Mikrobiyolojideki besin ortamları, üzerinde mikroorganizmaların ve doku kültürlerinin yetiştirildiği substratlardır. Teşhis amacıyla, saf mikroorganizma kültürlerinin izolasyonu ve incelenmesi, aşı ve ilaç üretimi ve diğer biyolojik, farmasötik ve tıbbi amaçlar için kullanılırlar.

Mikrobiyolojik kültür ortamlarının sınıflandırılması

Mikrobiyolojide besin ortamları ikiye ayrılır:
- belirli ve belirsiz bileşime sahip ortamlar;
- doğal, yarı sentetik ve sentetik;
- temel, tanısal, seçmeli;
- yoğun, yarı sıvı, sıvı, kuru, taneli.

Doğal besin ortamları, doğal malzemelerden elde edilenlerdir: kan, et, proteinler, hayvan organları, bitki özleri ve bitki materyalleri. Bu tür ortamların örnekleri arasında et suyu, peynir altı suyu, bira şerbeti, saman infüzyonları, agar-agar, kan ve safra yer alır. Doğal ortamlar, farklı zamanlarda farklı miktarlarda belirli bileşenlere sahip olabilen, bileşimi belirsiz olan ortamları ifade eder.

Yarı sentetik ortamlar ayrıca bileşimi belirsiz ortamlar olarak kabul edilir. Doğal besin ortamları temelinde hazırlanırlar, ancak bunlara mahsullerin aktif üremesini garanti eden maddeler eklenir. Mahsuller, endüstriyel farmasötikler için vitaminler, amino asitler ve antibiyotikler üretmek üzere yarı sentetik ortamlarda yetiştirilir.

Sentetik ortamlar, bilinen bileşimdeki bileşenlerden, bilinen konsantrasyonlarda ve oranlarda hazırlanır, dolayısıyla bu ortamlar belirli bir bileşime sahip ortamlara aittir. Onların yardımıyla mikroorganizmaların metabolizmasını, biyolojik ve fizyolojik özelliklerini ve gelişimlerini baskılayan veya tersine teşvik eden maddelerin elde edilme olasılığını incelerler.

Temel, seçmeli ve tanısal kültür medyası

Temel ortamlar, çeşitli mikrobiyal kültürlerin yetiştirilmesinin yanı sıra seçmeli ve tanısal ortamların elde edilmesi için bir temel olarak kullanılır. Örneğin temel ortamlar et suyu, et agarı, şıra ve Hottinger et suyunu içerir. Farklı mahsuller için, büyümeyi teşvik etmek amacıyla temel ortama bazı bileşenler eklenir; bunlar vitaminler, amino asitler ve doğal özler olabilir. Böylece boğmacanın etken maddesi kan ilavesiyle bir ortamda yetiştirilir.

Seçmeli ortam - biyolojik mahsullerin seçici (seçici) ekimi için ortam. Ortamın bileşimi, bir tür veya yakından ilişkili bakteri grubu için optimal olacak ve diğer türlerin bakteri gelişimini baskılayacak şekilde seçilir. Örneğin ortama sodyum klorür eklenmesi Belirli bir konsantrasyonda stafilokoklar hariç tüm bakterilerin büyümesini engeller. Seçmeli mahsullerin yardımıyla daha fazla çoğaltma ve biriktirme için saf kültürler elde edilir.

Diagnostik ortamlar mikroorganizmaları tanımlamak için kullanılır. Ortamdaki ve kimyasal bileşimindeki değişikliklere (ortamın rengindeki değişiklikler, gaz kabarcıklarının görünümü vb.) bağlı olarak bakteri türü belirlenir. Kristal menekşe, malakit yeşili, metilen mavisi, fusin ve diğerleri gibi kimyasal gösterge boyaları sıklıkla bu tür ortamlara eklenir. Yakın kültürlerin ayrılmasına yardımcı olurlar. Örneğin, fusin ile renklendirilmiş pembe Endo ortamında, E. coli kırmızı koloniler oluşturur ve tifo ve dizanteri bakteri kolonileri renksizdir.

Mikroorganizmaların yetiştirilmesi ve bakımı (korunması) için kullanılan önemli sayıda besin ortamı vardır. Mikrobiyolojide besin ortamı, mikroorganizmaların laboratuvar veya endüstriyel koşullarda çoğaltılması için kullanılan, karmaşık veya basit bileşime sahip çeşitli bileşikleri içeren bir ortamdır. 1930'da en az iki bin ürün sınıflandırılmıştı, ancak bunların ayrılmaz bileşenleri olan bileşenlerin sayısı nispeten azdır ve bileşimleri belirli genel ilkelere göre oluşturulmuştur. Herhangi bir bakterinin çoğalabilmesi için uygun biyofiziksel ortamın ve biyokimyasal besin bileşenlerinin sağlanması gerekir. Herhangi bir besin ortamı aşağıdaki gereksinimleri karşılamalıdır: büyüme için gerekli tüm besin maddelerini kolayca sindirilebilir bir biçimde içermelidir; optimum neme, viskoziteye, pH'a sahip olmalı, izotonik olmalı, yüksek tampon kapasitesiyle dengelenmiş olmalı ve mümkünse şeffaf olmalıdır. Ototrofik bakterilerin büyümesi için besin gereksinimleri oldukça basittir: su, karbondioksit ve uygun inorganik tuzlar. Örneğin, cinsin bakterileri nitrobakter CO2'yi özümser ve nitritleri nitratlara oksitleyerek enerji elde eder. Heterotrofik bakteriler, indirgenmiş karbon bileşiklerinin oksidasyonundan (disimilasyonundan) enerji elde eder.

