Mediile nutritive în microbiologie sunt substraturi pe care sunt cultivate microorganisme și culturi de țesuturi. Sunt utilizate în scopuri de diagnostic, izolarea și studiul culturilor pure de microorganisme, producerea de vaccinuri și medicamente și în alte scopuri biologice, farmaceutice și medicale.

Clasificarea mediilor de cultură microbiologice

În microbiologie, mediile nutritive sunt împărțite în:
- medii de compozitie definita si nedefinita;
- naturale, semisintetice si sintetice;
- de bază, diagnostic, electiv;
- dens, semi-lichid, lichid, uscat, granular.

Mediile nutritive naturale sunt cele care se obțin din materiale naturale: sânge, carne, proteine, organe animale, extracte de plante și materiale vegetale. Exemple de astfel de medii includ bulion de carne, zer, must de bere, infuzii de fân, agar-agar, sânge și bilă. Mediile naturale se referă la medii cu o compoziție incertă, care în momente diferite pot avea cantități diferite de anumite componente.

Mediile semisintetice sunt de asemenea considerate medii cu compoziție incertă. Sunt preparate pe baza de medii nutritive naturale, dar acestora li se adauga substante care garanteaza reproducerea activa a culturilor. Culturile sunt cultivate pe medii semi-sintetice pentru a produce vitamine, aminoacizi și antibiotice pentru produsele farmaceutice industriale.

Mediile sintetice sunt preparate din ingrediente de compoziție cunoscută, în concentrații și rapoarte cunoscute, prin urmare aceste medii aparțin mediilor cu o anumită compoziție. Cu ajutorul lor, ei studiază metabolismul microorganismelor, proprietățile lor biologice și fiziologice și posibilitatea de a obține substanțe care suprimă sau, dimpotrivă, stimulează dezvoltarea acestora.

Medii de cultură de bază, elective și diagnostice

Mediile de bază sunt utilizate pentru cultivarea diferitelor culturi microbiene, precum și ca bază pentru obținerea mediilor elective și de diagnostic. Mediile de bază, de exemplu, includ bulion de carne, agar de carne, must și bulion Hottinger. Pentru diferite culturi, unele componente sunt adăugate la mediul de bază pentru a stimula creșterea - acestea pot fi vitamine, aminoacizi și extracte naturale. Astfel, agentul cauzal al tusei convulsive este crescut pe un mediu cu adaos de sânge.

Medii elective - medii pentru cultivarea selectivă (selectivă) a culturilor biologice. Compoziția mediului este selectată astfel încât să fie optimă pentru o specie sau un grup de bacterii strâns înrudite și să suprime dezvoltarea bacteriilor din alte specii. De exemplu, adăugarea de clorură de sodiu în mediu într-o anumită concentrație inhibă creșterea tuturor bacteriilor cu excepția stafilococilor. Cu ajutorul culturilor elective, se obțin culturi pure pentru înmulțire și acumulare ulterioară.

Mijloacele de diagnosticare sunt utilizate pentru identificarea microorganismelor. Pe baza modificărilor mediului și compoziției sale chimice (modificări ale culorii mediului, apariția bulelor de gaz etc.), se determină tipul de bacterie. La astfel de medii se adaugă adesea coloranți indicatori chimici, cum ar fi violet cristal, verde malachit, albastru de metilen, fusin și alții. Ele ajută la separarea culturilor apropiate. De exemplu, în mediul Endo roz, nuanțat cu fusina, E. coli formează colonii roșii, iar coloniile de bacterii tifoide și dizenterie sunt incolore.

Există un număr semnificativ de medii nutritive utilizate pentru cultivarea și întreținerea (conservarea) microorganismelor. În microbiologie, un mediu nutritiv este un mediu care conține diverși compuși de compoziție complexă sau simplă care sunt utilizați pentru propagarea microorganismelor în condiții de laborator sau industriale. În 1930, au fost clasificate cel puțin două mii de articole, dar numărul de ingrediente care sunt componentele lor integrale este relativ mic, iar compozițiile lor sunt create pe anumite principii generale. Pentru ca orice bacterie să se reproducă, este necesar să se asigure un mediu biofizic adecvat și componente nutriționale biochimice. Orice mediu nutritiv trebuie să îndeplinească următoarele cerințe: să conțină toți nutrienții necesari creșterii într-o formă ușor digerabilă; au umiditate, vâscozitate, pH optime, să fie izotonice, echilibrate cu capacitate tampon mare și, dacă este posibil, transparente. Pentru creșterea bacteriilor autotrofe, cerințele nutritive sunt destul de simple: apă, dioxid de carbon și săruri anorganice adecvate. De exemplu, bacteriile din gen Nitrobacter asimilează CO 2 și obțin energie prin oxidarea nitriților în nitrați. Bacteriile heterotrofe obțin energie din oxidarea (disimilarea) compușilor cu carbon redus.

