisika ne mogu se analizirati. Prednosti metode uključuju njenu brzinu, prostatu i osjetljivost.

Metoda galvanostatske kulometrije pomoću elektrogenerisanih oksidanata - metoda je primenljiva na analizu antioksidanata rastvorljivih u mastima.

Razvijene su različite metode za određivanje askorbinske kiseline:

amperometrijska metoda koja koristi aluminijsku elektrodu modificiranu filmom nikl(II) heksacijanoferata jednostavnom metodom uranjanja u otopinu;

metoda za spektrofotometrijsko i vizuelno određivanje askorbinske kiseline u čvrstoj fazi pomoću kserogela silicijumske kiseline modifikovanog Wawelovim reagensom i bakrom (II) kao indikatorskim prahom;

hemiluminiscentno određivanje askorbinske kiseline može se provesti metodom protočne injekcije prema hemiluminiscentnoj reakciji rodamina B sa cerijumom (IV) u mediju sumporne kiseline.

određivanje askorbinske kiseline u rasponu od 10 -8 -10 -3 g/cm 3 anodnom voltametrijom u vodenim i vodeno-organskim medijima.

Najčešća je FRAP metoda, jer je ekspresna, visoko osjetljiva. U proteklih nekoliko decenija razvijen je veliki broj varijeteta metoda za određivanje antioksidativne aktivnosti FRAP metodom (tabela 1).

Tabela 1 Razvoj FRAP metode i njena primjena za određivanje antioksidativne aktivnosti različitih objekata

	Objekti analize	Bilješke
	krvna plazma	t=4min. Proučavana je stehiometrija reakcije i aditivnost.
	Čaj, vino	Određivanje AOA zbog polifenola
		Uspoređuju se AOA vrijednosti različitih vrsta čaja
Pulido, Bravo, Saura-Calixto	Modelska rješenja	t=30min. Otkriven je uticaj nevodenog rastvarača
	Biljke
	krv, tkivo	PIA metoda. Provjeren je uticaj stranih materija.
Firuzi, Lacanna, Petrucci e.a.	Modelska rješenja	Proučavana je osjetljivost određivanja različitih AO u funkciji njihove strukture i redoks potencijala.
Katalinić, Miloš,	Razna vina
Temerdašev, Tsyupko i drugi.	Model mješavine
Loginova, Konovalova	Lijekovi. Pripreme	metoda ispitivanja
Temerdašev, Tsyupko i drugi.	Crvena suva vina	Korelacija AOA sa ostalim pokazateljima kvaliteta vina
Tabela 1 se nastavlja
	Model mješavine	Osetljivost određivanja različitih AO
Veršinjin, Vlasova, Tsyupko	Model mješavine	Otkrivena je neaditivnost signala s nedostatkom oksidacijskog sredstva
Anisimović, Deineka i drugi.	Modelska rješenja	Predloženi su kinetički parametri za procjenu AOA.

Napomene: konvencionalno označeno: PIA-flow-injection analiza, TPTZ-tripiridiltriazin, DIP-2,2, -dipiridil, PHEN-o-fenantrolin, DPA-piridindikarboksilna kiselina, FZ-ferozin, AA-askorbinska kiselina, CT-katehol, t - vrijeme ekspozicije, min.

Interakcija između proteina i polielektrolita u vodenim otopinama

Za karakterizaciju proteinsko-polielektrolitnih kompleksa koriste se različite metode analize. Instrumentalne metode daju informacije o strukturnim i optičkim svojstvima, kao i određuju dinamiku i prirodu PEC vezivanja...

Utjecaj spojeva d-metala na brzinu disocijacije molekula vode u bipolarnoj membrani

U procesu sinteze novih BPM-a veliku pažnju treba posvetiti proučavanju svojstava dobijenih uzoraka za kasniji izbor uslova sinteze koji obezbeđuju poboljšanje elektrohemijskih karakteristika sintetizovanih membrana...

Dizajnerske droge i sintetički kanabinoidi

Detekcija sintetičkih kanabinoida u biljnim mješavinama može se provesti raznim fizičko-hemijskim metodama, kao što su plinska hromatografija-masena spektrometrija, plinska, tankoslojna i tečna hromatografija visokih performansi...

Razvoj metode za određivanje flavonoida u ljekovitom biljnom materijalu

Sinteza i farmakološka svojstva kinolinona-2

Predmet istraživanja: Kinolinon-2. Metoda istraživanja: Pomoću kompjuterskog programa "Marvin JS" kreirana je struktura supstance. Zatim je poslata na sajt "http://www.way2drug.com/PASSOnline/predict.php" radi dalje istrage...

Termospektralna metoda za proučavanje produkata isparavanja epoksidnog polimera

Tehnologija za dobijanje visoko prečišćenog hitozana iz ljuske rakova

Određivanje molekulske mase hitozana Molekularna težina hitozana određena je viskozometrijski prema standardnoj proceduri. Rastvori koncentracije 0,05 i 0,5 g/dl pripremljeni su otapanjem izvaganog dijela polimernog praha u acetatnom puferu (0...

Fizičko-geografske karakteristike teritorije parka prirode

Ključne riječi

slobodni radikal/antioksidans/ antioksidativno djelovanje / ukupni antioksidativni kapacitet / hemiluminiscencija/ luminol / slobodni radikal / antioksidans / antioksidativna aktivnost / ukupni antioksidativni kapacitet / hemiluminiscencija / luminol

anotacija naučni članak iz hemijskih nauka, autor naučnog članka - Georgij Konstantinovič Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Ljekoviti biljni materijali su jedan od izvora antioksidansa za ljudski organizam. Među metodama za određivanje sadržaja antioksidansa u biljnim objektima rasprostranjena je metoda hemiluminiscentne analize. U ovom radu korišćen je za procenu ukupni antioksidativni kapacitet(OAU) dekocije plodova vrane, divlje ruže i gloga i infuzija plodova maline. U eksperimentu je zabilježena kinetika hemiluminiscencija u sistemu koji se sastoji od peroksidaze hrena, vodonik peroksida i luminola. Koncentracije i zapremine komponenti sistema u uzorku odabrane su tako da su jaki antioksidansi (askorbinska kiselina) i umereno jaki antioksidansi (kvercetin) potpuno oksidovani tokom merenja (10 min). Predložena je i opravdana metoda za izračunavanje TAU-a na osnovu promjene svjetlosne sume. hemiluminiscencija u prisustvu biljnih uzoraka. Kinetička analiza hemiluminiscencija pokazalo je da u proučavanim objektima prevladavaju antioksidansi srednje jačine, uključujući flavonoide, i slabi antioksidansi (tokoferol i dr.). Poređenje izračunatih TAU vrijednosti za proučavane objekte i podataka njihove kemijske analize pokazalo je da se proizvodi koji sadrže istu količinu antioksidansa s različitim omjerima po vrstama mogu razlikovati po svojoj sposobnosti zaštite organizma od štetnog djelovanja slobodnih radikala. Opisana tehnika je obećavajuća za proučavanje biljnih objekata koji sadrže mješavinu antioksidansa različitih vrsta.