Heterotrofik bakteriler organik bileşikleri iki amaç için kullanır: 1) enerji kaynağı olarak; bu durumda organik madde, enerjinin açığa çıkması ve CO2, organik asitler vb. gibi bir dizi son ürünün oluşmasıyla oksitlenir veya parçalanır; 2) doğrudan hücresel bileşenlerin oluşumuna asimile edilen veya enerji gerektiren reaksiyonlarda bunların sentezi için asimile edilen substratlar olarak. Bu yüzden, E.coli Sadece glikoz ve inorganik tuzlar içeren basit bir ortamda çoğalma yeteneğine sahiptir. Laktik asit bakterileri, hücrelerin kendi başlarına sentezleyemediği bir dizi organik bileşiği (vitaminler, amino asitler vb.) katkı maddesi olarak içeren karmaşık ortamlarda büyür. Bu tür bağlantılara denir büyüme faktörleri. Büyüme ortamına eklenmesini gerektiren organizmalara denir. oksotrofik uygun bağlantılar aracılığıyla. Bir karbon ve enerji kaynağının yanı sıra bir dizi temel besin içeren basit ortamlarda büyüyebilen başka bir organizma grubuna denir. prototrofik. Ayrıca doğada, gıda karbonu akışının düşük olduğu yerlerde (günde 0,1 mg/l'ye kadar) çoğalabilen bakterilerin bulunduğu da dikkate alınmalıdır. İsmini aldılar oligotrofik, onların karşıt grubu bakterilerdir kopiotrofik– Zengin gıda substratlarında büyüyebilme yeteneğine sahiptir.

Besleyici ortamın seçimi büyük ölçüde deneyin hedeflerine bağlıdır ve besin ortamlarının mevcut sınıflandırması aşağıdaki özelliklerin özelliklerini dikkate alır.

Kompozisyona göre Besin ortamları ikiye ayrılır doğal Ve sentetik. Doğal ortamlar, belirsiz bir kimyasal bileşime sahip bitki veya hayvan kökenli ürünlerden oluşan ortamlardır. Bu tip besin ortamlarının örnekleri, hidrolizi sırasında oluşan protein parçalanma ürünlerinin (kazein, memeli kasları) bir karışımı olan ortamlardır. Proteinlerin asit (HCl) hidrolizi, tam hidrolizatların hazırlanması için kullanılır. Tripsin, pankreatin, papain gibi enzimlerin etkisi, proteinlerin yalnızca kısmi (eksik) hidrolizine yol açarak oluşumuna neden olur. peptonlar. Kural olarak mikroorganizmalar, peptonlu besin ortamlarında, tam hidrolizatlardan veya amino asit karışımlarından hazırlanan besin ortamlarına göre daha iyi büyür. Enzimatik hidroliz muhtemelen kararsız büyüme faktörlerini korur. Ek olarak, birçok mikroorganizma küçük peptitler içeren ortamlarda daha iyi büyür, çünkü bunları doğrudan absorbe edebilirler, ancak eksik amino asitler bunu yapamaz. Tipik olarak böyle bir ortamın bileşiminde, enzimatik bir protein hidrolizatı, amino asitler, karbonhidratlar (glikoz) gibi nitrojen kaynaklarına ihtiyaç sağlar, karbon ve enerji kaynağı olarak kullanılır, tuzlar bakterilerin inorganik iyon ihtiyaçlarını karşılar, ve maya ekstraktı vitamin ihtiyacını karşılar. Bileşimi belirsiz besin ortamları aynı zamanda bitkisel hammaddelerden elde edilen ortamları da içerir: patates agarı, domates agarı, tahıl kaynatma maddeleri, maya, bira şerbeti, saman ve saman infüzyonları vb. Bu tür besin ortamlarının ana amacı izolasyon, yetiştirme, üretimdir. biyokütle ve mikrobiyal kültürlerin korunması.

Bileşimi belirsiz medya aynı zamanda medyayı da içerir yarı sentetik. Bilinen bileşikler böyle bir ortama açıkça gerekli olduğu şekilde dahil edilir; ve bilinmeyen büyüme ihtiyaçlarını karşılamak için küçük miktarlarda maya veya mısır özütü (veya başka herhangi bir doğal ürün) eklenir. Bu tür ortamlar genellikle biyolojik nesnelerin endüstriyel olarak yetiştirilmesi durumunda metabolik ürünler elde etmek için kullanılır.

Sentetik medya– bunlar, tek tek elementlerin kesin olarak belirlenmiş konsantrasyonları ve oranlarında alınan saf kimyasal bileşiklerle temsil edilen, belirli bir bileşime sahip ortamlardır. Bu tür ortamların zorunlu bileşenleri, inorganik bileşikler (tuzlar) ve karbon ve nitrojen içeren maddelerdir (tipik temsilciler glikoz ve (NH4)2S04'tür. Tampon çözeltileri ve şelatlama bileşikleri genellikle bu tür ortamlara eklenir. Oksotropik organizmalar bu tür ortamlarda büyür. sadece karşılık gelen büyüme faktörlerinin eklenmesiyle ortam. Bu tür besin ortamlarının temel amacı, mikroorganizmaların fizyolojisi ve metabolizmasının özelliklerini incelemek, genetik rekombinantları izole etmek vb.

Amaca göre ortamlar ikiye ayrılır seçmeli Ve diferansiyel teşhis. Seçici ortamlar, bir veya tüm fizyolojik mikroorganizma grubunun tercihli gelişimini sağlar. Örneğin gram negatif bakterilerin tercihli izolasyonu için besin ortamına trifenilmetan boyalarının (kristal mor, malakit yeşili vb.) eklenmesi yeterli olabilir. Stafilokokları izole etmek için ortama %7,5 konsantrasyonda sodyum klorür eklenebilir. Bu konsantrasyonda diğer bakterilerin büyümesi engellenir. Seçmeli ortamlar, saf bir bakteri kültürünün izole edilmesinin ilk aşamasında, yani bir zenginleştirme kültürü elde edilirken kullanılır.