Bacteriile heterotrofe folosesc compuși organici în două scopuri: 1) ca sursă de energie; în acest caz, materia organică este oxidată sau descompusă cu eliberarea de energie și formarea unui număr de produse finite precum CO 2, acizi organici etc.; 2) ca substraturi care sunt asimilate direct în formarea componentelor celulare sau pentru sinteza acestora în reacții care necesită energie. Asa de, E coli capabil să crească pe un mediu simplu care conține doar glucoză și săruri anorganice. Bacteriile lactice cresc în medii complexe care conțin ca aditivi o serie de compuși organici (vitamine, aminoacizi etc.), pe care celulele nu sunt capabile să-i sintetizeze singure. Se numesc astfel de conexiuni factori de crestere. Se numesc organismele care necesită adăugarea lor la mediul de creștere auxotrofice prin conexiunile corespunzătoare. Un alt grup de organisme, capabile să crească pe medii simple care conțin o sursă de carbon și energie, precum și un set de nutrienți de bază, se numește prototrofic. De asemenea, trebuie luat în considerare faptul că în natură există bacterii care sunt capabile să se înmulțească în locuri cu un flux scăzut de carbon alimentar - până la 0,1 mg/l pe zi. Au primit numele oligotrofice, grupul opus pentru ei sunt bacteriile copiotrof– capabil să crească pe substraturi alimentare bogate.

Alegerea mediului nutritiv depinde în mare măsură de obiectivele experimentului, iar clasificarea existentă a mediilor nutritive ia în considerare caracteristicile următoarelor caracteristici ale acestora.

După compoziție mediile nutritive se împart în naturalȘi sintetic. Mediile naturale sunt cele care constau din produse de origine vegetală sau animală care au o compoziție chimică incertă. Exemple de medii nutritive de acest tip sunt mediile care sunt un amestec de produse de degradare a proteinelor (cazeina, mușchi de mamifere) formate în timpul hidrolizei lor. Hidroliza acidă (HCl) a proteinelor este utilizată pentru a prepara hidrolizate complete. Acțiunea enzimelor precum tripsina, pancreatina, papaina duce doar la hidroliza parțială (incompletă) a proteinelor, ducând la formarea peptone. De regulă, microorganismele cresc mai bine pe medii nutritive peptonice decât pe medii nutritive preparate din hidrolizate complete sau amestecuri de aminoacizi. Hidroliza enzimatică păstrează probabil factorii de creștere labili. În plus, multe microorganisme cresc mai bine pe medii care conțin peptide mici, deoarece le pot absorbi direct, în timp ce aminoacizii lipsă nu pot. De obicei, în compoziția unui astfel de mediu, un hidrolizat proteic enzimatic asigură nevoia de surse de azot, cum ar fi aminoacizi, carbohidrați (glucoză), este folosit ca sursă de carbon și energie, sărurile satisfac nevoile bacteriilor pentru ioni anorganici, iar extractul de drojdie asigură necesarul de vitamine. Mediile nutritive cu compoziție incertă includ și mediile obținute din materii prime vegetale: agar de cartofi, agar de roșii, decocturi de cereale, drojdie, must de bere, infuzii de fân și paie etc. Scopul principal al acestor medii nutritive este izolarea, cultivarea, producția. a biomasei şi menţinerea culturilor microbiene.

Mediile cu compoziție incertă includ și mediile semi sintetic. Compuși cunoscuți sunt introduși într-un astfel de mediu în mod clar necesar; și se adaugă cantități mici de drojdie sau extract de porumb (sau orice alt produs natural) pentru a satisface nevoile de creștere necunoscute. Astfel de medii sunt adesea folosite în cazul cultivării industriale a obiectelor biologice pentru a obține produse metabolice.

Medii sintetice– acestea sunt medii cu o anumită compoziție, reprezentate de compuși chimici puri luați în concentrații și rapoarte precis specificate ale elementelor individuale. Componentele obligatorii ale unor astfel de medii sunt compușii anorganici (săruri) și substanțele care conțin carbon și azot (reprezentanții tipici sunt glucoza și (NH 4) 2 SO 4. Soluțiile tampon și compușii chelatori sunt adesea adăugați în astfel de medii. Organismele auxotrofe cresc pe astfel de medii. medii numai cu adăugarea factorilor de creștere corespunzători. Scopul principal al unor astfel de medii nutritive este de a studia caracteristicile fiziologiei și metabolismului microorganismelor, de a izola recombinante genetice etc.

După scop mediile sunt împărțite în electivăȘi diagnostic diferenţial. Mediile selective asigură dezvoltarea preferenţială a unuia sau a unui întreg grup fiziologic de microorganisme. De exemplu, pentru izolarea preferenţială a bacteriilor gram-negative, poate fi suficient să se adauge coloranţi trifenilmetan (violet cristal, verde malachit etc.) la mediul nutritiv. Pentru a izola stafilococi, în mediu se poate adăuga clorură de sodiu la o concentrație de 7,5%. La această concentrație, creșterea altor bacterii este inhibată. Mediile elective sunt utilizate în prima etapă a izolării unei culturi bacteriene pure, adică la obținerea unei culturi de îmbogățire.

Mediile de diagnostic diferențial sunt folosite pentru a identifica rapid specii de microorganisme strâns înrudite, pentru a determina speciile, în bacteriologia clinică etc. Principiul construirii mediilor de diagnostic diferențial se bazează pe faptul că diferitele tipuri de bacterii diferă în activitatea biochimică și au o activitate diferită. set de enzime care descompun substraturile incluse în mediul nutritiv.