Povezane teme naučni radovi iz hemijskih nauka, autor naučnog rada - Georgij Konstantinovič Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

2016 / Georgiy Vladimirov, Sergunova E.V., Izmaylov D.Yu., Vladimirov Yu.A.
Određivanje antioksidansa aktiviranom hemiluminiscencijom pomoću 2,2"-azo-bis(2-amidinopropana)
2012 / Aleksejev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.
Antioksidativno djelovanje dihidrokvercetina i rutina u reakcijama peroksidaze koje katalizira citokrom c
2008 / Demin E.M., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.
Procjena oksidativnog i antioksidativnog kapaciteta bioloških supstrata kemiluminiscencijom izazvanom Fentonovom reakcijom
2016 / Piskarev Igor Mihajlovič, I.P. Ivanova
Određivanje sadržaja lipohidroperoksida u lipoproteinima krvnog seruma pomoću mikroperoksidaza-luminol sistema
2011 / Teselkin Jurij Olegovič, Babenkova Irina Vladimirovna
Metode za proučavanje antioksidansa
2004 / Khasanov V. V., Ryzhova G. L., Maltseva E. V.
Antioksidativno djelovanje biljaka koje se koriste u etnomedicini Tuve
2012 / Chekhani N.R., Teselkin Yu.O., Pavlova L.A., Kozin S.V., Lyubitsky O.B.
Proučavanje antioksidativnih svojstava Fosprenila u različitim biološkim test sistemima
2017 / A. V. Sanin, A. N. Narovlyansky, A. V. Pronin, T. N. Kozhevnikova, V. Yu. Sanina, A. D. Agafonova
Utjecaj različitih doza polikloriranih bifenila na stanje spontane i imunoglobulinom izazvane hemiluminiscencije pune krvi zavisne od luminola
2016 / Gabdulkhakova I.R., Kayumova A.F., Samohodova O.V.
Evaluacija sistema antioksidativne zaštite lipidne peroksidacije kod djece sa esencijalnom arterijskom hipertenzijom spektrofotometrijom i hemiluminiscencijom
2014 / Natjaganova Larisa Viktorovna, Gavrilova Oksana Aleksandrovna, Kolesnikova Larisa Romanovna

Hemiluminiscentno određivanje ukupnog antioksidativnog kapaciteta u ljekovitom biljnom materijalu

Ljekoviti biljni materijal jedan je od izvora antioksidansa za ljudski organizam. Hemiluminiscencijska analiza je jedna od uobičajenih metoda za određivanje sadržaja antioksidansa u biljnim materijalima. U našem radu hemiluminiscentnom analizom je određivan ukupni antioksidativni kapacitet (TAC) voćnih dekocija planinskog pepela, ruže i gloga, kao i infuzije plodova maline. Eksperimentima je utvrđena kinetika hemiluminiscencije sistema koji se sastoji od peroksidaze hrena, vodonik peroksida i luminola. Koncentracije i zapremine komponenti sistema odabrane su tako da su jaki antioksidansi (askorbinska kiselina) i antioksidansi prosečne snage (kvercetin) potpuno oksidovani tokom merenja (10 minuta). Predložena je i utemeljena metoda za proračun TAC-a zasnovana na promjenama hemiluminiscencije svjetlosne sume u prisustvu biljnih uzoraka. Analiza kinetike hemiluminiscencije pokazala je da u proučavanim objektima dominiraju antioksidansi prosječne snage, uključujući flavonoide i slabe antioksidante (tokoferol i drugi). Poređenje izračunatih TAC vrijednosti za objekte koji se proučavaju i podataka njihove kemijske analize pokazalo je da proizvodi koji sadrže istu količinu antioksidansa s različitim omjerima antioksidanata po vrstama mogu varirati u svojoj sposobnosti da zaštite tijelo od štetnog djelovanja slobodnih radikala. . Opisana tehnika je obećavajuća za proučavanje biljnih objekata koji sadrže mješavinu različitih vrsta antioksidansa.

Tekst naučnog rada na temu "Kemiluminiscentna metoda za određivanje ukupnog antioksidativnog kapaciteta u ljekovitom biljnom materijalu"

hemiluminiscentna metoda za određivanje ukupnog antioksidativnog kapaciteta u ljekovitom biljnom materijalu

G. K. Vladimirov1^, E. V. Sergunova2, D. Yu. Izmailov1, Yu. A. Vladimirov1

1 Katedra za medicinsku biofiziku, Fakultet fundamentalne medicine, Moskva Državni univerzitet nazvan po M.V. Lomonosovu, Moskva

2 Katedra za farmakognoziju, Farmaceutski fakultet,

I. M. Sechenov Prvi moskovski državni medicinski univerzitet, Moskva

Ljekoviti biljni materijali su jedan od izvora antioksidansa za ljudski organizam. Među metodama za određivanje sadržaja antioksidansa u biljnim objektima rasprostranjena je metoda hemiluminiscentne analize. U ovom radu korišćen je za procenu ukupnog antioksidativnog kapaciteta (TOA) dekocija plodova vrane, divlje ruže i gloga i infuzije plodova maline. U eksperimentu je zabilježena kinetika hemiluminiscencije u sistemu koji se sastoji od peroksidaze hrena, vodonik peroksida i luminola. Koncentracije i zapremine komponenti sistema u uzorku odabrane su tako da su jaki antioksidansi (askorbinska kiselina) i umereno jaki antioksidansi (kvercetin) potpuno oksidovani tokom merenja (10 min). Predložena je i opravdana metoda za izračunavanje RAE na osnovu promjene kemiluminiscencije svjetlosne sume u prisustvu biljnih uzoraka. Analiza kinetike hemiluminiscencije pokazala je da u ispitivanim objektima prevladavaju umjereno jaki antioksidansi, uključujući flavonoide, i slabi antioksidansi (tokoferol i dr.). Poređenje izračunatih TAU vrijednosti za proučavane objekte i podataka njihove kemijske analize pokazalo je da se proizvodi koji sadrže istu količinu antioksidansa s različitim omjerima po vrstama mogu razlikovati po svojoj sposobnosti zaštite organizma od štetnog djelovanja slobodnih radikala. Opisana tehnika je obećavajuća za proučavanje biljnih objekata koji sadrže mješavinu antioksidansa različitih vrsta.