Diferansiyel tanı ortamları, yakından ilişkili mikroorganizma türlerini hızlı bir şekilde tanımlamak, klinik bakteriyolojide vb. Türleri belirlemek için kullanılır. Diferansiyel tanı ortamları oluşturma ilkesi, farklı bakteri türlerinin biyokimyasal aktivite açısından farklı olduğu ve farklı özelliklere sahip olduğu gerçeğine dayanmaktadır. Besleyici ortamda bulunan substratları parçalayan bir dizi enzim.

Diferansiyel tanılama ortamı şunları içerir:

a) bakterilerin çoğalmasını sağlayan ana besin ortamı;

b) belirli bir mikroorganizma için tanısal bir işaret olan belirli bir kimyasal substrat;

c) bir renk göstergesi, renkteki bir değişiklik, biyokimyasal bir reaksiyonu ve incelenen mikroorganizmada belirli bir enzim sisteminin varlığını gösterir.

Örneğin, Endo ortamı laktozu fermente eden klonları bu özelliğe sahip olmayan klonlardan ayırt etmenizi sağlar. Bu besiyerinin ana bileşenleri besin (pepton) agar, karbonhidrat ve sülfit (Schiff reaktifi) ile rengi giderilmiş bazik fuksindir. Başlangıç ​​besin ortamı pembe renklidir. Laktozu fermente edemeyen mikroorganizmalar renksiz koloniler oluşturur. Laktoz, asetaldehite fermente edildiğinde, ikincisi sülfit ile reaksiyona girer ve karşılık gelen kolonilerin kırmızı rengi gelişir.

Eozin ve metilen mavisi içeren ortam (Levine ortamı) indikatör olarak eozin ve metilen mavisi içerir ve başlangıçta siyah-mavi renktedir. Fermantasyon yapan hücreler metalik bir parlaklıkla siyaha boyanmış koloniler oluşturur, bu özelliğe sahip olmayan koloniler ise renksizdir. Bu tür renk değişiklikleri, boyaların ortamda bağımsız bileşikler olarak değil, besin ortamındaki maddelerle kompleksler halinde bulunması nedeniyle meydana gelir. Düşük pH değerlerinde bu kompleksler çöker, ancak orijinal boyalar bu koşullar altında çözünür; yüksek pH değerlerinde boya kompleksleri renksiz olurken, metilen mavisi mavi bir renk alır. Bu ortam, cinsin bakterilerini ayırt etmeyi mümkün kılar Escherichia türündeki bakterilerden Proteus.

Tutarlılığa göre ortamlar olabilir sıvı, yarı sıvı, katı, taneli. Sıvı besin ortamları, gerekli belirli bir dizi besin maddesinin, makro ve mikro elementlerin suda çözülmesiyle elde edilir. Bileşim olarak doğal veya sentetik olabilirler. Mikroorganizmaların sıvı ortamda büyümesi şu durumlarda meydana gelebilir: periyodik (kapalı) Bu durumda besiyerinin aşılanmasından sonra gaz fazı (kapalı sistem) dışında herhangi bir bileşenin eklenmesi veya çıkarılması söz konusu değildir. Şu tarihte: akış (sürekli) Yetiştirme, ortamın uzaklaştırılma hızına (açık sistem) eşit bir oranda taze besin bileşenlerinin sürekli olarak sağlanmasıyla karakterize edilir.

Yoğun jel formundaki katı hal ortamları, R. Koch'un zamanından beri bakteriyolojide kullanılmaktadır. Katı besiyeri kullanmanın en önemli avantajı, popülasyonun tek tek hücrelerinden oluşan koloniler şeklinde mikroorganizmalar yetiştirebilmeleridir.

Hazırlık sağlam Besleyici ortam, sıvı ortama agar, jelatin, silika jel, karajenan olabilen belirli sızdırmazlık malzemelerinin eklenmesiyle elde edilir. En yaygın dolgu macunu agardır - kırmızı deniz yosunundan izole edilen ve iki polisakkaritten (agaroz (%70) ve agaropektin) oluşan bir polisakarit. Özellikle aşağıdakiler gibi birçok faydalı özelliği vardır: 1) suda jel oluşturabilir;

2) 100 °C sıcaklıkta erir ve 45 °C'de katılaşır; 3) çoğu mikroorganizma türünün enzimlerinin etkisi altında parçalanmaz; 4) karışım hemen soğutulursa, 45 ° C'ye ısıtılan erimiş agara eklendiğinde ısıya dayanıklı maddeler ve canlı mikroorganizmalar yok edilmez; 5) agar jelleri yüksek derecede şeffaflığa sahiptir; 6) yaygın olarak kullanılan konsantrasyonlar
%1,5 - 2,0 nispeten düşüktür ve kullanımı ekonomiktir.

Deri ve kemiklerden yapılan bir protein olan jelatin, oluşturduğu jelin yaklaşık 25 - 30 °C sıcaklıklarda erimesi nedeniyle artık özel amaçlar için kullanılmaktadır. Ayrıca jelatin birçok mikroorganizmanın proteolitik enzimleri tarafından sıvılaştırılır. Jelatinin “kalınlaştırıcı” konsantrasyonu %17 – 20'dir.

Silika jele silikon dioksit (SiO 2) adı verilir. Steril solu, sodyum silikat çözeltisinden hazırlanır ve kullanımdan önce jel oluşumunu sağlamak için elektrolit içeren besin ortamı eklenir. Silika jel bazlı ortam
Besiyerinde organik madde bulunmadığından ototrofik bakteri kültürlerinin elde edilmesinde (%1,5 – 2,0) kullanılır. Bu tür mineral ortamlara çeşitli organik maddeler eklenerek, heterotrofik bakterilerin bunları tek karbon kaynağı olarak kullanma yeteneğini incelemek mümkündür. Silika jel ortamı bakterilerin vitamin gereksinimlerini belirlemek için de kullanılabilir.