Mediul de diagnostic diferenţial include:

a) principalul mediu nutritiv care asigură proliferarea bacteriilor;

b) un anumit substrat chimic, relația cu care este un semn de diagnostic pentru un anumit microorganism;

c) un indicator de culoare, o schimbare a culorii indică o reacție biochimică și prezența unui anumit sistem enzimatic în microorganismul studiat.

De exemplu, Mediul Endo vă permite să distingeți clonele care fermentează lactoza de clonele care nu au această proprietate. Componentele principale ale acestui mediu sunt agar nutritiv (peptonă), carbohidrați și fucsina bazică decolorată cu sulfit (reactiv Schiff). Mediul nutritiv inițial este colorat în roz. Microorganismele care nu fermentează lactoza formează colonii incolore. Când lactoza este fermentată până la acetaldehidă, aceasta din urmă reacţionează cu sulfitul şi se dezvoltă culoarea roşie a coloniilor corespunzătoare.

Mediu cu eozină și albastru de metilen (mediu Levine) conține eozină și albastru de metilen ca indicatori și este colorat inițial în negru-albastru. Celulele care desfășoară fermentație formează colonii vopsite în negru cu un luciu metalic, iar coloniile care nu au această proprietate sunt incolore. Astfel de modificări de culoare apar deoarece coloranții sunt prezenți în mediu nu ca compuși independenți, ci sub formă de complexe cu substanțe din mediul nutritiv. La valori scăzute ale pH-ului, acești complecși precipită, dar coloranții inițiali sunt solubili în aceste condiții; la pH ridicat, complecșii de colorant sunt incolori, în timp ce albastrul de metilen capătă o culoare albastră. Acest mediu face posibilă diferențierea bacteriilor din gen Escherichia din bacterii din gen Proteus.

Prin consistență mediile pot fi lichid, semi-lichid, solid, granular. Mediile nutritive lichide sunt obținute prin dizolvarea unui anumit set necesar de nutrienți, macro și microelemente în apă. În compoziție, acestea pot fi fie naturale, fie sintetice. Creșterea microorganismelor într-un mediu lichid poate avea loc în periodic (inchis) sistem, în acest caz, după inocularea mediului, nu există nicio adăugare sau îndepărtare a altor componente decât faza gazoasă (sistem închis). La flux (continuu) Cultivarea se caracterizează printr-o aprovizionare constantă cu componente nutritive proaspete la o rată egală cu rata de îndepărtare a mediului (sistem deschis).

Mediile în stare solidă sub formă de geluri dense au fost folosite în bacteriologie încă de pe vremea lui R. Koch. Cel mai important avantaj al utilizării mediilor solide este că pot crește microorganisme sub formă de colonii formate din celule individuale ale populației.

Pregătirea solid mediul nutritiv se realizează prin adăugarea anumitor substanțe de etanșare la mediile lichide, care pot fi agar, gelatină, silicagel, caragenan. Cel mai obișnuit dintre etanșanți este agar - o polizaharidă izolată din alge roșii și constând din două polizaharide - agaroză (70%) și agaropectină. Are o serie de proprietăți utile, în special: 1) este capabil să formeze geluri în apă;

2) se topește la o temperatură de 100 °C și se solidifică la 45 °C; 3) nu se descompune sub influența enzimelor majorității tipurilor de microorganisme; 4) substanțele termolabile și microorganismele vii nu sunt distruse atunci când sunt adăugate la agar topit încălzit la 45 ° C, dacă amestecul este răcit imediat; 5) gelurile de agar au un grad ridicat de transparență; 6) concentrații utilizate în mod obișnuit
1,5 - 2,0% sunt relativ scăzute, iar utilizarea lor este economică.

Gelatina, o proteină făcută din piele și oase, este acum folosită în scopuri speciale deoarece gelul pe care îl formează se topește la temperaturi de aproximativ 25 - 30 °C. În plus, gelatina este lichefiată de enzimele proteolitice ale multor microorganisme. Concentrația de „îngroșare” a gelatinei este de 17 – 20%.

Gelul de silice se numește dioxid de siliciu (SiO2). Solul său steril este preparat dintr-o soluție de silicat de sodiu și înainte de utilizare, pentru a provoca formarea unui gel, i se adaugă un mediu nutritiv care conține electroliți. Mediu pe bază de silicagel
(1,5 – 2,0%) se folosește pentru obținerea de culturi de bacterii autotrofe, deoarece în mediu nu există substanțe organice. Prin adăugarea diferitelor substanțe organice la astfel de medii minerale, este posibil să se studieze capacitatea bacteriilor heterotrofe de a le folosi ca unice surse de carbon. Mediile de silicagel pot fi, de asemenea, folosite pentru a determina necesarul de vitamine ale bacteriilor.

Caragenanul („gelatina vegetală”) se obține prin extracție din anumite tipuri de alge roșii. Sărurile de potasiu ale unor tipuri de caragenani sunt capabile să formeze geluri dense (2%) transparente, care pot fi înlocuitori pentru agar. Caragenanul este mult mai ieftin decât agar și nu este distrus de majoritatea tipurilor de bacterii. Cu toate acestea, mediul preparat trebuie turnat la o temperatură ridicată - 55 - 60 ° C.