Ključne riječi: slobodni radikal, antioksidans, antioksidativna aktivnost, ukupni antioksidativni kapacitet, hemiluminiscencija, luminol

Finansiranje: rad je podržao Rus naučni fond, grant br. 14-15-00375.

Ex3 Prepisku treba adresirati: Georgij Konstantinovič Vladimirov

119192, Moskva, Lomonosovski pr-t, 31, zgrada 5; [email protected]

Članak primljen: 10.03.2016. Članak prihvaćen za objavljivanje: 18.03.2016.

hemiluminiscentno određivanje ukupnog antioksidativnog kapaciteta u ljekovitom biljnom materijalu

1 Katedra za medicinsku biofiziku, Fakultet fundamentalne medicine, Moskovski državni univerzitet Lomonosov, Moskva, Rusija

2 Katedra za farmakognoziju, Farmaceutski fakultet,

Prvi Moskovski državni medicinski univerzitet Sečenov, Moskva, Rusija

Ključne riječi: slobodni radikal, antioksidans, antioksidativna aktivnost, ukupni antioksidativni kapacitet, hemiluminiscencija, luminol

Finansiranje: ovaj rad je podržan od strane Ruske naučne fondacije, grant br. 14-15-00375.

Priznanja: autori zahvaljuju Andreju Aleksejevu sa Moskovskog državnog univerziteta Lomonosov na pomoći u sprovođenju eksperimenta. Prepisku treba obratiti: George Vladimirov

Lomonosovskiy prospekt, d. 31, k. 5, Moskva, Rusija, 119192; [email protected] Primljeno: 03.10.2016. Prihvaćeno: 18.03.2016.

Slobodni radikali koji nastaju u tijelu narušavaju strukturu ćelijskih membrana, što zauzvrat dovodi do razvoja različitih patoloških stanja. Destruktivni oksidativni efekat radikala sprečava antioksidativni odbrambeni sistem organizma, u kojem važnu ulogu imaju jedinjenja male molekularne težine – hvatači radikala (zamke). Jedan od izvora antioksidansa su ljekovite biljne sirovine, kao i preparati na njihovoj osnovi, čije proučavanje antioksidativnog potencijala pomaže u povećanju njihovog preventivnog i terapijskog djelovanja.

U radovima se razmatraju glavne metode za određivanje antioksidanata, međutim, definicija antioksidanata kao hemijskih spojeva ne daje potpunu sliku o zaštitnim svojstvima predmeta koji se proučava: ona se određuju ne samo količinom jednog ili drugog antioksidansa. , ali i aktivnošću svakog od njih. Antioksidativna aktivnost, ili antioksidativna aktivnost, AOA, je konstanta brzine za reakciju antioksidansa sa slobodnim radikalom (kInH). Metoda hemiluminiscencije (CL) omogućava da se odredi ukupna količina radikala koje antioksidansi vezuju u uzorku (ukupni antioksidativni kapacitet, TAU), a kada se koristi metoda matematičkog modeliranja kinetike CL, i brzina formiranja i reakcije radikali sa antioksidansima, tj. AOA.

Najčešća modifikacija hemiluminiscentne metode za određivanje ukupnog antioksidativnog kapaciteta zasniva se na upotrebi luminola kao aktivatora hemiluminiscencije. U kivetu hemiluminometra se stavlja uzorak uz dodatak luminola, vodikovog peroksida i jedinjenja sposobnog da generiše radikale kao rezultat spontane razgradnje (termolize), na primjer 2,2"-azobis-(2-amidinopropan). ) dihidroklorid (ABAP):

U prisustvu molekularnog kiseonika, alkil radikal R^ formira peroksilni radikal ROO^:

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv Od LH, formiranjem međusupstanci (luminol hidroperoksid i luminol endoperoksid), nastaje molekula krajnjeg proizvoda oksidacije luminola, aminoftalne kiseline, u elektronski pobuđenom stanju, koja emituje foton , i kao rezultat, uočena je hemiluminiscencija. Intenzitet CL je proporcionalan brzini proizvodnje fotona, koja je zauzvrat proporcionalna stacionarnoj koncentraciji LH u sistemu. U interakciji s radikalima, antioksidansi prekidaju opisani lanac transformacija i sprječavaju stvaranje fotona.

Spojevi podložni termolizi nisu jedini mogući izvor radikala u analizi antioksidativnog kapaciteta uzorka hemiluminiscentnom metodom. Alternative su peroksidaza hrena-vodonik peroksid, hemin-vodonik peroksid, citokrom c-kardiolipin-vodonik peroksid itd. Šema reakcija oksidacije luminola peroksidazama razmatrana je u radu Cormier et al. .

CL kinetičke krive za ove sisteme odražavaju dva stupnja reakcije: fazu povećanja intenziteta CL i fazu platoa ili postepenog smanjenja luminiscencije, kada

Intenzitet CL je ili konstantan ili se polako smanjuje. U radu su opisana dva pristupa mjerenju ukupnog antioksidativnog kapaciteta koji uzimaju u obzir ovu osobinu krivulja. TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) metoda se zasniva na mjerenju CL latencije t i može se koristiti za određivanje antioksidansa kao što su troloks ili askorbinska kiselina: karakterizira ih visoka konstanta brzine reakcije s radikalima i iz tog razloga se mogu koristiti nazivaju jakim antioksidansima. Tokom latentnog perioda dolazi do njihove potpune oksidacije. TAR metoda (totalna antioksidativna reaktivnost) mjeri stepen gašenja hemiluminiscencije q na platou ili na maksimumu hemiluminiscentne krivulje:

gdje je I intenzitet hemiluminiscencije bez antioksidansa, a 11 je intenzitet CL u prisustvu antioksidansa. Ova metoda se koristi ako sistem sadrži pretežno slabe antioksidante sa niskim konstantama brzine interakcije sa radikalima - mnogo nižim u poređenju sa luminol konstantom.