Carrageenan (“bitkisel jelatin”) belirli kırmızı deniz yosunu türlerinden ekstraksiyonla elde edilir. Bazı karragenan türlerinin potasyum tuzları, agarın yerine geçebilecek yoğun (%2) şeffaf jeller oluşturma yeteneğine sahiptir. Carrageenan agardan çok daha ucuzdur ve çoğu bakteri türü tarafından yok edilmez. Ancak hazırlanan ortam 55 - 60 ° C gibi yüksek bir sıcaklıkta dökülmelidir.

Yarı sıvı ortam düşük (%0,3 - 0,7) konsantrasyonda jel oluşturucu bir madde içerir ve yumuşak jöle benzeri bir kıvama sahiptir. Bu tür ortamlar hücre hareketliliğini ve kemotaksiyi incelemek ve mikroaerofilleri kültürlemek için uygundur.

Toplu ortam az çok ezilmiş ve nemlendirilmiş hammaddelerden (çoğunlukla bitki materyalleri) oluşan bir kütledir. Temel amaçları bunları gıda endüstrisinde (soya sosu veya pirinç votkası üretmek), tarımda (yem silajı) vb. kullanmaktır.

Bakteriyolojik uygulamada en sık kullanılırlar kuru endüstriyel ölçekte üretilen besin ortamları - ucuz gıda dışı ürünlerin (balık atığı, et ve kemik unu, teknik kazein) ve besin agarının triptik hidrolizatları. Kuru ortamlar uzun süre saklanabilir, nakliyeye uygundur ve nispeten standart bir bileşime sahiptir.

MGAVMiB im. K.I. Scriabin

Mikrobiyoloji Anabilim Dalı ve

immünoloji

Baş Burlakova G.I.

SOYUT

Besin ortamları ve sınıflandırılması

Bir öğrenci tarafından tamamlandı

II yıl 1. grup FVM

Kurinnova S.V.

Moskova-2007

1. Giriş…………………………………………………………….2

2. Mikroorganizmaların yetiştirilmesi……………………………...2

3. Besin ortamlarının sınıflandırılması ve hazırlanma yöntemleri………3

4. Mantar yetiştiriciliği……………………………………………..7

5. Sonuç…………………………………………………………………………………..8

6. Kullanılan literatür listesi…………………………………9

1. Giriş.

Diğer canlı organizmalar gibi mikroplar da gelişmelerini ve büyümelerini, yapı malzemelerinin yenilenmesini ve enerji süreçlerinin sağlanmasını, kendilerini çevreleyen dış ortamla sürekli madde alışverişi yoluyla gerçekleştirirler. beslenme ve nefes alma yoluyla. Beslenme türüne bağlı olarak mikroplar ikiye ayrılır: ototroflar(CO2'den karbonu, havadan moleküler nitrojeni ve kemo- veya fotosentez yoluyla mineralleri özümseyebilen) ve heterotroflar(karbon ve diğer maddeleri yalnızca hazır organik bileşiklerden özümseyebilmektedir). Ototroflar esas olarak birçok toprak bakterisini içerir ve heterotroflar (paratotroflar), hayvan ve bitkilerin bulaşıcı hastalıklarının mikroplarını içerir.

Beslenme türleri, solunum (aeroblar ve anaeroblar), enzimlerin, toksinlerin, pigmentlerin indüksiyonu ve aktivitesi, büyüme ve üreme, besin ortamının bileşimini ve mikropların in vitro yetiştirilmesi için koşulları geliştirirken dikkate alınan ana fizyolojik parametrelerdir.

2. Mikroorganizmaların yetiştirilmesi .

Mikroorganizmaların yetiştirilmesi, onlar için yapay olarak koşulların yaratılması anlamına gelir büyüme ve üreme in vitro, birbiriyle ilişkili ancak zorunlu olarak eşlenik olmayan süreçler. Büyüme ve üreme döngüsel 4 aşamalı bir süreçtir (gizli, logaritmik büyüme, durağan, ölüm). Yeni hücrelerin oluşumu ile bölünmeleri arasındaki süreye nesil dönemi denir; bu süre, mikropun özelliklerine ek olarak besin ortamının bileşiminden de etkilenir. Aynı bileşime sahip bir besin ortamı üzerindeki farklı mikrop kolonilerinin şekilleri farklılık gösterir ve bu, onları ayırt ederken dikkate alınır.

In vitro ekim, mikroorganizmaların büyümeleri ve üremeleri için besin olarak kullanabileceği substratlara ihtiyaç duyar. Bu tür besin substratlarına (yoğun veya sıvı) denir. kültürel veya beslenme Çarşambaları.Çoğu durumda, mikrobiyoloji laboratuvarlarında mikroorganizmalar in vitro olarak yetiştirilir; cam şişelerde, test tüplerinde ve diğer kaplarda.

Herhangi bir besin ortamı için bir takım temel gereksinimler vardır:

1). Sterillik ve mümkünse şeffaflık.

2). Besin ortamlarını derlerken, mikroorganizmaların besin maddelerine olan ihtiyacı dikkate alınır (hücrelerin yaşamı için gerekli biyokimyasal faktörler - enerji kaynakları, C, N, S ve ayrıca mikroorganizmalar tarafından asimilasyon için mevcut olan inorganik iyonlar).

3). Bir dizi biyofiziksel göstergenin optimum değerleri: hidrojen iyonlarının konsantrasyonu (pH), oksidasyon-indirgeme potansiyeli (Eh), su aktivitesi ( bir w), ozmotik basınç.

3. Besin ortamlarının sınıflandırılması ve hazırlanma yöntemleri.

Mikropların türüne ve yetiştirme amacına bağlı olarak kültür ortamının tutarlılığı ve bileşimi farklıdır ve büyük ölçüde değişiklik gösterir. Bir mikrobun biyolojik özelliklerini karşılayan, büyümesini ve üremesini sağlayan ortama denir. tam dolu, yaşam aktivitesi için gerekli herhangi bir bileşene sahip olmamak - kıt .