Semilichid mediile conțin o substanță formatoare de gel în concentrație scăzută (0,3 - 0,7%) și au o consistență moale asemănătoare jeleului. Astfel de medii sunt potrivite pentru studiul motilității celulare și chemotaxia și cultivarea microaerofililor.

În vrac mediile sunt o masă de materii prime mai mult sau mai puțin zdrobite și umezite (cel mai adesea, materiale vegetale). Scopul lor principal este folosirea lor în industria alimentară (producerea sosului de soia sau a vodcăi de orez), agricultură (furaje însilozate) etc.

În practica bacteriologică se folosesc cel mai des uscat medii nutritive care sunt produse la scară industrială - hidrolizate triptice de produse nealimentare ieftine (deșeuri de pește, făină de carne și oase, cazeină tehnică) și agar nutritiv. Mediile uscate pot fi depozitate pentru o lungă perioadă de timp, sunt convenabile pentru transport și au o compoziție relativ standard.

MGAVMiB im. K.I. Scriabin

Departamentul de Microbiologie şi

imunologie

Șef Burlakova G.I.

ABSTRACT

Medii nutritive și clasificarea acestora

Completat de un student

Anul II grupa 1 FVM

Kurinnova S.V.

Moscova-2007

1. Introducere…………………………………………………………………….2

2. Cultivarea microorganismelor……………………………...2

3. Clasificarea mediilor nutritive și metodele de preparare a acestora………3

4. Cultivarea ciupercilor………………………………………………………..7

5. Concluzie……………………………………………………………………………………………..8

6. Lista literaturii utilizate…………………………………9

1. Introducere.

Microbii, ca orice alte organisme vii, își desfășoară dezvoltarea și creșterea, reînnoirea materialelor de construcție și furnizarea de procese energetice datorită schimbului constant de substanțe cu mediul extern din jurul lor, de exemplu. prin alimentație și respirație. În funcție de tipul de nutriție, microbii sunt împărțiți în autotrofi(capabil să asimileze carbonul din CO 2, precum și azotul molecular din aer și mineralele prin chimio- sau fotosinteză) și heterotrofi(capabil să asimileze carbonul și alte substanțe numai din compuși organici gata preparati). Autotrofele includ în principal multe bacterii din sol, iar heterotrofele (paratotrofe) includ microbii bolilor infecțioase ale animalelor și plantelor.

Tipurile de nutriție, respirația (aerobi și anaerobi), inducerea și activitatea enzimelor, toxinelor, pigmenților, creșterea și reproducerea sunt principalii parametri fiziologici care sunt luați în considerare la elaborarea compoziției mediilor nutritive și a condițiilor de cultivare a microbilor in vitro.

2. Cultivarea microorganismelor .

Cultivarea microorganismelor înseamnă crearea artificială a condițiilor pentru ele crestere si reproducere procese in vitro, interconectate, dar nu neapărat conjugate. Creșterea și reproducerea este un proces ciclic în 4 faze (latentă, creștere logaritmică, staționară, moarte). Perioada dintre formarea celulelor noi și divizarea acestora se numește perioada de generare, a cărei durată, pe lângă caracteristicile microbilor, este influențată de compoziția mediului nutritiv. Formele coloniilor de microbi diferiți pe un mediu nutritiv cu aceeași compoziție diferă, ceea ce este luat în considerare la diferențierea lor.

Cultivarea in vitro necesită substraturi pe care microorganismele le pot folosi ca nutrienți pentru creșterea și reproducerea lor. Astfel de substraturi nutritive - dense sau lichide - sunt numite culturale sau nutriționale miercuri.În cele mai multe cazuri, în laboratoarele de microbiologie, microorganismele sunt cultivate in vitro, adică. în baloane de sticlă, eprubete și alte vase.

Există o serie de cerințe de bază pentru orice mediu nutritiv:

1). Sterilitate și, dacă este posibil, transparență.

2). La compilarea mediilor nutritive se ține cont de nevoia microorganismelor pentru nutrienți (factori biochimici necesari vieții celulelor - surse de energie, C, N, S, precum și ioni anorganici - disponibili pentru asimilarea de către microorganisme).

3). Valorile optime ale unui număr de indicatori biofizici: concentrația ionilor de hidrogen (pH), potențialul de oxidare-reducere (Eh), activitatea apei ( un w), presiune osmotica.

3. Clasificarea mediilor nutritive și metodele de preparare a acestora.

În funcție de speciile de microbi și de scopul cultivării, consistența și compoziția mediilor de cultură sunt diferite și variază foarte mult. Se numește un mediu care îndeplinește caracteristicile biologice ale unui microbi și asigură creșterea și reproducerea acestuia deplin, neavând nicio componentă necesară activității sale de viață – rară .

Mediile nutritive sunt clasificate în funcție de:

Compoziția chimică și componentele inițiale;

Consecvență;

· scopul propus.