Djelovanje antioksidansa karakteriziraju ne samo indikatori t i c. Kao što se može vidjeti iz radova, djelovanje antioksidanata poput mokraćne kiseline u sistemu hemin-H202-luminol ili tokoferola, rutina i kvercetina u sistemu citokroma c-kardiolipin-H202-luminol karakteriše promjena maksimalne brzine. porasta CL (utx). Kao što pokazuju rezultati matematičkog modeliranja kinetike, vrijednosti konstanti brzine interakcije ovih antioksidansa s radikalima su blizu vrijednosti luminol konstante, pa se takvi antioksidansi mogu nazvati antioksidansima srednje jačine.

Ako je proučavani materijal, posebno biljne sirovine, sadržavao samo jednu vrstu antioksidansa, onda bi se njihov sadržaj mogao okarakterizirati jednim od tri navedena indikatora (m, q ili V). Ali biljne sirovine sadrže mješavinu antioksidansa različite jačine. Da bi riješili ovaj problem, neki autori su koristili promjenu svjetlosne sume hemiluminiscencije tokom određenog DE vremena, izračunatog po formuli

DE = DE0 - DE,

gdje su DE0 i DE5 CL svjetlosne sume za dato vrijeme? u kontrolnim i ispitnim uzorcima. Vrijeme treba biti dovoljno za oksidaciju svih antioksidanata u sistemu, odnosno da CL kriva ispitnog uzorka dostigne nivo CL krive kontrolnog uzorka. Potonje sugerira da istraživači ne samo da bi trebali snimiti svjetlosnu sumu luminiscencije, već i snimiti CL kinetičku krivu dovoljno dugo, što je daleko od uvijek.

Budući da svi izmjereni pokazatelji zavise od instrumenta i uslova mjerenja, antioksidativni efekat supstance u sistemu koji se proučava obično se poredi sa efektom antioksidansa koji se uzima kao standard, kao što je Trolox.

Sistem peroksidaza ren-vodonik peroksid koristili su mnogi autori za analizu ukupnog antioksidativnog kapaciteta biljnog materijala. U radovima je za procjenu količine antioksidansa u uzorcima korišćen latentni period CL (TRAP metoda), au radu je korišćena površina ispod krivulje razvoja CL. Međutim, ovi radovi ne daju jasno opravdanje

izbor jednog ili drugog parametra za procjenu OAU.

Cilj istraživanja bio je utvrditi kako odnos antioksidansa različitih tipova utiče na TAU, te modificirati metodu hemiluminiscencije na način da se može preciznije odrediti TAU u biljnom materijalu. Da bismo to učinili, postavili smo si nekoliko zadataka. Prvo, uporediti kinetiku CL proučavanih objekata sa kinetikom standardnih antioksidanata tri tipa (jaki, srednji i slabi) kako bi se shvatilo koji tip antioksidansa daje glavni doprinos TAE-u proučavanih objekata. Drugo, izračunati TAE proučavanih objekata mjerenjem smanjenja svjetlosne sume CL pod djelovanjem ovih objekata u poređenju sa djelovanjem antioksidansa, koji daje najveći doprinos TAE.

MATERIJALI I METODE

Predmet istraživanja bili su industrijski uzorci plodova gloga, planinskog pepela i divlje ruže koje proizvodi Krasnogorskleksredstva AD (Rusija), kao i plodovi maline koje su autori sakupili u Moskovskoj oblasti u prirodnim uslovima uzgoja i sušeni na temperaturi od 60°C. 80°C dok ne prestanu da izoluju sok i deformacije pritiska.

Reagensi za analizu antioksidativnog kapaciteta hemiluminiscentnom metodom su: KH2PO4, 20 mM puferski rastvor (pH 7,4); peroksidaza iz korijena rena (aktivnost 112 U/mg, M = 44 173,9), 1 mM vodeni rastvor; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindion, hidrazid 3-aminoftalne kiseline, M=177,11), 1 mM vodeni rastvor; vodonik peroksid (H2O2, M = 34,01), 1 mM vodeni rastvor; rastvori antioksidansa (askorbinska kiselina, kvercetin, tokoferol). Svi reagensi su proizvedeni od strane Sigma Aldrich (SAD).

Ukupni antioksidativni kapacitet određen je snimanjem hemiluminiscencije na hemiluminometru Lum-100 (DISoft, Rusija) korišćenjem softvera PowerGraph 3.3. Za određivanje TAU-a u biljnom materijalu, 40 µl luminola u koncentraciji od 1 mM, 40 µl peroksidaze iz hrena u koncentraciji od 0,1 µM, od 10 do 50 µl dekokcije ili infuzije (ovisno o koncentraciji) i fosfatni pufer u količini potrebnoj da se ukupna zapremina uzorka dovede do 1 ml. Kiveta je ugrađena u uređaj i CL je snimljen, posmatrajući pozadinski signal. Nakon 48 s registracije pozadinskog signala, u kivetu je dodano 100 μl H2O2 u koncentraciji od 1 mM, a registracija CL je nastavljena 10 min. Pripremljena su četiri uzorka s različitim koncentracijama svakog biljnog objekta. CL je također zabilježen za otopine askorbinske kiseline, kvercetina i tokoferola u pet različitih koncentracija za svaki od antioksidansa. Nakon toga, TAU uzoraka dekocija i infuzija je ponovo izračunat za kvercetin.

dostigla plato, što je ukazivalo na potpuno uništenje antioksidansa u sistemu. Razblaženja proučavanih uzoraka i koncentracije rastvora standardnih antioksidanata (navedene u natpisima slika) odabrane su na način da su sve CL kinetičke krive merene pri istoj osetljivosti instrumenta.