Besin ortamları aşağıdakilere bağlı olarak sınıflandırılır:

Kimyasal bileşim ve başlangıç ​​bileşenleri;

Tutarlılık;

· kullanım amacı.

Kimyasal bileşime ve başlangıç ​​bileşenlerine bağlı olarak Aşağıdaki besin ortamı türleri ayırt edilir:

- belirsiz kimyasal bileşime sahip ortamlar(doğal veya doğal ortamlar), karmaşık, belirsiz bir kimyasal bileşime sahip, hayvan veya bitki kökenli ürünlerden oluşan ortamlardır:

1) hayvansal kökenli ortamlar (başlangıç ​​ürünler - et, balık, yumurta, süt vb.)

2) bitki kökenli ortamlar (başlangıç ​​ürünler - soya fasulyesi, bezelye, patates, havuç vb.)

Mikroorganizmalar doğal ortamda iyi gelişir, ancak bu ortamlar, çevrenin bir dizi bileşeninin ihtiyaçlarının dikkate alınmasına izin vermediğinden ve diğer yandan, mikroorganizmaların metabolizma fizyolojisinin kontrollü çalışmaları ve teşhis çalışmaları için uygun değildir. Mikroorganizmaların ürettiği maddelerin belirlenmesi. Doğal ortamlar esas olarak mikroorganizma kültürlerinin muhafaza edilmesi, biyokütlelerinin biriktirilmesi ve teşhis amaçlı kullanılmaktadır.

"Yarı sentetik"çevre (hidrolizat), bileşimi belirsiz medyayla ilgili. Bilinen kimyasal yapıya sahip bileşiklerle birlikte, bileşimi belirsiz maddeler içerirler. Mikrobiyolojik uygulamada vitaminler, antibiyotikler, amino asitler ve mikroorganizmaların diğer atık ürünlerini (et, süt, maya, kan ve diğer protein maddelerinin hidroliz ürünleri) elde etmek için kullanılırlar.

Bilinen kimyasal bileşime sahip ortam (sentetik)– bilinen kimyasal bileşikleri (tuzlar, karbonhidratlar, amino asitler, vitaminler vb.) optimum niceliksel oranda içerirler. Sentetik ortam, bileşim açısından basit olabilir veya nispeten geniş bir bileşen kümesine sahip olabilir. Büyütülmüş hücre kütlesinin, geleneksel ortamın bir parçası olan balast organik bileşiklerden maksimum düzeyde arındırılması gerektiğinde, örneğin tanısal alerjenler elde edilirken veya bir mikroorganizmanın belirli bir kimyasal bileşiğe yönelik metabolik ihtiyaçlarını incelerken kullanılırlar. Ayrıca araştırmacılar her bir mikroorganizma için minimum besin gereksinimlerini belirlemeye çalışıyor ve buna dayanarak minimum yalnızca üremesi için gerekli olan kimyasal bileşikleri içeren bir ortam.

Tutarlılığa göre Besin ortamları katı, yarı sıvı ve sıvı olarak ayrılır.

Sıvı kültür ortamı. Ekstraktlar, hidrolizatlar ve başlangıç ​​ürünlerinin çözeltileri kullanılarak hazırlanır.

Yarı sıvı ve katı besin ortamı . Bakteri sayısını saymak, onları "saf" bir kültür şeklinde izole etmek ve başka amaçlar için kullanılırlar. Agar-agar veya jelatin gibi çeşitli sızdırmazlık maddeleri eklenerek ortama gerekli kıvam verilir.

Agar-agar (Malay jölesi), belirli deniz yosunlarından elde edilen bir bitki kolloididir. Esas olarak önemsiz miktarda azotlu madde içeren polisakkaritlerden oluşur. Yoğun ortam elde etmek için %1,5-2, yarı sıvı - %0,3-0,7 oranında eklenir.

Jelatin, kemik ve kıkırdakların kaynatılmasıyla elde edilen asidik, nitrojen içeren bir üründür. Tipik olarak kültür ortamına %10-20 jelatin eklenir. Ancak bazı bakteriler jelatini parçalayan proteolitik enzimler salgılar ve bu da jelatinin kullanımını zorlaştırır.

Amaca göre ayırt etmek:

A).Yaygın olarak kullanılan (temel) ortamlar .

Nispeten iddiasız mikroorganizmaların yetiştirilmesi için kullanılırlar.

Et suyu: Hazırlanışı - Kıyma 1:2 oranında musluk suyu ile dökülür, 1 saat kaynatılır, daha sonra süzülür, orijinal hacmine kadar su ile tamamlanır, kaplara dökülür, sıkıca kapatılır ve 120 O C'de 20 dakika otoklavda sterilize edilir.

Hottinger'in sindirimi et atıklarından triptik hidroliz yoluyla hazırlanır. Yağ, fasya, tendonlar kesilir, 1:2 kaynar su ile dökülür, kaynatılır, 45 ° C'ye soğutulur, pankreatin eklenir, sodyum karbonat çözeltisi ile alkalize edilir, çalkalanır, kloroform ilave edilir, kapatılır ve 10 gün ılık bir yerde bekletilir. .

Et-pepton suyu (MPB). Et suyu yemek pişirmek için kullanılır. 1 litre et suyuna, ortamın kalori içeriğini arttırmak için 5-10 g pepton (yüksek molekül ağırlıklı protein hidrolizinin ilk ürünü) ve ozmotik aktivite oluşturmak için 5 g NaCl ekleyin. Daha sonra ortamın nötr veya hafif alkali bir reaksiyonu kurulur. Kaynamak. Kağıt filtreden süzün, şişelere, test tüplerine dökün ve 120 0 C'de 20 dakika otoklavda sterilize edin.

Et pepton agarı (MPA): 1 litre MPB'ye 15-20 g ince kıyılmış agar-agar ekleyin. Ortam, agar eriyene kadar ısıtılır, ortam, %20 Na2C03 çözeltisi ile hafif alkalidir, filtrelenir ve huniler aracılığıyla test tüplerine dökülür, 120 0 20 dakikada otoklavlanarak sterilize edilir.