În funcție de compoziția chimică și componentele de pornire Se disting următoarele tipuri de medii nutritive:

- medii cu compoziție chimică incertă(medii naturale sau naturale) sunt medii care constau din produse de origine animală sau vegetală, având o compoziție chimică complexă, incertă:

1) medii de origine animală (produse inițiale - carne, pește, ouă, lapte etc.)

2) medii de origine vegetală (produse inițiale - soia, mazăre, cartofi, morcovi etc.)

Microorganismele se dezvoltă bine în mediile naturale, dar aceste medii nu sunt potrivite pentru studii controlate ale fiziologiei metabolismului microorganismelor și studii de diagnostic, deoarece nu permit luarea în considerare a nevoilor unui număr de componente ale mediului și, pe de altă parte, , determinarea substantelor produse de microorganisme. Mediile naturale sunt folosite în principal pentru întreținerea culturilor de microorganisme, acumularea biomasei acestora și în scopuri de diagnostic.

"Semi sintetic" mediu inconjurator (hidrolizat), legate de medii cu compoziție incertă. Aceștia, împreună cu compușii de natură chimică cunoscută, includ substanțe cu compoziție incertă. Sunt utilizate în practica microbiologică pentru obținerea de vitamine, antibiotice, aminoacizi și alte deșeuri ale microorganismelor (produse de hidroliză a cărnii, laptelui, drojdiei, sângelui și altor substanțe proteice).

Medii cu compoziție chimică cunoscută (sintetice)– conțin compuși chimici cunoscuți (săruri, carbohidrați, aminoacizi, vitamine etc.) într-un raport cantitativ optim. Mediile sintetice pot fi simple în compoziție sau au un set relativ mare de componente. Ele sunt utilizate atunci când masa celulară crescută trebuie să fie eliberată maxim de compuși organici de balast care fac parte din mediile convenționale, de exemplu, atunci când se obțin alergeni de diagnostic sau când se studiază nevoile metabolice ale unui microorganism pentru un anumit compus chimic. În plus, cercetătorii încearcă să determine cerințele minime de nutrienți pentru fiecare microorganism și, pe baza acestora, să creeze minim un mediu care conţine numai compuşii chimici necesari reproducerii lui.

Prin consistență mediile nutritive se diferențiază în solide, semilichide și lichide.

Medii de cultură lichide. Preparat folosind extracte, hidrolizate, soluții de produse inițiale.

Medii nutritive semi-lichide și solide . Sunt folosite pentru a număra numărul de bacterii, a le izola sub formă de cultură „pură” și în alte scopuri. Consistența necesară se dă mediului prin adăugarea diverșilor etanșanți - agar-agar sau gelatină.

Agar-agar (jeleul Malay) este un coloid vegetal obținut din anumite alge marine. Se compune în principal din polizaharide cu o cantitate nesemnificativă de substanțe azotate. Pentru a obține medii dense se adaugă în cantitate de 1,5-2%, semi-lichid – 0,3-0,7%.

Gelatina este un produs acid, care conține azot, obținut prin fierberea oaselor și cartilajului. De obicei, la mediul de cultură se adaugă 10-20% gelatină. Dar o serie de bacterii secretă enzime proteolitice care descompun gelatina, ceea ce o face incomod pentru utilizare.

După scop distinge:

A).Medii utilizate în mod obișnuit (de bază). .

Sunt folosite pentru cultivarea de microorganisme relativ nepretențioase.

Apă de carne: Preparare - carnea tocată se toarnă cu apă de la robinet 1:2, se fierbe timp de 1 oră, apoi se filtrează, se completează cu apă până la volumul inițial, se toarnă în recipiente, se închid ermetic și se sterilizează prin autoclavare la 120 O C timp de 20 de minute.

Digestul Hottinger este preparat din deșeurile de carne prin hidroliză triptică. Se taie grăsimea, fascia, tendoanele, se toarnă cu apă clocotită 1:2, se fierb, se răcește la 45 ° C, se adaugă pancreatină, se alcalinizează cu soluție de carbonat de sodiu, se agită, se adaugă cloroform, se închide și se păstrează la loc cald timp de 10 zile. .

Bulion de carne-peptonă (MPB). La gătit se folosește bulion de carne. La 1 litru de bulion de carne adăugați 5-10 g de peptonă (primul produs al hidrolizei proteinelor cu greutate moleculară mare) pentru a crește conținutul de calorii al mediului și 5 g de NaCI pentru a crea activitate osmotică. Apoi se stabilește o reacție neutră sau ușor alcalină a mediului. A fierbe. Se filtrează printr-un filtru de hârtie, se toarnă în baloane, eprubete și se sterilizează prin autoclavare la 120 0 C timp de 20 de minute.

Agar peptonă de carne (MPA): adăugați 15-20 g de agar-agar tocat fin la 1 litru de MPB. Mediul se încălzește până se dizolvă agarul, mediul este ușor alcalin cu o soluție de Na 2 CO 3 20%, se filtrează și se toarnă în eprubete prin pâlnii, se sterilizează prin autoclavare la 120 0 20 min.

Gelatina din carne-peptonă (MPG). Gelatina se adaugă la 1 litru de MPB la o concentrație finală de 10-20%, se încălzește, se stabilește un pH ușor alcalin, se fierbe, se filtrează, se toarnă în eprubete și se sterilizează într-un cazan Koch cu abur curgător timp de 3 zile sau o dată prin autoclavare la 120 0 C la 1 atm. timp de 20 de minute.