Antioksidativni kapacitet izračunat je iz promjene površine (AS) ispod kinetičke krivulje hemiluminiscencije (svjetlosne sume) nakon dodavanja tvari koja sadrži antioksidans. Da bismo to učinili, izračunali smo S0 za sistem bez antioksidansa i od njega oduzeli površinu SS, koja karakterizira sistem kojem je dodat antioksidans. AS vrijednost zavisi od osjetljivosti hemiluminometra i uslova mjerenja. Odnos AS/C ■ V (gde je C koncentracija proučavanog biološkog materijala u kiveti, g/l, a V zapremina kivete, l) izražava antioksidativni kapacitet 1 g ispitivanog materijala, tj. , biljni materijal.

Na sličan način izračunat je i antioksidativni kapacitet ASa otopine standardnog antioksidansa, na primjer, kvercetina, stavljenog u istu zapreminu reakcione smjese. Odnos AS/CÄ ■ V (gdje je CA težinska koncentracija antioksidansa u kiveti, g/l) izražava antioksidativni kapacitet 1 g antioksidansa.

Za svaki od standardnih antioksidansa zabilježen je signal iz otopina nekoliko koncentracija kako bi se osiguralo da se proračuni izvode u granicama linearnog odnosa i da su dobiveni rezultati ponovljivi. Zaista, dobijena je linearna zavisnost (ASa = kA ■ CA) signala o koncentraciji, iz koje je izračunat stehiometrijski koeficijent kA. Prema Fišerovom kriterijumu, dobijene vrednosti kA za standardne antioksidante su statistički značajne sa verovatnoćom od 0,975. Zatim je za svaki od četiri uzorka biljaka zabilježen signal iz četiri koncentracije, a za sve uzorke je dobivena linearna ovisnost signala o koncentraciji (AS = k ■ C), iz koje je izračunat stehiometrijski koeficijent k. Sa vjerovatnoćom od 0,975 (Fischerov test), k vrijednosti dobijene za uzorke biljaka su statistički značajne. Ukupni antioksidativni kapacitet biljnog materijala u odnosu na masu standardnog antioksidansa (mg%) utvrđen je formulom

OAU = k ■ 105. k

Vrijednosti su predstavljene kao aritmetička sredina ± standardna devijacija (M ± 5) na p<0,05.

REZULTATI ISTRAŽIVANJA

Proučavanje kinetike hemiluminiscencije u prisustvu natrijum askorbata (slika 1) pokazalo je da ovaj antioksidans karakteriše latentni period, kada je CL skoro potpuno potisnut. Njegovo trajanje je proporcionalno količini antioksidansa u sistemu. U ovom slučaju se ne mijenja ni nagib krivulje CL niti intenzitet CL na platou. To se objašnjava činjenicom da je askorbinska kiselina jak antioksidans koji presreće sve radikale nastale u sistemu, uključujući i luminol radikale, a CL se ne razvija dok se sav askorbat ne oksidira.

Djelovanje tokoferola (slika 2) manifestiralo se smanjenjem intenziteta CL na platou, što je tipično za slabe antioksidante, iako se tokoferol smatra jednim od

moćni antioksidansi. Možda je ovo neslaganje posljedica činjenice da su u našem eksperimentu slobodni radikali bili u vodenoj otopini, dok se djelovanje tokoferola obično proučava u nepolarnim medijima. U studiji, gde je kompleks citokroma c sa kardiolipinom služio kao izvor radikala, a reakcija sa luminolom se odvijala unutar ovog kompleksa, tokoferol je imao svojstva antioksidansa srednje jačine.

Proučavajući uticaj različitih koncentracija kvercetina na naš sistem (slika 3) i upoređujući kinetičke krive za njega i natrijum askorbat i tokoferol, može se primetiti da se glavni efekat kvercetina manifestuje u promeni nagiba kvercetina. krivulje, odnosno brzinu razvoja CL, što je tipično za umjerene antioksidanse.

CL krive za sve proučavane dekokcije (slika 4) liče na krivulje za kvercetin sa blagim smanjenjem intenziteta CL na kraju, tj.

Vrijeme, min

Rice. 1. Utjecaj natrijum askorbata na kinetiku hemiluminiscencije

Koncentracije komponenti sistema: luminol - 40 μM, peroksidaza rena - 4 nM, vodonik peroksid - 100 μM. Krive: 1 - kontrolni uzorak; 2 - 0,05 μM; 3 - 0,10 μM; 4 - 0,15 μM; 5 - 0,2 μM; 6 - 0,25 μM natrijum askorbat.

plato. Kao što je prikazano u radu, ovakvo ponašanje je tipično za antioksidante srednje jačine, koji u našem slučaju uključuju polifenole – flavonoide i tanine. Za infuziju plodova maline (Sl. 4, D) primetno je smanjenje hemiluminiscencije na nivou platoa, što je tipično za slabe antioksidante, a to je u ovom slučaju tokoferol. Što se tiče kvercetina i tokoferola, infuzija plodova maline sadrži 4,7 ± 0,9 µmol/g kvercetina i 11,9 ± 0,8 µmol/g tokoferola.

Upoređivanjem krivulja hemiluminiscencije dobivenih za različite koncentracije četiri proučavana vodena ekstrakta iz biljnog materijala, pokazalo se da se doprinos srednjih i slabih antioksidansa ukupnom antioksidativnom kapacitetu uzoraka smanjuje sljedećim redoslijedom: infuzija ploda maline (sl. 4, D), odvar ploda šipka (sl. 4, C), odvar od plodova rowan (sl. 4, A), odvar od plodova gloga (sl. 4, B). Vrijednosti AS u smislu koncentracije C ispitivane tvari u kiveti i vrijednosti ukupnog antioksidativnog kapaciteta u smislu kvercetina prikazane su u tabeli.

DISKUSIJA O REZULTATIMA

Podaci dobiveni tijekom eksperimenata i na njihovoj osnovi izračunate TAU vrijednosti proučavanih objekata upoređeni su sa sadržajem glavnih antioksidansa u njima, utvrđenim hemijskim metodama analize. Unatoč činjenici da je pozitivna korelacija između ukupne količine antioksidansa i TAU-a u različitim objektima neosporna, uočljive su razlike između ovih pokazatelja. Na primjer, ako uzmemo zbir sadržaja flavonoida, tanina i askorbinske kiseline, onda se ispostavi da je više od izračunatog TAU-a za sve proučavane objekte, osim za izvarak plodova gloga (tabela).