Et-pepton jelatin (MPG). Jelatin, %10-20'lik nihai konsantrasyona kadar 1 litre MPB'ye eklenir, ısıtılır, hafif alkali bir pH oluşturulur, kaynatılır, süzülür, test tüplerine dökülür ve bir Koch kazanında akan buharla 3 gün veya bir kez sterilize edilir. 1 atm'de 120 0 C'de otoklavlanır. 20 dakika boyunca.

Yarı sıvı et-pepton agar (PZA) MPA gibi hazırlanır ancak %0,25 agar eklenir, eriyene kadar kaynatılır, istenilen pH ayarı yapılır, sıcakken süzülür ve otoklavda sterilize edilir.

Hottinger'in suyu : Hottinger'in ana sindirimi 1:5 (1:8) su ile seyreltilir, %0,5 NaСI, 0,1 g potasyum hidrojen fosfat eklenir, pH ayarlanır, 150-20 dakika kaynatılır, süzülür, kaplara dökülür ve sterilize edilir. 120 0 20 dakikada otoklavlama.

Hottinger agarı Hottinger besiyerine %2 agar-agar ilave edilerek hazırlandı.

Besleyici et suyu içerir: çaça triptik hidrolizatı - 10.05, NaCI - 4.95. Bu et suyu tozunun 15 gramı 1 litre dist içerisinde eritilir. Su 2 dakika kaynatılır, süzülür, kaplara dökülür ve otoklavda 120 0 C'de 20 dakika (Ph 7.3) sterilize edilir.

Kültür medyası- Mikroorganizmaları büyütmek ve kültürel, biyokimyasal, antijenik özellikleri, fagolize edilebilirliği ve antibiyotiklere duyarlılığı incelemek için kullanılan biyolojik preparatlar.

Besleyici ortamlar, laboratuvar uygulamalarında bulaşıcı hastalıkların teşhisinin yanı sıra ilaçların kısırlığının izlenmesi için yaygın olarak kullanılmaktadır. Mikroorganizmaların büyüyüp gelişebilmesi için besin ortamının aşağıdaki gereksinimleri karşılaması gerekir.

1. Optimum bileşim. Mikropların gelişimi için gerekli olan tüm gerekli bileşenleri içermelidirler: proteinler, vitaminler, karbonhidratlar, mineraller.

2. Optimum pH değeri. Çoğu mikroorganizma pH 7,2...7,4'te gelişir.

3. Sterilite. Mikroplar arasındaki rekabeti önlemek için gereklidir.

4. Şeffaflık. Mikrobiyal kolonilerin doğasını daha iyi incelemek.

5. Nem. Beslenme ve solunum ozmoz ve difüzyonla gerçekleştirilir, bu nedenle besin ortamının hafif nemli olması gerekir.

Medyanın sınıflandırılması. Besin ortamları aşağıdaki özelliklere göre ayrılır.

1. Tutarlılığa göre: a) yoğun (katı) - agar %1,2...2 (et pepton agar); b) yarı sıvı - agar %0,2...0,3 (yarı sıvı agar); c) sıvı - et-pepton suyu.

Medyaya yoğun veya yarı sıvı bir kıvam kazandırmak için çoğunlukla deniz yosunundan izole edilen bir polisakarit olan agar-agar kullanılır. Agar, suda 80...100 °C'de eriyen ve 37...40 °C'de sertleşen bir jel oluşturma kapasitesine sahiptir. Agar'ın çoğu mikroorganizmanın sıvılaştırma etkisine karşı direnci ve güçlü jöleler oluşturma yeteneği bakteriyolojide yaygın şekilde kullanılmasına yol açmıştır.

2. Kökenine göre: a) yapay: hayvansal (MPA, MPB) ve bitki kökenli (bira şırası); b) doğal: hayvansal (kan, süt) ve bitki kökenli (patates parçaları).

3. Bileşime göre: a) protein; b) proteinsiz; c) maden.

4. Amaca göre: a) yetiştirme ortamı (basit, özel); b) zenginleştirme ortamı (mikroorganizmaların kaynak malzemede düşük konsantrasyonlarında birikmesi için); c) patojenlerin birincil ekimi ve taşınması için koruyucu ortam; d) tanımlama ortamı (diferansiyel teşhis) - aynı tipteki mikroplar, görünüş olarak diğer mikroorganizma kolonilerinden farklı olan koloniler oluşturur.

Malzeme yabancı mikroflora ile hafifçe kirlenmişse, kültürleri izole etmek için basit genel amaçlı ortamlar (MPA) kullanılır; saprofitlerle yoğun kirlenme durumunda, özel ortamlar kullanılır: seçici (belirli türler için) ve ayırıcı tanı (tanımlamayı kolaylaştırmak için) ).

Medya özellikleri. Koruyucu taşıma ortamı(gliserol karışımı, fosfat tamponu, anaeroblar için tiyoglikollat ​​ortamı, vb.). Patojenik mikropların ölümünü önler ve saprofitlerin büyümesini bastırırlar.

Zenginleştirme ortamı(seçici et suyu, safra suyu, Muller besiyeri, Rappoport, Kaufman besiyeri, alkalin pepton suyu). Bazı türler için ideal, diğerleri için uygun olmayan koşullar yaratarak belirli bir bakteri grubunun birikmesi için kullanılırlar. En sık kullanılanlar çeşitli boyalar ve kimyasallardır - tuzlar, safra asitleri, potasyum tellürit, antibiyotikler, fuksin vb.

Seçmeli (seçici ortamlar). İzole edilen mikrop için daha uygun koşullar sağlarken aynı zamanda eşlik eden mikroflorayı da baskılarlar. Örneğin, Ploskirev besiyeri ve tuz agar, saf bir kültür elde etmek amacıyla malzemenin birincil ekimi veya koruyucu veya zenginleştirme ortamından alt kültür için kullanılır.