Agar peptonă semi-lichid pe carne (PZA) preparat ca MPA, dar se adauga 0,25% agar, se fierbe pana se topeste, se stabileste pH-ul necesar, se filtreaza fierbinte si se sterilizeaza prin autoclavare.

bulionul lui Hottinger : Digestul principal al lui Hottinger este diluat cu apă 1:5 (1:8), se adaugă 0,5% NaСI, 0,1 g de fosfat acid de potasiu, pH-ul este ajustat, se fierbe timp de 150-20 de minute, se filtrează, se toarnă în recipiente și se sterilizează prin autoclavare la 120 0 20 min.

Agar Hottinger preparat prin adăugarea a 2% agar-agar în bulionul Hottinger.

Bulion nutritiv conține: hidrolizat triptic de șprot – 10,05, NaCI – 4,95. 15 g din această pulbere de bulion se dizolvă în 1 litru de dist. Apa se fierbe 2 minute, se filtrează, se toarnă în recipiente și se sterilizează în autoclavă la 120 0 C timp de 20 de minute (Ph 7.3).

Medii de cultură- preparate biologice utilizate pentru creșterea microorganismelor și studierea proprietăților culturale, biochimice, antigenice, fagolizabilitate și sensibilitate la antibiotice.

Mediile nutritive sunt utilizate pe scară largă în practica de laborator pentru diagnosticarea bolilor infecțioase, precum și pentru monitorizarea sterilității medicamentelor. Pentru ca microorganismele să crească și să se dezvolte, mediile nutritive trebuie să îndeplinească următoarele cerințe.

1. Compoziție optimă. Acestea trebuie să conțină toate componentele necesare pentru dezvoltarea microbilor: proteine, vitamine, carbohidrați, minerale.

2. Valoarea optimă a pH-ului. Majoritatea microorganismelor se dezvoltă la pH 7,2...7,4.

3. Sterilitate. Este necesar pentru a evita competiția între microbi.

4. Transparență. Pentru a studia mai bine natura coloniilor microbiene.

5. Umiditate. Nutriția și respirația sunt efectuate prin osmoză și difuzie, astfel încât mediile nutritive trebuie să fie ușor umede.

Clasificarea mass-media. Mediile nutritive sunt împărțite în funcție de următoarele caracteristici.

1. După consistență: a) dens (solid) - agar 1,2...2% (agar peptonă de carne); b) semi-lichid - agar 0,2...0,3% (agar semi-lichid); c) lichid - bulion de carne-peptonă.

Pentru a da mediilor o consistență densă sau semi-lichidă, cel mai des se utilizează agar-agar, o polizaharidă izolată din alge marine. Agarul este capabil să formeze un gel în apă care se topește la 80...100 °C și se întărește la 37...40 °C. Rezistența agarului la acțiunea de lichefiere a majorității microorganismelor, precum și capacitatea de a forma jeleuri puternice, au condus la utilizarea pe scară largă în bacteriologie.

2. După origine: a) artificială: origine animală (MPA, MPB) și vegetală (mus de bere); b) naturală: de origine animală (sânge, lapte) și vegetală (bucăți de cartofi).

3. După compoziţie: a) proteină; b) fără proteine; c) minerale.

4. După scop: a) medii de cultură (simple, speciale); b) medii de îmbogățire (pentru acumularea de microorganisme la concentrația scăzută a acestora în materialul sursă); c) medii de conservare pentru însămânțarea primară și transportul agenților patogeni; d) medii de identificare (diagnostic diferenţial) - microbii de un singur tip formează colonii care diferă ca aspect de coloniile altor microorganisme.

Dacă materialul este ușor contaminat cu microfloră străină, atunci medii simple de uz general (MPA) sunt utilizate pentru a izola culturile; în cazul contaminării puternice cu saprofite, se folosesc medii speciale: selective (pentru anumite specii) și diagnostic diferențial (pentru a facilita identificarea). ).

Caracteristicile media. Medii de transport conservante(amestec de glicerol, tampon fosfat, mediu tioglicolat pentru anaerobi etc.). Ele previn moartea microbilor patogeni și suprimă creșterea saprofitelor.

Medii de îmbogățire(bulion selectiv, bulion de bilă, mediu Muller, Rappoport, mediu Kaufman, apă peptonă alcalină). Sunt folosite pentru a acumula un anumit grup de bacterii prin crearea unor condiții optime pentru unele specii și nefavorabile pentru altele. Cei mai des utilizați sunt diverși coloranți și substanțe chimice - săruri, acizi biliari, telurit de potasiu, antibiotice, fuchsin etc.

Elective (medii selective). Ele oferă condiții mai favorabile pentru microbul izolat, în timp ce suprimă microflora însoțitoare. De exemplu, mediul Ploskirev și agarul cu sare sunt utilizate pentru însămânțarea primară a materialului sau pentru subcultură din medii de conservare sau de îmbogățire pentru a obține o cultură pură.