Drugi istraživači su također pokazali da se rezultati kemijske analize i TAU vrijednost određene hemiluminiscentnom metodom često ne poklapaju. U radu je utvrđen ukupni antioksidativni kapacitet

46 Vrijeme, min

Ja" "h chi----.

Rice. 2. Utjecaj tokoferola na kinetiku hemiluminiscencije

Koncentracije komponenti sistema: luminol - 40 μM, peroksidaza rena - 4 nM, vodonik peroksid - 100 μM. Krive: 1 - kontrolni uzorak; 2 - 0,01 μM; 3 - 0,025 μM; 4 - 0,06 μM; 5 - 0,1 μM; 6 - 0,2 μM tokoferola.

46 Vrijeme, min

Rice. Slika 3. Uticaj kvercetina na kinetiku hemiluminiscencije Koncentracije komponenti sistema: luminol - 40 μM, peroksidaza rena - 4 nM, vodonik peroksid - 100 μM. Krive: 1 - kontrolni uzorak; 2 - 0,02 μM; 3 - 0,03 μM; 4 - 0,04 μM; 5 - 0,05 μM; 6 - 0,06 μM kvercetin.

Vrijeme, min

46 Vrijeme, min

120 I 100 80 \ 60 40 20

46 Vrijeme, min

Rice. Slika 4. Utjecaj dekocija plodova aromana (A), gloga (B), divlje ruže (C) i infuzije plodova maline (D) na kinetiku hemiluminiscencije . (A) Krive: 1 - kontrolni uzorak; 2 - 0,002 g/l; 3 - 0,004 g/l; 4 - 0,006 g/l; 5 - 0,008 g/l odvar od plodova orena. (B) Krive: 1 - kontrolni uzorak; 2 - 0,005 g/l; 3 - 0,0075 g/l; 4 - 0,01 g/l; 5 - 0,0125 g/l odvar od plodova gloga. (C) Krive: 1 - kontrolni uzorak; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,0015 g/l; 4 - 0,002 g/l; 5 - 0,0025 g/l odvar od šipka. (D) Krive: 1 - kontrolni uzorak; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,003 g/l; 4 - 0,004 g/l; 5 - 0,005 g/l infuzije maline.

u sistemu peroksidaza-luminol-vodonik peroksid u korelaciji sa sadržajem jedinjenja triterpena. Međutim, u radu istih autora, u kojem je druga biljka bila predmet proučavanja, nije uočena korelacija između TAU-a i sadržaja bilo koje grupe supstanci, uključujući flavonoide.

Ova odstupanja su povezana sa najmanje tri faktora. Prvo, važna je aktivnost antioksidansa, odnosno brzina njihove interakcije s radikalima, koja je različita za različite antioksidanse koji čine biljni uzorak. Prema Izmailovu, konstante brzine odgovarajućih reakcija za meksidol, tokoferol i kvercetin odnose se na 0,04:2:60. Drugo, svaki molekul antioksidansa, ulazeći u hemijsku reakciju, može presresti različit broj radikala. Prema radu, kvercetin, mokraćna i askorbinska kiselina su presrele 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 i 0,5 ± 0,2 radikala po reagovanom molekulu antioksidansa, respektivno (korišćen je sistem gemin-H202-luminol). Treće, na rezultate istraživanja moglo bi uticati prisustvo aktivnosti peroksidaze u samim biljnim uzorcima, kao iu radu, kao i prisustvo kalcijuma u uzorcima, koji, kako je prikazano u radu, može povećati aktivnost peroksidaze hrena pod određenim uslovima. Ovo obično rezultira više

veći intenzitet CL na platou nego na kontrolnim krivuljama, što, međutim, nismo uočili.

Još veći značaj ima stehiometrijski koeficijent antioksidansa. Broj radikala n koje su oni presjekli jednak je

gdje je p stehiometrijski koeficijent, a Am promjena koncentracije antioksidansa tokom mjerenja, u našem slučaju početne koncentracije ispitivane tvari u uzorku za ispitivanje.

Razlika u sumi svjetlosti luminescencije u odsustvu antioksidansa iu njegovom prisustvu je proporcionalna n. Ukupan broj presretnutih radikala je n = Y.p. m,

gdje je stehiometrijski koeficijent određenog antioksidansa, a m njegova koncentracija tijekom promjene

Predmet istraživanja Flavonoidi, mg%* Tanini, mg%* Askorbinska kiselina, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. jedinice OAU, mg% kvercetina

Uvarak od plodova orena 8,87 ± 0,01 210,00 ± 10,00 0,67 ± 0,02 7,13 ± 0,96 56,53 ± 7,61

Uvarak od šipka 4,66 ± 0,04 850,00 ± 20,00 3,70 ± 0,12 16,60 ± 3,40 131,63 ± 27,26

Uvarak od plodova gloga 3,01 ± 0,06 12,00 ± 3,00 0,23 ± 0,002 3,18 ± 0,29 25,20 ± 2,32

Infuzija suhih malina 90,00 ± 4,00 40,00 ± 20,00 3,91 ± 0,08 6,65 ± 1,21 52,69 ± 9,56

Napomena: * - podaci iz literature, . AS - promjena svjetlosne sume za uzorak, rel. jedinica, C - koncentracija uzorka u kiveti, g/l. Izračunate vrijednosti su pouzdane na str<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

renijum. Ukupan broj presretnutih radikala očito nije jednak ukupnoj količini antioksidansa, jer koeficijenti pt ne samo da nisu jednaki jedinici, već se i značajno razlikuju za različite antioksidanse.

Vrijednost n proporcionalna je razlici svjetlosnih suma izmjerenih tokom određenog vremena između uzorka koji sadrži antioksidans i kontrolnog uzorka koji ne sadrži antioksidanse:

gdje je k koeficijent koji je konstantan pod istim uslovima mjerenja.

osigurala oksidaciju jakih antioksidanata (askorbinska kiselina) i umjerenih antioksidanata (kvercetin) za 10 min. Ovo trajanje mjerenja je pogodno i osigurava potreban kvalitet mjerenja.