Diferansiyel teşhis ortamları. Metabolizma özelliklerine göre incelenen mikropun türünü belirlemek için tasarlanmıştır.

Mikropların proteolitik ve hemolitik yeteneklerini tanımlamak için ortam. Protein maddeleri (kan, süt, jelatin vb.) İçerirler.

Kayıtsız kimyasallar içeren ortamlar. Bazı mikrop türleri için besin kaynağı görevi görürler ve diğer türler (Simmons sitrat agar) tarafından sindirilemezler.

Karbonhidrat içeren ortam(monosakkaritler, disakkaritler, polisakkaritler), polihidrik alkoller (sorbitol, mannitol), glikozitler (salisin, inositol) ilgili enzimleri tespit etmek için kullanılır.

Mikropların azaltma yeteneğini belirlemek için ortamlar. İndirgeme sonrasında rengi bozulan boyalar (indigo karminli Omelyansky agar) ve ayrıca mikroorganizmaların nitrifikasyon yeteneğini belirlemek için nitratlar içerirler.

Kuru kültür ortamı. Bakteriyoloji laboratuvarlarında çoğunlukla ticari kuru ortamlar kullanılır. Hazır besin ortamlarıdır, kurutulur ve toz haline getirilir. Kuru ortamların geleneksel olarak üretilen ortamlara göre birçok avantajı vardır: hava geçirmez şekilde kapatılmış bir kapta kuru, karanlık bir odada uzun süre saklanabilirler, taşınabilirler, kullanımı kolay ve standarttırlar, bu da karşılaştırılabilir sonuçların elde edilmesini kolaylaştırır Bakteriyolojik araştırma sırasında.

Katı ortam, bazı mikroorganizmaların büyümesini artıran ve diğer mikroorganizmaların büyümesini engelleyen bir besin bazı, agar-agar, indikatörler ve diğer organik ve mineral maddelerden oluşur.

Kuru ortamlar için beslenme temeli olarak çeşitli protein kaynakları kullanılır. Yurt dışında, kuru ortam çoğunlukla büyük miktarda sığır eti tüketimini gerektiren et-pepton suyu kullanılarak yapılır. Ülkemizde protein kaynağı olarak çaça balığı, kazein ve yem mayasının hidrolizatları kullanılmaktadır.

Kuru besin ortamlarını paketlemek için turuncu cam kavanozlar (250 g), polietilen kavanozlar (250, 500, 1000 g) ve ayrıca üç katmanlı lamine kağıttan (50...200 g) torbalar kullanılır. Cam ve polietilen kavanozlarda raf ömrü 2...4 yıl, üç katmanlı laminattan yapılmış torbalarda ise 1 yıldan 4 yıla kadardır.

Yerli endüstri 120'den fazla çeşitte çeşitli kuru besin ortamı üretmektedir. En büyük üreticiler Federal Devlet Üniter Teşebbüsü NPO “Besin Medyası” (Makhachkala) ve Devlet Tıp Bilimleri Araştırma Merkezi'dir (Obolensk) (M. M. Medzhidov, Mikrobiyolojik Besin Medyası El Kitabı. - M .: Tıp, 2003). Aşağıdaki ortamlar çoğunlukla pratik laboratuvarlarda kullanılır.

Kuru diferansiyel teşhis ortamı. Daha önce veteriner bakteriyoloji laboratuvarlarının uygulamasında, tek bir karbonhidrat içeren Hiss besiyeri mikroorganizmaları tanımlamak için yaygın olarak kullanılmışsa, son zamanlarda mikroorganizmaları iki veya üç özelliğe göre ayırt etmeyi mümkün kılan besiyerleri giderek daha fazla kullanılmaya başlandı.

Rossel ortamı(FSUE NPO “Besin Ortamı”). Enterobakterilerin birincil tanımlanması için tasarlanmıştır. Hazırlanan ortam yeşildir. Kültürün ekilmesinden sonra, 37 °C'de 18...20 saatlik inkübasyonun ardından, laktoz fermantasyonu, agarın eğimli kısmında sarı bir rengin ortaya çıkmasıyla değerlendirilir ve glikoz fermantasyonu, agarın sarı rengiyle değerlendirilir. kolon. Gaz oluşumu, agarda kabarcıkların ve yırtılmaların ortaya çıkmasıyla belirtilir. Mikroorganizma glikozu ve laktozu fermente etmezse besiyeri yeşil kalır veya maviye döner.

Kligler'in ortamı(FSUE NPO Nutrient Media, Makhachkala ve JSC Biomed, adını I.I. Mechnikov, Moskova). Enterobakterilerin birincil tanımlanması için tasarlanmıştır. Hazırlanan ortam kırmızıdır. 2,5...3 cm yüksekliğinde bir sütun kalacak şekilde biçmek gerekir, önce ortamın kalınlığına, sonra eğimli yüzey boyunca ekim yapılır. 37 °C'de 18…20 saatlik inkübasyonun ardından sonuçlar dikkate alınır. Eğer mikroorganizma laktozu fermente ederse agarın eğimli kısmı sarıya döner. Glikoz fermente edildiğinde kolondaki ortam sarıya döner. Gaz oluşumu ile - kabarcıkların ortaya çıkması ve agarın yırtılması. Hidrojen sülfit oluşursa ortam siyah olur. İndol üretimi özel indikatör kağıtları kullanılarak belirlenir.

Üre içeren çift katmanlı demir-glukozolaktoz agar. Olkenitsky'nin ortamı (FSUE NPO "Besleyici Medya"). Bu ortamlar bakterilerin glikozu ve laktozu fermente etme, hidrojen sülfit üretme ve üreyi parçalama yetenekleriyle tanımlanmasına olanak tanır. Hazırlama, mikroorganizmaların aşılanma yöntemi ve sonuçların kaydedilmesi ile ilgili ayrıntılı talimatlar, M. M. Medzhidov'un "Mikrobiyolojik Besin Ortamları El Kitabı" nda bulunabilir.