Medii de diagnostic diferențial. Conceput pentru a determina speciile microbului studiat, pe baza caracteristicilor metabolismului acestuia.

Medii pentru identificarea capacității proteolitice și hemolitice a microbilor. Conțin substanțe proteice (sânge, lapte, gelatină etc.).

Medii cu substanțe chimice indiferente. Acestea servesc ca sursă de nutriție pentru unele tipuri de microbi și nu sunt digerabile de alte tipuri (agar citrat Simmons).

Medii cu carbohidrați(monozaharide, dizaharide, polizaharide), alcooli polihidroxici (sorbitol, manitol), glicozide (salicină, inozitol) pentru a detecta enzimele corespunzătoare.

Medii pentru determinarea capacității de reducere a microbilor. Acestea conțin vopsele care se decolorează la reducere (agar Omelyansky cu indigo carmin), precum și nitrați pentru a determina capacitatea de denitrificare a microorganismelor.

Medii de cultură uscate. Laboratoarele bacteriologice folosesc în principal medii uscate comerciale. Sunt medii nutritive gata preparate, uscate și zdrobite până la o stare de pulbere. Mediile uscate au o serie de avantaje față de mediile produse în mod convențional: pot fi depozitate pentru o perioadă lungă de timp într-o cameră uscată, întunecată, într-un recipient închis ermetic, sunt transportabile, ușor de utilizat și standard, ceea ce facilitează obținerea de rezultate comparabile în timpul cercetărilor bacteriologice.

Mediile solide constau dintr-o bază nutritivă, agar-agar, indicatori și alte substanțe organice și minerale care îmbunătățesc creșterea unor microorganisme și inhibă creșterea altor microorganisme.

Diferite surse de proteine ​​sunt folosite ca bază nutrițională pentru mediile uscate. În străinătate, mediile uscate se fac cel mai adesea folosind bulion de carne-peptonă, care necesită un consum mare de carne de vită. În țara noastră, hidrolizatele de șprot, cazeină și drojdie furajeră sunt folosite ca sursă de proteine.

Pentru ambalarea mediilor nutritive uscate se folosesc borcane de sticlă portocalie (250 g), borcane din polietilenă (250, 500, 1000 g), precum și pungi de hârtie laminată cu trei straturi (50...200 g). Termenul de valabilitate in borcane din sticla si polietilena este de 2...4 ani, iar in pungi din laminat cu trei straturi - de la 1 an la 4 ani.

Industria autohtonă produce mai mult de 120 de tipuri de diferite medii nutritive uscate. Cei mai mari producători sunt Întreprinderea Unitară Federală de Stat NPO „Nutrient Media” (Makhachkala) și Centrul de Cercetare de Stat pentru Științe Medicale (Obolensk) (M. M. Medzhidov, Manualul Mediilor Nutritive Microbiologice. - M.: Medicină, 2003). Următoarele medii sunt cel mai des folosite în laboratoarele practice.

Medii uscate de diagnostic diferenţial. Dacă mai devreme în practica laboratoarelor bacteriologice veterinare, mediile Hiss care conțin un singur carbohidrat erau utilizate pe scară largă pentru identificarea microorganismelor, atunci în ultima perioadă au devenit din ce în ce mai utilizate medii care permit diferențierea microorganismelor prin două sau trei caracteristici.

Mediul Rossel(FSUE NPO „Nutrient Media”). Proiectat pentru identificarea primară a enterobacteriilor. Mediul preparat este verde. După însămânțarea culturii, după 18...20 ore de incubare la 37 °C, fermentația lactozei se apreciază după apariția unei culori galbene în partea înclinată a agarului, iar fermentația glucozei se apreciază după culoarea galbenă a agarului. coloană. Formarea gazului este indicată de apariția de bule și rupturi în agar. Dacă microorganismul nu fermentează glucoza și lactoza, mediul rămâne verde sau devine albastru.

Medium lui Kligler(FSUE NPO Nutrient Media, Makhachkala și JSC Biomed numite după I.I. Mechnikov, Moscova). Proiectat pentru identificarea primară a enterobacteriilor. Mediul preparat este roșu. Este necesar să cosiți astfel încât să rămână o coloană de 2,5...3 cm înălțime.Semănatul se face mai întâi în grosimea mediului, apoi de-a lungul suprafeței teșite. După 18…20 de ore de incubare la 37 °C, rezultatele sunt luate în considerare. Dacă microorganismul fermentează lactoza, partea înclinată a agarului devine galbenă. Când glucoza este fermentată, mediul devine galben în coloană. Odată cu formarea de gaz - apariția bulelor și rupturi ale agarului. Dacă se formează hidrogen sulfurat, mediul devine negru. Producția de indol este determinată folosind hârtii indicatoare speciale.

Agar cu dublu strat fier-glucosolactoză cu uree. Mediul lui Olkenitsky (FSUE NPO „Nutrient Media”). Aceste medii permit bacteriilor să fie identificate prin capacitatea lor de a fermenta glucoza și lactoza, de a produce hidrogen sulfurat și de a descompune ureea. Instrucțiuni detaliate privind prepararea, metoda de inoculare a microorganismelor și înregistrarea rezultatelor pot fi găsite în „Manualul de mediu nutritiv microbiologic” de M. M. Medzhidov.