Analiza kinetike kemiluminiscencije pokazala je da su u proučavanim objektima (dekoti od vrane, divlje ruže, plodova gloga i plodova maline) glavni antioksidansi antioksidansi srednje jačine, uključujući flavonoide, i antioksidansi slabe snage (tokoferol i dr. ). Na osnovu smanjenja hemiluminiscencije svjetlosne sume izračunat je ukupni antioksidativni kapacitet za proučavane objekte. Poređenje dobijenih TAU vrednosti sa rezultatima hemijske analize pokazalo je da se proizvodi koji sadrže istu količinu antioksidansa u različitim omjerima mogu razlikovati po svojoj sposobnosti da efikasno zaštite organizam od štetnog dejstva slobodnih radikala. Opisana tehnika je obećavajuća za proučavanje biljnih objekata koji sadrže mješavinu različitih antioksidansa. Istovremeno ga karakterizira jednostavnost i niska cijena istraživanja. Kombinacija mjerenja kinetike hemiluminiscencije s matematičkim modeliranjem reakcija omogućit će ne samo automatizaciju procesa određivanja TAU-a, već i određivanje doprinosa pojedinih grupa antioksidanata indikatoru.

Književnost

1. Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Slobodni radikali kao učesnici u regulatornim i patološkim procesima. U: Grigoriev A. I., Vladimirov Yu. A., urednici. Fundamentalne nauke - medicina. Biophys. med. technol. Moskva: MAKS Press; 2015. tom 1. str. 38-71.

3. Khasanov V. V., Ryzhova G. L., Maltseva E. V. Metode za proučavanje antioksidanata. Chem. rast. sirovine. 2004; (3): 63-75.

4. Vasiliev R. F., Kancheva V. D., Fedorova G. F., Batovska D. I., Trofimov A. V. Antioksidativna aktivnost halkona. Hemiluminiscentno određivanje reaktivnosti i kvantno-hemijski proračun energije i strukture reagenasa i intermedijara. Kinetika i kataliza. 2010; 51(4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil "ev RF, Veprintsev TL. Peroksi-

radikalno posredovana hemiluminiscencija: mehanička raznolikost i osnove za antioksidativni test. Arkivoc. 2007; 8:163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Procjena antiradikalnog kapaciteta hemiluminiscencijom luminola izazvanom H2O2-heminom. J Agric Food Chem. 2003. 3. decembra; 51 (25): 7481-8.

9. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V. Slobodni radikali i ćelijska hemiluminiscencija. Uspjesi biol. chem. 2009; 49:341-88.

10. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V., Izmailov D. Yu. Kinetička hemiluminiscencija kao metoda za proučavanje reakcija slobodnih radikala. Biofizika. 2011; 56(6): 1081-90.

11. Izmailov D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu. A. Određivanje antioksidativne aktivnosti mjerenjem kinetike hemiluminiscencije. Fotobiologija i fotomedicina. 2011; 7(2):70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminol luminescencija izazvana 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termolizom. Besplatno

Radić Res Commun. 1992; 17(5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. O upotrebi gašenja luminolne luminiscencije za procjenu aktivnosti SOD. Free Radic Biol Med. 1994 Jun; 16(6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Procjena ukupnog antioksidativnog potencijala (TRAP) i ukupne antioksidativne reaktivnosti iz mjerenja hemiluminiscencije pojačane luminolom. Free Radic Biol Med. Feb 1995; 18(2):153-8.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Istraživanje mehanizma luminiscentne peroksidacije luminola tehnikama zaustavljenog toka. J Biol Chem. 1968 Sep 25; 243(18): 4706-14.

21. Alekseev A. V., Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Određivanje antioksidanata aktiviranom hemiluminiscencijom pomoću 2,2'-azo-bis(2-amidinopropana) Bilten Moskovskog državnog univerziteta. Ser. 2. Khim. 2012; 53 ( 3): 187-93.

24. Ministarstvo zdravlja SSSR Državna farmakopeja SSSR XI izd. Problem. 2 “Opšte metode analize. Ljekoviti biljni materijal". M.: Medicina; 1987. str. 147-8.

25. Sergunova E.V., Sorokina A.A., Kornyushina M.A. Studija preparata ekstrakta šipka. Pharmacy. 2012; (2): 14-6.

26. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Avrach A. S. Proučavanje plodova gloga u različitim načinima konzerviranja i ekstrakcije vode. Pharmacy. 2010; (5): 16-8.

27. Avrach A. S., Sergunova E. V., Kuksova Ya. V. Biološki aktivne supstance plodova i vodenih ekstrakata obične maline. Pharmacy. 2014; (1): 8-10.

28. Avrach A. S., Samylina I. A., Sergunova E. V. Proučavanje biološki aktivnih supstanci plodova gloga - sirovine za pripremu homeopatskih matričnih tinktura. On Sat. naučnim tr. Na osnovu materijala XXIV Mosk. intl. homeopata. konf. "Razvoj homeopatske metode u savremenoj medicini"; 24-25. januara 2014; Moskva. M.; 2014. str. 146-7.

29. Sergunova E.V., Sorokina A.A. Proučavanje sastava biološki aktivnih supstanci u ljekovitom biljnom materijalu različitih metoda čuvanja. On Sat. sažeci bazirani na XX Ross. nat. kongr. "Čovjek i lijek"; 15-19. aprila 2013.; Moskva. Moskva: EkoOnis; 2013. str. 184-90.

30. Aleksandrova E. Yu., Orlova M. A., Neiman P. L. Proučavanje aktivnosti peroksidaze u ekstraktima iz rizoma i korijena rena i njegove stabilnosti na različite utjecaje. Vestn. Moskovski državni univerzitet. Ser. 2. Chem. 2006; 47(5):350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Free radikaly kak uchastniki regulyatornykh i patologicheskikh protsessov. U: Grigor "ev AI, Vladimirov YuA, urednici. Fundamental" nye nauki - meditsine. Biofizicheskie meditsinskie tehnologii. Moskva: MAKS Press; 2015.v. 1. str. 38-71. ruski.

2. Chanda S, Dave R. In vitro modeli za procjenu antioksidativne aktivnosti i neke ljekovite biljke koje posjeduju antioksidativna svojstva: pregled. Afr J Microbiol Res. Dec 2009; 3(13): 981-96.