Kuru seçmeli besin ortamı. Seçici tuz agar(SA) (FSUE NPO "Besin Ortamı" ve FSUE "Alerjen", Stavropol). Stafilokokları test materyalinden izole etmek için tasarlanmıştır. Sarısı tuzu veya süt tuzu agarının hazırlanması için temel görevi görebilir. Malzemeyi SA'ya aşılarken, 37 °C'de 48 saatlik inkübasyonun ardından stafilokoklar 2...4 mm çapında yuvarlak koloniler şeklinde büyür.

Pnömokokları izole etmek için seçici besin ortamı(pnömokok-agar) (FSUE NPO “Besin Ortamı”). Pnömokokun patolojik materyalden (kan, balgam, irin) seçici izolasyonu için tasarlanmıştır. Hazırlanan ortamın rengi kahverengidir. Malzemenin aşılanmasından ve 36...38 °C'de "mum kabı" koşullarında inkübe edilmesinden 24...48 saat sonra, pnömokok besiyeri üzerinde boyutu 1 mm'ye kadar olan dışbükey koloniler oluşturur ve soluk pembe kolonilerden açıkça ayırt edilebilir. stafilokok.

Cinsin mantarlarını izole etmek için besin ortamıAday(candida agar) (FSUE NPO Nutrient Media, Makhachkala). Candida cinsinin mantarlarının enfekte materyalden ve çevresel nesnelerden izolasyonu için tasarlanmıştır. Ortam otoklavlanamaz. Bu besiyerindeki Candida cinsine ait mantarlar, 37 °C'de 22...24 saatlik inkübasyonun ardından, 1...2 mm boyutunda pürüzsüz veya dalgalı kenarlara sahip yoğun dışbükey veya kremsi kıvamda düz koloniler oluşturur.

Ortam, eşlik eden bakteriyel floranın (Escherichia coli, Proteus, stafilokok) büyümesini baskılar.

İdrarda enterobakterilerin izolasyonu ve ön tanımlanması için seçici agar(MacConkey agar analoğu) (FSUE NPO Nutrient Media). Enterobakterilerin idrardan izolasyonu ve ön tanımlanması için tavsiye edilir ve ayrıca gıda ürünleri, dışkı ve atık suyun bakteriyolojik incelemesi için de kullanılabilir.

Hazırlanan besiyeri kırmızı-kahverengi renkte, şeffaf ve hafif opaktır. Aşılamanın 37 °C'de 16...20 saatlik inkübasyonundan sonra, laktoz-negatif Salmonella şeffaf renksiz koloniler, laktoz-pozitif Escherichia - parlak kırmızı renkli koloniler oluşturur. Ortam, O-formunda renksiz izole koloniler şeklinde büyüyen proteazların "yoğunlaşmasını" bastırır. Stafilokokların büyümesi tamamen baskılanır.

Diğer grupların besin ortamları. Glikol ortamı(FSUE NPO Nutrient Media, Makhachkala; adını I.I. Mechnikov'dan alan JSC Biomed, Moskova). Tıbbi ve biyolojik preparatların sterilitesini kontrol etmek için tasarlanmıştır. Sonuçlar “İlaçların mikrobiyolojik saflık açısından test edilmesi” talimatına uygun olarak kaydedilir.

Besin ortamı No. 1 ve 2, FSUE NPO Besin Ortamı (Makhachkala) ve FSUE Allergen (Stavropol) tarafından üretilir.

Mikrobiyal kontaminasyonu kontrol etmek için besin ortamı, kuru No. 1. Steril olmayan ilaçların ve gıda ürünlerinin toplam kontaminasyonunu belirlemek için kullanılır.

Mikrobiyal kontaminasyonu kontrol etmek için besin ortamı (Saburo-agar) No. 2. Mantar yetiştirmek ve steril olmayan tıbbi ortamlardaki ve diğer çevresel nesnelerdeki mantar içeriğini belirlemek için önerilir.

Eritritol agar Ve eritritol suyu. Brucella'nın izolasyonu ve ekimi için tasarlanmıştır.

Şarbon mikrobunun izolasyonu ve yetiştirilmesi için besin ortamı.

Ketoğlutar agar. Tularemiye neden olan ajanın izole edilmesi ve kültürlenmesinde etkilidir.

AGV ortamı. Disk difüzyon yöntemini kullanarak mikroorganizmaların antibiyotiklere duyarlılığını belirlemek için önerilmiştir.

Fırsatçı bakterilerin antibiyotik duyarlılığının hızlı belirlenmesi için besin ortamı. Gram negatif fırsatçı mikroorganizmaların antibiyotik duyarlılığının hızlı belirlenmesi için önerilmektedir. Sonuçlar 4…5 saat sonra dikkate alınabilir.

Yerli endüstri tarafından üretilen kuru besin ortamı yelpazesi sürekli genişlemektedir. Veteriner laboratuvarlarının günlük işlerinde kullanılabileceklerden sadece az sayıda verilmiştir. Ek olarak, şu anda ithal besin ortamlarını satın almak da mümkündür. İlgili katalogları sipariş ederek ticari adları bulabilirsiniz. Bununla birlikte, Rusya Federasyonu'nun veteriner laboratuvarlarında tanıtılması ve yaygın kullanımı, oldukça yüksek maliyetlerinden dolayı ancak uzun vadede mümkündür. Ayrıca bu bölümde Fizik Bilimsel Araştırma Merkezi (St. Petersburg) tarafından üretilen oldukça iyi kalitede hazır ticari besin ortamlarından bahsedilmemektedir. 400 ml'lik şişelerde paketlenir; raf ömrü 1 yıl. Medya, sahada bakteriyolojik çalışmalar yürütülürken kesinlikle faydalı olabilir.

Bir hata bulursanız lütfen metnin bir kısmını vurgulayın ve tıklayın. Ctrl+Enter.