Medii nutritive elective uscate. Agar sare selectivă(SA) (FSUE NPO „Nutrient Media” și FSUE „Allergen”, Stavropol). Proiectat pentru a izola stafilococii din materialul de testat. Poate servi ca bază pentru prepararea agar-sare de gălbenuș sau agar-sare de lapte. La inocularea materialului pe SA, după 48 de ore de incubare la 37 °C, stafilococii cresc sub formă de colonii rotunde cu diametrul de 2...4 mm.

Mediu nutritiv selectiv pentru izolarea pneumococului(pneumococ-agar) (FSUE NPO „Nutrient Media”). Proiectat pentru izolarea selectivă a pneumococului din material patologic (sânge, spută, puroi). Mediul preparat este de culoare maro. La 24...48 de ore după inocularea materialului și incubarea acestuia la 36...38 °C în condiții de „vas cu lumânare”, pneumococul formează pe mediu colonii convexe de până la 1 mm în dimensiune, care se disting clar de coloniile roz pal de stafilococ.

Mediu nutritiv pentru izolarea ciupercilor din genCandida(Agar Candida) (FSUE NPO Nutrient Media, Makhachkala). Conceput pentru izolarea ciupercilor din genul Candida de materialul infectat și obiectele din mediu. Mediul nu este autoclavabil. Ciupercile din genul Candida pe acest mediu după 22...24 de ore de incubare la 37 °C formează colonii dense, convexe sau plate, de consistență cremoasă, cu margini netede sau ondulate de 1...2 mm.

Mediul suprimă creșterea florei bacteriene însoțitoare (Escherichia coli, Proteus, stafilococ).

Agar selectiv pentru izolarea și identificarea preliminară a enterobacteriilor în urină(analog de agar MacConkey) (FSUE NPO Nutrient Media). Este recomandat pentru izolarea și identificarea preliminară a enterobacteriilor din urină și poate fi folosit și pentru examinarea bacteriologică a produselor alimentare, fecalelor și apelor uzate.

Mediul preparat este de culoare roșu-brun, transparent, cu ușoară opalescență. După 16...20 ore de incubare a inoculării la 37 °C, Salmonella lactoză negativă formează colonii transparente incolore, Escherichia lactoză pozitivă - colonii de culoare purpurie strălucitoare. Mediul suprimă „roiul” de protee, care cresc sub formă de colonii izolate incolore în formă O. Creșterea stafilococilor este complet suprimată.

Medii nutritive din alte grupe. Mediu glicol(FSUE NPO Nutrient Media, Makhachkala; JSC Biomed numit după I.I. Mechnikov, Moscova). Conceput pentru a controla sterilitatea preparatelor medicale și biologice. Rezultatele sunt înregistrate în conformitate cu instrucțiunile „Testarea medicamentelor pentru puritatea microbiologică”.

Mediile nutritive nr. 1 și 2 sunt produse de FSUE NPO Nutrient Media (Makhachkala) și FSUE Allergen (Stavropol).

Mediu nutritiv pentru controlul contaminării microbiene, uscat nr. 1. Folosit pentru a determina contaminarea totală a medicamentelor nesterile și a produselor alimentare.

Mediu nutritiv pentru controlul contaminării microbiene (Saburo-agar) Nr. 2. Recomandat pentru cultivarea ciupercilor, precum și pentru determinarea conținutului de ciuperci în medii medicinale nesterile și alte obiecte de mediu.

Agar eritritolȘi bulion de eritritol. Conceput pentru izolarea și cultivarea Brucella.

Mediu nutritiv pentru izolarea și cultivarea microbilor antraxului.

Agar ketoglutar. Eficient pentru izolarea și cultivarea agentului cauzal al tularemiei.

Mediul AGV. Propus pentru determinarea sensibilității microorganismelor la antibiotice prin metoda difuziei pe disc.

Mediu nutritiv pentru determinarea rapidă a sensibilității la antibiotice a bacteriilor oportuniste. Propus pentru determinarea rapidă a sensibilității la antibiotice a microorganismelor oportuniste gram-negative. Rezultatele pot fi luate în considerare după 4…5 ore.

Gama de medii nutritive uscate produse de industria autohtonă este în continuă extindere. Sunt date doar un număr mic dintre cele care pot fi utilizate în munca zilnică a laboratoarelor veterinare. În plus, în prezent este posibil să achiziționați medii nutritive importate. Denumirile comerciale pot fi găsite prin comanda cataloagelor corespunzătoare. Cu toate acestea, introducerea și utilizarea pe scară largă a acestora în laboratoarele veterinare ale Federației Ruse este posibilă numai pe termen lung datorită costului lor destul de ridicat. În plus, acest capitol nu menționează medii nutritive comerciale gata preparate, de calitate destul de bună, produse de Centrul de Cercetare Științifică pentru Fizică (Sankt Petersburg). Sunt ambalate în sticle de 400 ml; termen de valabilitate 1 an. Cu siguranță mediile pot fi utile atunci când se efectuează lucrări bacteriologice în domeniu.

Dacă găsiți o eroare, evidențiați o bucată de text și faceți clic Ctrl+Enter.