3. Khasanov VV, Ryzhova GL, Mal "tseva EV. Metody issledovaniya antioksidantov. Khimija Rastitel "nogo Syr" ja. 2004; (3): 63-75. Russian.

4. Vasil "ev RF, K" "ncheva VD, Fedorova GF, B" "tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" khalkonov. Khemilyuminestsentnoe opredelenie reakcione sposobnosti i kvantovo-himičeskij raschet energii i stroeniya reagentov i intermediatov. Kinetika i kataliza. 2010; 51(4): 533-41. ruski.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA, et al. Antioksidativni potencijal spojeva povezanih s kurkuminom proučavan kinetikom hemiluminiscencije, efikasnošću prekida lanca, aktivnošću čišćenja (ORAC) i DFT proračunima. Beilstein J Org Chem. 2015. 11. aug; 11:1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasiljev RF, Veprintsev TL, Hemiluminiscencija posredovana peroksi radikalima: mehanička raznolikost i osnove za antioksidativni test, Arkivoc, 2007, 8: 163-215.

7. Fedorova GF, Menshov VA, Trofimov AV, Vasil'ev RF Lagani hemiluminiscencijski test za antioksidativna svojstva biljnih lipida: osnove i ilustrativni primeri Analyst, Oct 2009, 134 (10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Procjena antiradikalnog kapaciteta pomoću luminola izazvanog H2O2-heminom

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Besplatno radikaly i kletochnaya khemilyuminestsentsiya. Usp Biol Khim. 2009; 49:341-88. ruski.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya hemilyuminestsentsiya kao metod izučeniâ reaktsii svobodnykh radikalov. biofizika. 2011; 56(6): 1081-90. ruski.

11. Izmailov DYu, Demin EM, Vladimirov YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metodom izmereniya kinetiki khemilyuminestsen-tsii. Fotobiologiya i fotomeditsina. 2011; 7(2):70-6. ruski.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminol luminescencija izazvana 2.2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termolizom. Free Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. O upotrebi gašenja luminolne luminiscencije za procjenu aktivnosti SOD. Free Radic Biol Med. 1994 Jun; 16(6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. Vidljiva hemiluminiscencija povezana s reakcijom između methemoglobina ili oksihemoglobina sa vodonik peroksidom. Photochem Photobiol. Nov 1994; 60(5):405-11.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV, et al. In vitro procjena antioksidativne aktivnosti lipozomalnih flavonola pomoću HRP-H2O2-luminol sistema. J Microencapsul. 2011; 28(4):258-67.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Istraga mehanizma

luminiscentne peroksidacije luminola tehnikama zaustavljenog protoka. J Biol Chem. 1968 Sep 25; 243(18): 4706-14.

18. Chang CL, Lin CS, Lai GH. Fitokemijske karakteristike, aktivnosti uklanjanja slobodnih radikala i neuroprotekcija pet ekstrakata ljekovitih biljaka. Evid Based Complement Alternat Med. 2012; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011, 10. avgust.

19. Chang CL, Lin CS. Fitokemijski sastav, antioksidativna aktivnost i neuroprotektivni učinak ekstrakta Terminalia chebula Retzius. Evid Based Complement Alternat Med. 2012; 2012: 125247. doi: 10.1155/2012/125247. Epub 2011, 5. jul.

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. Procjena antioksidativne aktivnosti različitih flavonoida metodom hemiluminiscencije. AAPS PharmSci. 2003; 5(2):111-5.

21. Alekseev AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksidantov metodom aktivirane hemilyuminestsentsii s ispol "zovaniem 2.2" -azo-bis (2-amidinopropana). Hemijski bilten Moskovskog univerziteta. 2012; 53(3): 187-93. ruski.

22. Pogačnik L, Ulrih NP. Primena optimizovanog testa hemiluminiscencije za određivanje antioksidativnog kapaciteta biljnih ekstrakata. Luminescencija. 2012. novembar-dec; 27(6):505-10.

23. Saleh L, Plieth C. Ukupni antioksidansi niske molekularne težine kao zbirni parametar, kvantificirani u biološkim uzorcima testom inhibicije hemiluminiscencije. Nat Protocol. 2010 Sep; 5(10): 1627-34.

24. Ministerstvo zdravookhraneniya SSSR. Gosudarsvennaya farmakopeya SSSR. 11th ed. br. 2. "Obshchie metody analysis.

Lekarstvennoe rastitel "noe syr" e", Moskva: Medltsina, 1987, str. 147-8. Russian.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh preparatov shipovnika. Pharmacy. 2012; (2): 14-6. ruski.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii i vodnykh izvlechenii. Farmatsia. 2010; (5): 16-8. ruski.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biologicheski aktivnye veshchestva plodov i vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsia. 2014; (1): 8-10. ruski.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr "ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. Zbornik radova 14. Moskovske međunarodne homeopatske konferencije "Razvitie gomeopaticheskogo metoda v sovremennoi meditsine".

29. Sergunova EV, Sorokina AA. Izučenie sostava biologicheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel "nom syr" e razlichnykh sposobov konservatsii. Zbornik radova 20. ruskog nacionalnog kongresa "Čelovek i lekarstvo"; 2013. april 1519; Moskva. Moskva: EkOOnis; 2013. str. 184-90. ruski.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neiman PL. Izučenie peroksidaznoi aktivnosti v ekstraktah iz kornevišcha i kornei khrena i ee stabil "nosti k različitim vozdejstvima. Chemistry Bulletin Moskovskog univerziteta. 2006; 47 (5): 350-2. Russian.

Diplomski rad antioksidativna svojstva dihidrokvercetina. Metoda za određivanje ukupne antioksidativne aktivnosti Određivanje antioksidativne aktivnosti meda hemiluminiscencijom

Bibliografska veza

1.4 Metode istraživanja antioksidansa

anotacija naučni članak iz hemijskih nauka, autor naučnog članka - Georgij Konstantinovič Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Povezane teme naučni radovi iz hemijskih nauka, autor naučnog rada - Georgij Konstantinovič Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Hemiluminiscentno određivanje ukupnog antioksidativnog kapaciteta u ljekovitom biljnom materijalu

Tekst naučnog rada na temu "Kemiluminiscentna metoda za određivanje ukupnog antioksidativnog kapaciteta u ljekovitom biljnom materijalu"

povezani članci